Uma técnica eficiente de uma única pessoa para amostragem de leite de camundongos de laboratório
28 de março de 2025
Este artigo descreve como montar um dispositivo que pode ser usado para coletar leite de ratos de laboratório. Este dispositivo é acessível, portátil e permite a coleta de 0,1 a 0,5 mL de leite por uma pessoa treinada. Um protocolo de ordenha detalhado também está incluído.
Este estudo se concentra em melhorar as técnicas de amostragem de leite na pesquisa de lactação, particularmente em camundongos. Apresentamos um método que supera desafios como perda de amostras, volume limitado e processos trabalhosos, oferecendo uma solução simplificada para coleta de leite de roedores e uma ferramenta valiosa para pesquisadores da área. Um dos maiores desafios da realização de pesquisas em camundongos é seu pequeno tamanho, especialmente quando se trata de amostragem de biofluidos, como o leite.
É difícil obter volume suficiente sem agrupar amostras ou ter duas pessoas coletando-as manualmente, o que torna o processo menos prático em muitos casos. Nosso protocolo simplifica a coleta de leite, permitindo que uma pessoa colete volume suficiente em menos de 10 minutos usando ferramentas de laboratório prontamente disponíveis. Ao contrário de outros métodos, ele minimiza a perda de amostra com sucção contínua, puxando o leite diretamente para os tubos de coleta, economizando tempo e preservando o volume para análise.
Para começar, prenda uma extremidade do tubo de PVC de 5/32 polegadas de diâmetro interno à bomba de vácuo e prenda o acessório com fita adesiva. Usando um conector reto farpado, conecte a outra extremidade do tubo de PVC de diâmetro interno de 5/32 polegadas ao tubo de PVC de diâmetro interno de 1/8 de polegada. Em seguida, use um conector para conectar a outra extremidade do tubo de PVC de 1/8 de polegada de diâmetro interno a uma agulha hipodérmica de calibre 18.
Usando uma tesoura, corte a ponta de uma ponta de pipeta P200, aproximadamente 0,2 centímetros, para criar uma abertura maior. Insira a ponta da pipeta P200 modificada através da abertura da rolha do septo de modo que a ponta aponte para cima e prenda a rolha do septo a um tubo coletor estéril. Usando a agulha hipodérmica de calibre 18, perfure a rolha do septo.
Agora, ligue a bomba de vácuo para verificar a pressão de sucção, colocando um dedo enluvado sobre a abertura da ponta da pipeta No dia da ordenha, separe a mãe de seus filhotes para permitir o acúmulo de leite nas glândulas. Mantenha os filhotes aquecidos em um ninho. Depois de anestesiar a barragem, aperte um pé da barragem com firmeza para avaliar a percepção do animal sobre a sensação e a dor.
Em seguida, aplique pomada oftálmica veterinária nos olhos da barragem para evitar o ressecamento durante a anestesia. Coloque a barragem anestesiada de costas em uma superfície de trabalho sólida. Limpe suavemente a área mamária da barragem com um lenço de preparação com álcool estéril.
Administre uma a duas unidades de ocitocina por via intraperitoneal entre o quarto e o quinto par de no lado da cavidade peritoneal que não recebeu nenhuma injeção. Limpe suavemente a área do pescoço da barragem com a mão não dominante. Em seguida, aperte o tecido mamário da base até a ponta do teto até que uma gota de leite fique visível.
Ligue o dispositivo de aspiração pressionando o botão liga/desliga. Para iniciar a ordenha, aplique suavemente a ponta da pipeta P200 invertida em uma tetina e use um movimento suave de puxar para retirar o leite. Ordenhe todas as tetinas até que um volume suficiente de leite seja coletado.
Depois, devolva a mãe anestesiada à gaiola e certifique-se de que ela seja mantida aquecida durante o período de recuperação anestésica. 0,1 a 0,5 mililitros de leite podem ser coletados confortavelmente de cada barragem em menos de 10 minutos. A concentração de gordura do leite aumentou significativamente de 174,4 gramas por litro no segundo dia pós-parto para 224,4 gramas por litro no 10º dia pós-parto.
As concentrações de lactose e proteína total não apresentaram diferenças significativas entre o segundo dia pós-parto e o 10º dia pós-parto. A abundância relativa de alfa-S1-caseína e proteína ácida do soro de leite foi maior no leite pós-parto do dia 10 em comparação com o leite pós-parto no segundo dia, enquanto a beta-caseína foi mais abundante no leite pós-parto do segundo dia do que no leite pós-parto do dia 10. As intensidades da banda de proteína no gel de eletroforese confirmaram visualmente as diferenças nas abundâncias relativas de proteínas individuais do leite.
Visão Geral
Este estudo aborda desafios na amostragem de leite para pesquisa de lactação em camundongos, fornecendo um método simplificado que permite que um indivíduo colete volumes suficientes de forma eficiente. O protocolo aprimora as técnicas existentes, minimizando a perda de amostras e reduzindo a intensidade de trabalho.
Componentes Principais do Estudo
Área de Pesquisa
- Pesquisa de lactação
- Coleta de leite de roedores
- Técnicas de amostragem de biofluidos
Contexto
- A amostragem de leite de camundongos apresenta desafios únicos devido ao seu tamanho reduzido.
- Métodos tradicionais frequentemente requerem múltiplos funcionários e levam à perda de amostras.
- Técnicas eficientes são cruciais para resultados precisos na pesquisa.
Métodos Utilizados
- Uso de um dispositivo de vácuo para sucção contínua durante a coleta
- Camundongos como modelo biológico
- Combinação de ferramentas laboratoriais padrão para montagem e aplicação
Principais Resultados
- Facilitação da coleta de 0,1–0,5 mL de leite em menos de 10 minutos.
- Mudanças significativas na concentração de gordura do leite observadas ao longo do tempo.
- Diferenças na abundância relativa de proteínas do leite em diferentes dias pós-parto.
Conclusões
- Este estudo demonstra uma abordagem prática para coletar leite de camundongos, o que auxilia na pesquisa de lactação.
- A relevância do método reside em seu potencial para melhorar a precisão dos dados na amostragem de biofluidos.
Perguntas Frequentes
Executive Industry Relevance
Efficient and reproducible milk sampling from laboratory mice is critical for lactation and neonatal development studies, enabling quantitative analysis of milk composition under experimental conditions. This single-person technique addresses longstanding bottlenecks in biofluid collection, supporting robust data generation and reducing operational complexity in early discovery workflows. The method enhances predictive confidence in nutritional and developmental studies by ensuring sample integrity and standardization.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Enables precise interrogation of lactation biology and nutritional pathways in rodent models.
- Supports functional validation of experimental manipulations affecting milk composition.
- Facilitates mechanistic de-risking by providing reliable, quantitative milk samples for downstream analysis.
Screening & Assay Development
- Prepares validated milk samples for standardized macronutrient and protein assays.
- Improves assay reproducibility by minimizing sample loss and operator variability.
- Enables scalable, single-operator workflows for high-throughput experimental designs.
Translational & Preclinical Research
- Aligns rodent milk composition studies with translational biomarker discovery in neonatal development.
- Supports continuity from basic research to preclinical validation of nutritional interventions.
- Reduces biological risk by ensuring consistent sample quality across experimental cohorts.
Pipeline & Workflow Integration
This technique integrates into the early discovery and preclinical continuum, bridging hypothesis-driven research and quantitative assay development in rodent models.
- Discovery Biology: Provides robust sample collection for hypothesis testing of lactation and developmental pathways.
- Screening: Delivers reproducible, quantitative milk samples for macronutrient and protein analysis.
- Analytics: Enables direct comparison of milk composition across experimental timepoints and conditions.
- Translational Research: Supports alignment of rodent data with human neonatal nutrition studies when relevant.
- Enterprise Reuse: Offers a standardized, scalable protocol adaptable across research teams and studies.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence and reduces mechanistic ambiguity in lactation research.
- Operational Value: Streamlines workflows with single-operator efficiency and minimizes sample loss.
- Strategic Value: Improves go/no-go decision-making by enabling reliable, quantitative data generation.
- Portfolio Impact: Supports risk-adjusted prioritization of nutritional and developmental research programs.
Implementation Considerations
- Requires technical proficiency in rodent handling and anesthesia.
- Needs access to basic laboratory equipment such as vacuum pumps, tubing, and collection tubes.
- Demands cross-team standardization for reproducibility in multi-site studies.
- May require adaptation for use in other small animal models.
- Sample volume limitations inherent to mouse physiology must be considered in experimental design.
