Estabelecimento e Validação de um Modelo de Rato de Hipertensão Arterial Pulmonar Associada à Fibrose Pulmonar

Esta pesquisa investiga a patogênese da hipertensão pulmonar do grupo três, com foco nos mecanismos moleculares em caso de fibrose pulmonar. Em contraste com a hipertensão arterial pulmonar, os mecanismos subjacentes à doença pulmonar intersticial associada à hipertensão pulmonar ainda são pouco compreendidos. Desenvolvimentos recentes neste campo incluem a eficácia na reversão do remodelamento vascular. A descoberta de fenótipos de endotélia semelhantes ao câncer e achados metabólicos, ligando aminoácidos e a desregulação lipídica à patogênese da hipertensão pulmonar. O sequenciamento de células únicas I-A em massa e ensaios metabólicos e funcionais, como o teste de resistência a casos irritantes, são tecnologias essenciais para mapear a hipertensão pulmonar, a heterogeneidade e a identificação de alvos terapêuticos.

[Instrutor] Para começar, intubar a traqueia do rato usando um tubo PE-50, inserido a uma profundidade de três centímetros, que é a distância da glote até a extremidade do tubo. Usando uma seringa de um mililitro com uma agulha de calibre 26, retire 0,2 mililitros de bleomicina e injete-a nas vias aéreas através de uma cânula em dose única. Coloque o rato em decúbito dorsal para garantir uma distribuição uniforme da bleomicina. Segure suavemente e gire lentamente o rato, alternando os lados em um ângulo de 30 graus a 45 graus. Mantenha cada rotação por 10 a 15 segundos e repita três a quatro vezes. Abra o software PFT e verifique se o dispositivo é reconhecido. Agora ligue o interruptor do instrumento de controle principal e certifique-se de que cada sinal amplifier interruptor está desligado. Para definir o fluxo de ar, ligue a porca reguladora do fluxo de ar de sucção e defina a inspiração para cinco. Em seguida, ligue a porca reguladora do fluxo de ar expiratório e defina a expiração lenta para menos quatro. Defina o valor da pressão para 60. Calibre o instrumento na ordem de fluxo FRC, fluxo, fluxo alto e pressão pulmonar com um erro inferior a 5%. Depois de anestesiar o rato, corte a pele ao longo do centro do pescoço. Separe os músculos camada por camada para expor a porção superior da traqueia cervical. Faça uma incisão horizontal entre os anéis da cartilagem traqueal. Insira rapidamente a cânula de metal na incisão traqueal, garantindo o posicionamento correto, e prenda com quatro suturas de fio de seda zero. Coloque o rato no compartimento do animal PFT e conecte a cânula traqueal à interface do canal de fluxo de ar fora do instrumento. Clique no botão Iniciar e examine a capacidade vital forçada ou CVF e a complacência pulmonar dinâmica. Para a detecção da pressão sistólica do ventrículo direito, ou RVSP, fixe o abdômen do rato anestesiado para cima na bancada experimental. Faça uma incisão de cerca de quatro centímetros de comprimento no lado direito do pescoço, usando uma tesoura cirúrgica. Separe a veia jugular externa suavemente com uma pinça microcirúrgica, garantindo que um comprimento de cerca de um centímetro seja isolado. Insira duas linhas cirúrgicas nas extremidades distal e proximal da veia separada. Ligue a extremidade distal da veia jugular externa, usando quatro fios de seda zero. Levante suavemente a linha cirúrgica proximal e coloque-a na parede da veia distal. Faça uma pequena incisão de cerca de 0,3 milímetros com uma tesoura pequena. Depois de inserir o tubo PE-50 na veia jugular externa, ligue o tubo PE-50 e a veia usando quatro fios de seda zero para evitar vazamento de sangue. Observe a forma de onda da pressão venosa no registrador. Empurre o cateter lentamente para o átrio direito, avançando-o para o ventrículo direito para exibir a forma de onda de pressão do ventrículo direito. Quando a pressão estiver estável, registre a pressão do ventrículo direito por um minuto e guarde os dados para análise. Após a toracotomia, remova o coração intacto do rato usando uma pinça. Corte o oráculo e o tecido conjuntivo próximo ao coração com uma tesoura. Corte a parede livre do ventrículo direito ao longo da artéria pulmonar. Este tecido é o ventrículo direito e os demais tecidos são o ventrículo esquerdo mais o septo intraventricular. Após a separação, drenar a superfície do ventrículo direito e do ventrículo esquerdo mais o septo intraventricular, usando papel de filtro. Pesar o ventrículo direito e o ventrículo esquerdo mais o septo ventricular separadamente com uma balança analítica antes de calcular sua relação de peso. Esta figura ilustra as alterações hemodinâmicas, o remodelamento vascular pulmonar e a função pulmonar prejudicada observadas no modelo de rato com HP PF induzida por bleomicina. A pressão sistólica do ventrículo direito e a relação entre o ventrículo direito e o ventrículo esquerdo mais septo aumentaram significativamente no grupo modelo em comparação com o grupo controle. A coloração histológica revelou mais áreas coradas de azul ao redor das artérias pulmonares no grupo modelo, indicando maior acúmulo de colágeno. A capacidade vital forçada e a complacência pulmonar dinâmica foram significativamente reduzidas no grupo modelo em comparação com o grupo controle. As relações entre o tempo de aceleração da artéria pulmonar e o tempo de ejeção, a excursão sistólica do plano do anel tricúspide, a alteração da área fracionária do ventrículo direito e o débito cardíaco foram significativamente reduzidos no grupo modelo. A concentração de hidroxiprolina foi significativamente maior no grupo modelo, indicando aumento do conteúdo de colágeno no tecido pulmonar. Os pesos do fígado e dos rins não foram significativamente diferentes entre os grupos controle e modelo.