Name: Cultivo e colheita monoclonal microbiana automatizada e de alto rendimento usando o sistema ômico de cultura de gotículas de microlitro de célula única (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-14T12:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 16 s
Description: Aprenda a usar o sistema MISS cell para cultivo microbiano monoclonal automatizado de alto rendimento com microfluídica de gotículas. Este método avança a pesquisa do microbioma intestinal humano.

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</ol>

<table><tbody><tr><td>Placa de Petri de 100 mm</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Alemanha</td><td>P5731-500EA</td><td>Para preparação de placas sólidas</td></tr><tr><td>30 mL Recipientes</td> de <td>fezes Boen Healthcare Co., Ltd</td><td>611101</td><td>Para coletar as amostras de fezes</td></tr><tr><td>37 &deg; C, incubadora de temperatura constante</td><td>, Shanghai Yiheng Technology Co., Ltd.</td><td>LRH-150</td><td>Cultive a placa sólida na incubadora</td></tr><tr><td>96 poços Clear Flat Bottom Polystyrene TC-treated Microplates</td><td>Corning</td><td>3599</td><td>Para detecção de movimento de placa de poço e coleta de gotículas</td></tr><tr><td>Agar</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>214010</td><td>Para preparação de placa sólida</td></tr><tr><td>Óleo de remoção de bolhas de ar</td><td>Luoyang TMAXTREE Biotechnology Co., Ltd.</td><td>MISS cell-S-oil</td><td>O óleo no removedor de bolhas de ar durante a triagem de gotículas</td></tr><tr><td>Removedor de bolhas de ar</td><td>Luoyang TMAXTREE Biotechnology Co., Ltd.</td><td>MISS cell-S</td><td>Excluir a fase gasosa entre as gotículas antes de realizar a detecção e coleta de gotículas</td></tr><tr><td>Banco anaeróbico</td><td>Departamento de Negócios de Equipamentos Espaciais de Argônio e Nitrogênio, Cidade de Haiyu, Cidade de Changshu</td><td>VGB-4CM&nbsp;</td><td>Para operação asséptica e esterilização UV sob condição anaeróbica</td></tr><tr><td>Autoclave</td><td>Puhexi Saúde e Equipamentos Médicos Co., Ltd.</td><td>MLS-830L</td><td>Para autoclavagem de meio BHI, tubo EP e assim por diante.</td></tr><tr><td>Caldo de Infusão de Cérebro Coração (BHI)</td><td>Qingdao High-tech Industrial Park Haibo Biotechnology Co., Ltd</td><td>HB8297-1</td><td>Componentes do meio BHI A lista de ingredientes: 38,5 g/L BHI Caldo em água destilada</td></tr><tr><td>Espalhador de células</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Alemanha</td><td>HS8151</td><td>Inocular a solução microbiana na placa sólida</td></tr><tr><td>Tubo de centrífuga, 15 mL</td><td>Beijing Xinhengyan Technology Co., Ltd</td><td>HB53397</td><td>Para preparação de solução microbiana</td></tr><tr><td>Computador</td><td>Lenovo</td><td>E450</td><td>Instalação do software e controle de células MISS</td></tr><tr><td>Cryovial</td><td>Thermo Fisher</td><td>2.0 mL</td><td>Para preservação de fezes</td></tr><tr>Água<td>destilada</td><td>Beijing Mreda Technology Co., Ltd.</td><td>M306444-100ml</td><td>Adicione ao humidificador para manter a humidade na câmara de cultivo de gotículas</td></tr><tr><td>Tubo EP</td><td>Thermo Fisher</td><td>2,0 mL</td><td>Para recolher as amostras de fezes</td></tr><tr><td>Microscópio fluorescente invertido</td><td>Olympus Life Science (LS)</td><td>CKX53</td><td>Verifique e calcule a concentração microbiana</td></tr><tr><td>Glicerol</td><td>GENERAL-REAGENT</td><td>G66258A</td><td>Para preservação</td></tr> <tr><td>da estirpeHemocitômetro</td><td>Acmec</td><td>AYA0810-1ea</td><td>Calcule a concentração microbiana</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Ambeed</td><td>A442876</td><td>Componentes da solução salina tamponada com fosfato (solução PBS)A lista de ingredientes: 8 g/L NaCl, 0,2 g KCl, 1,44 g Na2HPO4, 0,24 g KH2PO4 em água destilada</td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>MACKLIN</td><td>P815661</td><td>Componentes da solução salina tamponada com fosfato (solução PBS)A lista de ingredientes: 8 g/L NaCl, 0,2 g KCl, 1,44 g Na2HPO4, 0,24 g KH2PO4 em água destilada</td></tr><tr><td>Filtro de malha Anping</td><td>Jiufeng Wire Mesh Manufacturing Co., Ltd</td><td>200 mesh (0,075 mm), 400 mesh (0,038 mm), 800 mesh (0,018 mm)&nbsp;</td><td>Remova alimentos não digeridos e partículas menores das amostras de fezes</td></tr><tr><td>Micro-tubulação e gotículas de geração de microfluídica chip</td><td>Luoyang TMAXTREE Biotechnology Co., Ltd.</td><td>MISC-B2</td><td>Para geração de gotículas e incubação de gotículas</td></tr><tr><td>Óleo celular MISS</td><td>Luoyang TMAXTREE Biotechnology Co., Ltd.</td><td>MISS cell-BOS-B</td><td>A fase oleosa para microfluídica de gotículas</td></tr><tr><td>Software de célula MISS</td><td>Luoyang TMAXTREE Biotechnology Co., Ltd.</td><td>Célula MISS V3.2.4</td><td>Realizar operações experimentais no instrumento de célula MISS</td></tr><tr><td>Na2HPO4</td><td>Solarbio</td><td>D7292</td><td>Componentes da solução salina tamponada com fosfato (solução PBS)A lista de ingredientes: 8 g/L de NaCl, 0,2 g de KCl, 1,44 g de Na2HPO4, 0,24 g de KH2PO4 em água destilada</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>GENERAL-REAGENT</td><td>G81793J</td><td>Componentes da solução salina fisiológica Lista de ingredientes: 9 g/L de NaCl em água destilada</td></tr><tr><td>Pipeta</td><td>eppendorf</td><td>2.5 &mu; L, 10 &mu; L, 100&mu; L, 1000&mu; L</td><td>Para manuseio de líquidos</td></tr><tr><td>Tubo de politetrafluoretileno</td><td>Shenzhen WOER Material termoencolhível Co., Ltd.</td><td>3401000141</td><td>Para incubação de gotículas. Este material já foi incluído no micro-tubo e no chip microfluídico de geração de gotículas</td></tr><tr><td>Frasco de amostra</td><td>Luoyang TMAXTREE Biotechnology Co., Ltd.</td><td>Amostra</td><td>de solução microbiana</td></tr> Sistema <tr><td>Ômico de Cultura de Microlitros de Gotículas de Célula Única (célula MISS)</td><td>Luoyang TMAXTREE Biotechnology Co., Ltd.</td><td>MISS cell-G3f</td><td>Realizando o isolamento, cultivo, detecção e coleta microbiana monoclonal</td></tr><tr><td>Centrífuga Superspeed</td><td>Thermo Fisher</td><td>Sorvall Lynx 4000&nbsp;</td><td>Preparar a solução microbiana para sequenciamento</td></tr><tr><td>Seringa</td><td>Jiangsu Zhiyu Medical Instructment Co., Ltd</td><td>10 mL</td><td>Retire a água destilada e injete-a no umidificador na câmara de cultivo de gotículas</td></tr><tr><td>Refrigerador de temperatura ultra baixa</td><td>SANYO Ultra-baixo&nbsp;</td><td>MDF-U4086S&nbsp;</td><td>Para preservação de cepas (-80 &deg; C)</td></tr></tbody></table>

cultivo e colheita monoclonal microbiana automatizada e de alto rendimento usando o sistema ômico de cultura de gotículas de microlitro de célula única

Automated and High-throughput Microbial Monoclonal Cultivation and Picking Using the Single-cell Microliter-droplet Culture Omics System

Estima-se que a microbiota intestinal humana, constituindo a comunidade microbiana predominante, abrigue aproximadamente 4 × 1013 microrganismos no intestino, apresentando seu vasto número e composição complexa11. Neste estudo, nosso objetivo foi isolar e cultivar a microbiota intestinal e usamos o método da placa sólida como controle para demonstrar o desempenho de alto rendimento da célula MISS.
Primeiro, usamos a mesma suspensão fecal para comparar o rendi...

Cultivo e colheita monoclonal microbiana automatizada e de alto rendimento usando o sistema ômico de cultura de gotículas de microlitro de célula única

Pure bacterial cultures are essential for the study of microbial culturomics. Traditional methods based on solid plates, well plates, and micro-reactors ...

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Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bioengenharia

Fonte: Jian, X. et. al., Cultivo Microbiano Automatizado e Evolução Adaptativa usando o Sistema de Cultura de Microgotículas Microbianas (MMC). J. Vis. Exp. (2022)Este vídeo demonstra o uso de uma plataforma baseada em gotículas microfluídicas para monitoramento em tempo real do crescimento bacteriano. Ao gerar gotículas uniformes contendo suspensões bacterianas e guiá-las através de uma via de detecção, o sistema permite a medição óptica contínua da densidade celular para construir uma curva...

Monitoramento em tempo real do crescimento bacteriano usando um sistema de cultura de microgotículas microfluídica

Fonte: Jian, X., et al., Cultivo Microbiano Automatizado e Evolução Adaptativa usando o Sistema de Cultura de Microgotículas Microbianas (MMC). J. Vis. Exp. (2022).Este vídeo demonstra o uso de um sistema de cultura de microgotículas microbianas para impulsionar a evolução adaptativa das bactérias em direção à tolerância ao metanol. Ao misturar culturas bacterianas modificadas com um meio de estresse de alto teor de metanol e segmentá-las em microgotículas, o sistema seleciona mutantes que...

Evolução adaptativa de bactérias usando um sistema de cultura de microgotículas microbianas

Neste protocolo, é introduzida a fabricação, configuração e operação básica de um biorreator picoliter microfluídico (PLBR) para análise de célula única de microrganismos procarióticos. Microrganismos industrialmente relevantes foram analisados como prova de princípio, permitindo insights sobre taxa de crescimento, morfologia e heterogeneidade fenotípica ao longo de certos períodos de tempo, dificilmente possíveis com métodos convencionais.

Biorreator Picoliter Microfluídico para Análise Microbiana de Célula Única: Fabricação, Configuração do Sistema e Operação

Nós desenvolvemos uma cultura de células automatizado e uma plataforma de interrogação para experiências de estimulação de células micro-escala. A plataforma oferece um controle simples, versátil e preciso para cultivar e estimular pequenas populações de células e recuperar lisados ​​para análises moleculares. A plataforma é bem adequado para os estudos que utilizam células preciosos e / ou reagentes.

A plataforma automatizada versátil para experiências de estimulação Micro escala celulares

Aqui, apresentamos um protocolo para isolar e cultivar células únicas com uma plataforma microfluídica, que utiliza um novo conceito de design de micropoços para permitir o isolamento de célula única de alta eficiência e cultura clonal de longo prazo.

Uma plataforma microfluídica para a isolação de alta taxa de transferência de célula única e Cultura

Concebemos um aparelho de cultura contínua para uso com sistemas de optogenetic para iluminar culturas de micróbios e regularmente células de imagem no efluente com um microscópio invertido. A cultura, a amostragem, de imagem e análise de imagem são totalmente automatizados para que as respostas dinâmicas a iluminação pode ser medida ao longo de vários dias.

Design e Implementação de um Automated Illuminating, A cultura e sistema de amostragem para Aplicações Microbial optogenética

É apresentado um protocolo detalhado para a operação simultânea de 48 culturas de pilha paralela em variadas condições em um sistema de microbioreactor. Processo de cultura de células, colheita e análise de título de anticorpos subsequentes são descritos.

Uso do elevado-Throughput Microbioreactor sistema automatizado para produção de IgG1 modelo em células CHO

Os ensaios de interação cocultura apresentados neste protocolo são de baixo custo, alta taxa de transferência e simples. Esses ensaios podem ser usados para observar interações microbianas na cocultura, identificar padrões de interação e caracterizar o potencial inibitório de uma cepa microbiana de interesse contra patógenos humanos e ambientais.

Ensaios de co-cultura de alta produtividade para a investigação de interações microbianas

Este protocolo descreve como usar o sistema microbiano de cultura de microdroplet (MMC) para realizar o cultivo microbiano automatizado e a evolução adaptativa. A MMC pode cultivar e subsu cultivar microrganismos automaticamente e continuamente e monitorar on-line seu crescimento com rendimento relativamente alto e boa paraleloização, reduzindo o consumo de mão-de-obra e reagente.

Cultivo Microbiano Automatizado e Evolução Adaptativa usando Sistema de Cultura microbiana de microdroplet (MMC)

Apresentamos um protocolo para o dispositivo de cultura contínua milifluida (MCCD), que permite o cultivo de populações bacterianas sob condições constantes de baixo teor de nutrientes (até centenas de concentrações nanomolares) ou flutuações temporais de nutrientes em uma escala de tempo minuciosa.

Um dispositivo milifluido contínuo para cultura para o estudo de Escherichia coli sob condições nutritivas baixas e flutuantes

Esse protocolo apresenta um fluxo padrão de triagem de alta produtividade para microrganismos industriais. Envolve construir uma biblioteca mutante via mutagênese ARTP, realizar triagem positiva de gotículas com microfluídica automatizada e, posteriormente, verificar os resultados. A confiabilidade do fluxo de trabalho foi validada por meio de triagem de cepas de B. coagulans de alto rendimento.

Triagem de alto rendimento de mutantes Bacillus coagulans , hiperprodutora de ácido l-lático, utilizando uma plataforma microfluídica automatizada de gotículas

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