Name: Tela CRISPR em todo o genoma para revelar genes radiossensíveis e radiorresistentes (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-23T13:25:00.000+00:00
Duration: 8 min 32 s
Description: Aprenda a realizar uma triagem CRISPR em todo o genoma para identificar genes radiossensíveis e radiorresistentes em células de câncer de pulmão. Este método avança a pesquisa oncológica e a terapia radiante.

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<ol><li>Barrangou, R., Marraffini, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPR-Cas+systems%3A+Prokaryotes+upgrade+to+adaptive+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell%22%5BJournal%5D)">CRISPR-Cas systems: Prokaryotes upgrade to adaptive immunity.</a> Mol Cell. 54 (2), 234-244 (2014).</li>
<li>Joung, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-scale+CRISPR-Cas9+knockout+and+transcriptional+activation+screening%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Genome-scale CRISPR-Cas9 knockout and transcriptional activation screening.</a> Nat Protoc. 12 (4), 828-863 (2017).</li>
<li>Sanjana, N. E., Shalem, O., Zhang, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+vectors+and+genome-wide+libraries+for+CRISPR+screening%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Improved vectors and genome-wide libraries for CRISPR screening.</a> Nat Methods. 11 (8), 783-784 (2014).</li>
<li>Arroyo, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Genome-wide+CRISPR+death+screen+identifies+genes+essential+for+oxidative+phosphorylation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">A Genome-wide CRISPR death screen identifies genes essential for oxidative phosphorylation.</a> Cell Metab. 24 (6), 875-885 (2016).</li>
<li>Sidik, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genome-wide+CRISPR+screen+in+toxoplasma+identifies+essential+apicomplexan+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A genome-wide CRISPR screen in toxoplasma identifies essential apicomplexan genes.</a> Cell. 166 (6), 1423-1435 (2016).</li>
<li>Jing, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+CRISPR+activation+screening+in+senescent+cells+reveals+SOX5+as+a+driver+and+therapeutic+target+of+rejuvenation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Genome-wide CRISPR activation screening in senescent cells reveals SOX5 as a driver and therapeutic target of rejuvenation.</a> Cell Stem Cell. 30 (11), 1452-1471 (2023).</li>
<li>Shifrut, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+CRISPR+screens+in+primary+human+t+cells+reveal+key+regulators+of+immune+function%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Genome-wide CRISPR screens in primary human t cells reveal key regulators of immune function.</a> Cell. 175 (7), 1958-1971 (2018).</li>
<li>Shalem, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-scale+CRISPR-Cas9+knockout+screening+in+human+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Genome-scale CRISPR-Cas9 knockout screening in human cells.</a> Science. 343 (6166), 84-87 (2014).</li>
<li>Katti, A., Diaz, B. J., Caragine, C. M., Sanjana, N. E., Dow, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPR+in+cancer+biology+and+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">CRISPR in cancer biology and therapy.</a> Nat Rev Cancer. 22 (5), 259-279 (2022).</li>
<li>Sasmal, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthetic+host-guest+assembly+in+cells+and+tissues%3A+Fast%2C+stable%2C+and+selective+bioorthogonal+imaging+via+molecular+recognition%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Synthetic host-guest assembly in cells and tissues: Fast, stable, and selective bioorthogonal imaging via molecular recognition.</a> Anal Chem. 90 (19), 11305-11314 (2018).</li>
<li>Roos, W. P., Thomas, A. D., Kaina, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA+damage+and+the+balance+between+survival+and+death+in+cancer+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">DNA damage and the balance between survival and death in cancer biology.</a> Nat Rev Cancer. 16 (1), 20-33 (2016).</li>
<li>Huang, R., Zhou, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA+damage+repair%3A+Historical+perspectives%2C+mechanistic+pathways+and+clinical+translation+for+targeted+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduct+Target+Ther%22%5BJournal%5D)">DNA damage repair: Historical perspectives, mechanistic pathways and clinical translation for targeted cancer therapy.</a> Signal Transduct Target Ther. 6 (1), 254(2021).</li>
<li>O'Connor, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+the+DNA+damage+response+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell%22%5BJournal%5D)">Targeting the DNA damage response in cancer.</a> Mol Cell. 60 (4), 547-560 (2015).</li>
<li>Lord, C. J., Ashworth, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+DNA+damage+response+and+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The DNA damage response and cancer therapy.</a> Nature. 481 (7381), 287-294 (2012).</li>
<li>Carusillo, A., Mussolino, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA+Damage%3A+From+threat+to+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">DNA Damage: From threat to treatment.</a> Cells. 9 (7), 1665(2020).</li>
<li>Li, X., Heyer, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Homologous+recombination+in+DNA+repair+and+DNA+damage+tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Homologous recombination in DNA repair and DNA damage tolerance.</a> Cell Res. 18 (1), 99-113 (2008).</li>
<li>Chang, H., Pannunzio, N. R., Adachi, N., Lieber, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-homologous+DNA+end+joining+and+alternative+pathways+to+double-strand+break+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Non-homologous DNA end joining and alternative pathways to double-strand break repair.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 18 (8), 495-506 (2017).</li>
<li>Andratschke, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((European+society+for+radiotherapy+and+oncology+and+European+organization+for+research+and+treatment+of+cancer+consensus+on+re-irradiation%3A+Definition%2C+reporting%2C+and+clinical+decision+making%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Oncol%22%5BJournal%5D)">European society for radiotherapy and oncology and European organization for research and treatment of cancer consensus on re-irradiation: Definition, reporting, and clinical decision making.</a> Lancet Oncol. 23 (10), e469-e478 (2022).</li>
<li>Olivares-Urbano, M. A., Grinan-Lison, C., Marchal, J. A., Nunez, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CSC+radioresistance%3A+A+therapeutic+challenge+to+improve+radiotherapy+effectiveness+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">CSC radioresistance: A therapeutic challenge to improve radiotherapy effectiveness in cancer.</a> Cells. 9 (7), 1651(2020).</li>
<li>Schaue, D., McBride, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Opportunities+and+challenges+of+radiotherapy+for+treating+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Opportunities and challenges of radiotherapy for treating cancer.</a> Nat Rev Clin Oncol. 12 (9), 527-540 (2015).</li>
<li>Allen, C., Her, S., Jaffray, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiotherapy+for+cancer%3A+Present+and+future%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Drug+Deliv+Rev%22%5BJournal%5D)">Radiotherapy for cancer: Present and future.</a> Adv Drug Deliv Rev. 109, 1-2 (2017).</li>
<li>Xue, C., Greene, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA+repair+pathway+choices+in+CRISPR-Cas9-Mediated+genome+editing%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Genet%22%5BJournal%5D)">DNA repair pathway choices in CRISPR-Cas9-Mediated genome editing.</a> Trends Genet. 37 (7), 639-656 (2021).</li>
<li>Tzelepis, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+CRISPR+dropout+screen+identifies+genetic+vulnerabilities+and+therapeutic+targets+in+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">A CRISPR dropout screen identifies genetic vulnerabilities and therapeutic targets in acute myeloid leukemia.</a> Cell Rep. 17 (4), 1193-1205 (2016).</li>
<li>Rottner, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genome-wide+CRISPR+screen+identifies+CALCOCO2+as+a+regulator+of+beta+cell+function+influencing+type+2+diabetes+risk%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">A genome-wide CRISPR screen identifies CALCOCO2 as a regulator of beta cell function influencing type 2 diabetes risk.</a> Nat Genet. 55 (1), 54-65 (2023).</li>
<li>Chen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPR-Cas9+for+cancer+therapy%3A+Opportunities+and+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Lett%22%5BJournal%5D)">CRISPR-Cas9 for cancer therapy: Opportunities and challenges.</a> Cancer Lett. 447, 48-55 (2019).</li>
<li>Gupta, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPR-Cas9+system%3A+A+new-fangled+dawn+in+gene+editing%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sci%22%5BJournal%5D)">CRISPR-Cas9 system: A new-fangled dawn in gene editing.</a> Life Sci. 232, 116636(2019).</li>
<li>Li, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+CRISPR+screen+identifies+host+dependency+factors+for+influenza+A+virus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Genome-wide CRISPR screen identifies host dependency factors for influenza A virus infection.</a> Nat Commun. 11 (1), 164(2020).</li>
<li>Hung, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+profiling+of+human+extrachromosomal+DNA+by+CRISPR-CATCH%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Targeted profiling of human extrachromosomal DNA by CRISPR-CATCH.</a> Nat Genet. 54 (11), 1746-1754 (2022).</li>
<li>Bhattacharya, D., Van Meir, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+genotyping+method+to+detect+small+CRISPR-Cas9+induced+indels+by+agarose+gel+electrophoresis%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">A simple genotyping method to detect small CRISPR-Cas9 induced indels by agarose gel electrophoresis.</a> Sci Rep. 9 (1), 4437(2019).</li>
<li>Razavi, Z., Soltani, M., Souri, M., Van Wijnen, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPR+innovations+in+tissue+engineering+and+gene+editing%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sci%22%5BJournal%5D)">CRISPR innovations in tissue engineering and gene editing.</a> Life Sci. 358, 123120(2024).</li>
<li>Wang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genome-wide+CRISPR-based+screen+identifies+KAT7+as+a+driver+of+cellular+senescence%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">A genome-wide CRISPR-based screen identifies KAT7 as a driver of cellular senescence.</a> Sci Transl Med. 13 (575), eabd2655(2021).</li>
<li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineered+miniature+CRISPR-Cas+system+for+mammalian+genome+regulation+and+editing%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell%22%5BJournal%5D)">Engineered miniature CRISPR-Cas system for mammalian genome regulation and editing.</a> Mol Cell. 81 (20), 4333-4345 (2021).</li>
<li>Huang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FACS-based+genome-wide+CRISPR+screens+define+key+regulators+of+DNA+damage+signaling+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell%22%5BJournal%5D)">FACS-based genome-wide CRISPR screens define key regulators of DNA damage signaling pathways.</a> Mol Cell. 83 (15), 2810-2828 (2023).</li>
<li>Feng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+CRISPR+screen+identifies+synthetic+lethality+between+DOCK1+inhibition+and+metformin+in+liver+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Cell%22%5BJournal%5D)">Genome-wide CRISPR screen identifies synthetic lethality between DOCK1 inhibition and metformin in liver cancer.</a> Protein Cell. 13 (11), 825-841 (2022).</li>
<li>Saurat, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+CRISPR+screen+identifies+neddylation+as+a+regulator+of+neuronal+aging+and+AD+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Genome-wide CRISPR screen identifies neddylation as a regulator of neuronal aging and AD neurodegeneration.</a> Cell Stem Cell. 31 (8), 1162-1174 (2024).</li>
<li>Du, Y., Liu, Y., Hu, J., Peng, X., Liu, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPR%2FCas9+systems%3A+Delivery+technologies+and+biomedical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Asian+J+Pharm+Sci%22%5BJournal%5D)">CRISPR/Cas9 systems: Delivery technologies and biomedical applications.</a> Asian J Pharm Sci. 18 (6), 100854(2023).</li>
<li>Shi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genome-wide+CRISPR+screen+identifies+WDFY3+as+a+regulator+of+macrophage+efferocytosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">A genome-wide CRISPR screen identifies WDFY3 as a regulator of macrophage efferocytosis.</a> Nat Commun. 13 (1), 7929(2022).</li>
<li>Liu, N., Olson, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPR+modeling+and+correction+of+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">CRISPR modeling and correction of cardiovascular disease.</a> Circ Res. 130, (2022).</li>
<li>Feng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+CRISPR+screens+using+isogenic+cells+reveal+vulnerabilities+conferred+by+loss+of+tumor+suppressors%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Adv%22%5BJournal%5D)">Genome-wide CRISPR screens using isogenic cells reveal vulnerabilities conferred by loss of tumor suppressors.</a> Sci Adv. 8 (19), 6638(2022).</li>
<li>Ghaemi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPR-Cas9+genome+editing+delivery+systems+for+targeted+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sci%22%5BJournal%5D)">CRISPR-Cas9 genome editing delivery systems for targeted cancer therapy.</a> Life Sci. 267, 118969(2021).</li>
<li>Derry, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPR%3A+Development+of+a+technology+and+its+applications%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+J%22%5BJournal%5D)">CRISPR: Development of a technology and its applications.</a> FEBS J. 288 (2), 358-359 (2021).</li>
<li>Sharma, G., Sharma, A. R., Bhattacharya, M., Lee, S. S., Chakraborty, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPR-Cas9%3A+A+preclinical+and+clinical+perspective+for+the+treatment+of+human+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">CRISPR-Cas9: A preclinical and clinical perspective for the treatment of human diseases.</a> Mol Ther. 29 (2), 571-586 (2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Placa de cultura de células e tecidos de 150 mm</td><td>Wuxi NEST Biotechnology Co., Ltd.</td><td>715011</td><td>Placa</td></tr> de <tr><td>cultura de células e tecidos de 35 mm</td><td>Wuxi NEST Biotechnology Co., Ltd.</td><td>706011</td><td></td></tr><tr><td>Linha celular de cultura celular A549</td><td>ATCC</td> <td>-</td><td></td></tr> <tr><td>Kit de contagem de células-8</td><td>Shanghai Beyotime Biotech Inc</td><td>C0041</td><td>Para ensaio de viabilidade celular</td></tr><tr><td>Meio independente de CO2-independente</td><td>PHCbi</td><td>MCO-50AIC</td><td>Contador</td></tr> de <tr><td>células automatizado Countess 3 FL</td><td>Themo Scientific</td><td>AMQAF2001</td><td>Para contagem de células</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Gibco</td><td>25200056</td><td>Cultura de células</td></tr><tr><td>Soro bovino fetal</td><td>Gibco</td><td>10099141</td><td>Cultura de células</td></tr><tr><td>Microscopia de fluorescência</td><td>LEICA</td><td>ebq 100-04</td><td>Para microscópio de fluorescência</td></tr><tr><td>Biblioteca lentiviral CRISPR de todo o genoma</td><td>Shanghai OBiO Technology Co., Ltd.</td><td>H5070</td><td>Para infecção lentiviral</td></tr><tr><td>MiniAmp mais PCR</td><td>Themo Scientific</td><td>C37835</td><td>Para placas de cultura de células NEST de amplificação por PCR</td></tr><tr><td>, 12 poços</td><td>Wuxi NEST Biotechnology Co., Ltd.</td><td>712002</td><td></td></tr><tr><td>Placas de cultura de células NEST de cultura de células, 6 poços</td><td>Wuxi NEST Biotechnology Co., Ltd.</td><td>703002</td><td></td></tr><tr><td>Placas de cultura de células NEST de cultura de células, 96 poços</td><td>Wuxi NEST Biotechnology Co., Ltd.</td><td>701001</td><td>Cultura de células</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Gibco</td><td>C10010500BT</td><td></td></tr><tr><td>Primer de PCR de cultura celular (AATGGACTATCATATGCTTACCGTAACTTGAAAGTATTTCG)</td><td>Beijing AuGCT Biotech Co., Ltd.</td><td>-</td><td>Para amplificação de PCR</td></tr><tr><td>PCR primer reverso (GATGTGCGCTCTGCCCACTGACGGGCA)</td> <td>Beijing AuGCT Biotech Co., Ltd.</td><td>-</td><td>Para amplificação de PCR</td></tr><tr><td>Polybrene</td><td>Shanghai Beyotime Biotech Inc</td><td>C0351</td><td>Para infecção lentiviral</td></tr><tr><td>Puromicina</td><td>MCE</td><td>HY-K1057</td><td>Para seleção pós-infecção lentiviral</td></tr><tr><td>RPMI 1640 meio de cultura de células</td><td>Gibco</td><td>23400-021</td> Kit de <td></td></tr><tr><td>DNA genômico TIANGENamp</td> de cultura de células <td>Beijing TIANGEN Biotech Co., Ltd.</td><td>DP304</td><td>para extração de DNA genômico</td></tr><tr><td>difratômetro de pó de raios-X</td><td>PerkinElmer</td><td></td><td>para radioterapia</td></tr></tbody></table>

tela crispr em todo o genoma para revelar genes radiossensíveis e radiorresistentes

Genome-Wide CRISPR Screen for Unveiling Radiosensitive and Radioresistant Genes

O câncer de pulmão, com a principal taxa de mortalidade, representa uma doença médica altamente agressiva e prevalente. Usando a linha celular de câncer de pulmão A549 como exemplo para conduzir uma triagem CRISPR em todo o genoma com radiação como condição de triagem, o fluxo de trabalho esquemático é mostrado na Figura 1. Primeiro, explore a sensibilidade das células A549 a diferentes doses de radiação por meio da formação de clones e experimentos com CCK8 (Figura 2</s...

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The CRISPR-Cas9 system has been harnessed and repurposed into a powerful genome editing tool. By leveraging this technology, researchers can precisely ...

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Research

JoVE Journal

Cancer Research

Pesquisa sobre o Câncer

Este vídeo descreve um método de triagem para identificar moscas transgênicas de Drosophila, cujo genoma foi modificado usando CRISPR-Cas9. O CRISPR-Cas9 é uma poderosa ferramenta de edição de genoma que revolucionou a maneira como os cientistas podem manipular o genoma de um organismo. No protocolo de exemplo, veremos como identificar mutantes gerados por CRISPR, em que uma inserção de uma sequência de transativação substitui o primeiro éxon do gene branchless (bnl), criando assim uma linha de...

Triagem para modificações genômicas: um método para identificar mutantes gerados por CRISPR em Drosophila

A técnica de genotipagem descrito aqui, que acopla reacção em cadeia da polimerase fluorescente (PCR) para electroforese em gel capilar, permite a genotipagem de alto rendimento de clones knockout mediada por nucleases. É contorna as limitações enfrentadas por outras técnicas de genotipagem e é mais rentável do que os métodos de sequenciação.

Usando uma técnica de PCR fluorescente-capilar Electroforese em Gel de genótipo CRISPR / cas9 mediada KO mutantes em um formato de elevado rendimento

Os avanços recentes na capacidade de manipular geneticamente as linhas celulares somáticas possuem grande potencial para pesquisas básicas e aplicadas. Aqui, apresentamos duas abordagens para CRISPR / Cas9 gerado produção knockout e triagem em linhas de células de mamíferos, com e sem o uso de marcadores selecionáveis.

Geração independente dependente da seleção e de genes independentes de CRISPR / Cas9 em células de mamíferos

Uma biblioteca CRISPR/sgRNA aplicou-se para interrogar os genes codificantes de proteínas. No entanto, a viabilidade de uma biblioteca de sgRNA para descobrir a função de um limite CTCF na regulação gênica permanece inexplorada. Aqui, descrevemos uma biblioteca de sgRNA específico de loci HOX para elucidar a função dos limites CTCF HOX loci.

HOX Loci Focused CRISPR/sgRNA biblioteca rastreio identificando crítico CTCF limites

A tecnologia CRISPR-Cas9 fornece um método eficiente para editar precisamente o genoma dos mamíferos em qualquer tipo de célula e representa um novo meio para realizar telas genéticas de todo o genoma. Um protocolo detalhado que discute as etapas necessárias para o desempenho bem-sucedido de telas de CRISPR-Cas9 agrupadas em todo o genoma é fornecido aqui.

Telas genéticas com base em CRISPR agrupadas em células de mamíferos

Este manuscrito descreve uma abordagem de triagem baseada em células em escala de genoma para identificar interações receptor-ligantes extracelulares.

Identificação do receptor de superfície celular usando telas genéticas CRISPR/Cas9 em escala de genoma

Aqui descrevemos uma metodologia rápida e direta de triagem in vivo CRISPR/Cas9 utilizando ultrassom guiado em injeções lentiviras embrionárias uterobrionárias para avaliar simultaneamente funções de vários genes na pele e cavidade oral de camundongos imunocompetrente.

Triagem In Vivo CRISPR/Cas9 para avaliar simultaneamente a função genética na pele do rato e na cavidade oral

Uma barreira significativa para tecnologias como o CRISPR são os eventos fora do alvo que podem interromper genes vitais. 'Circularização para relatórios in vitro de efeitos de clivagem por sequenciamento' (CIRCLE-seq) é uma técnica projetada para identificar locais de clivagem não intencionais. Este método mapeia a atividade de todo o genoma do CRISPR-Cas9 com alta sensibilidade e sem viés.

CIRCLE-Seq para interrogatório de edição de genes fora do alvo

O artigo descreve um protocolo para a aplicação de um modelo in vitro de exaustão para completar uma triagem de nocaute CRISPR em todo o genoma em células T receptoras de antígeno quimérico de doadores saudáveis.

Realizando uma triagem nocaute CRISPR em todo o genoma in vitro em células T receptoras de antígeno quimérico

Aqui, apresentamos um protocolo que integra a tecnologia CRISPR/Cas9 com o ensaio Cell Counting Kit-8 (CCK-8) para identificar genes candidatos que são cruciais para a capacidade proliferativa anormal de células-tronco hematopoiéticas e progenitoras.

Avaliação de genes anormais relacionados ao crescimento de células-tronco hematopoiéticas e progenitoras combinando a tecnologia CRISPR/Cas9 com contagem de células

Aprenda a realizar uma triagem CRISPR em todo o genoma para identificar genes radiossensíveis e radiorresistentes em células de câncer de pulmão. Este método avança a pesquisa oncológica e a terapia radiante.

Tela CRISPR em todo o genoma para revelar genes radiossensíveis e radiorresistentes

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