Name: Estudando interações entre células mieloides e células T CAR in vitro e in vivo (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-25T13:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 14 s
Description: Aprenda a estudar interações entre macrófagos imunossupressores humanos e células T CAR em modelos simplificados in vitro e in vivo para linfoma de células do manto. Esses modelos facilitam o teste de imunoterapias direcionadas.

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<ol><li>Yun, K., Siegler, E. L., Kenderian, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Who+wins+the+combat%2C+CAR+or+TCR%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">Who wins the combat, CAR or TCR.</a> Leukemia. 37 (10), 1953-1962 (2023).</li>
<li>Neelapu, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Axicabtagene+Ciloleucel+CAR+T-Cell+Therapy+in+Refractory+Large+B-Cell+Lymphoma%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+J+Med%22%5BJournal%5D)">Axicabtagene Ciloleucel CAR T-Cell Therapy in Refractory Large B-Cell Lymphoma.</a> New England J Med. 377 (26), 2531-2544 (2017).</li>
<li>Shah, N. N., Fry, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+resistance+to+CAR+T+cell+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of resistance to CAR T cell therapy.</a> Nat Rev Clin Oncol. 16 (6), 372-385 (2019).</li>
<li>Kiss, M., Caro, A. A., Raes, G., Laoui, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+Reprogramming+of+Monocytes+in+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Fronti+Oncol%22%5BJournal%5D)">Systemic Reprogramming of Monocytes in Cancer.</a> Fronti Oncol. 10, (2020).</li>
<li>Rodriguez-Garcia, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((cell-mediated+depletion+of+immunosuppressive+tumor-associated+macrophages+promotes+endogenous+antitumor+immunity+and+augments+adoptive+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">cell-mediated depletion of immunosuppressive tumor-associated macrophages promotes endogenous antitumor immunity and augments adoptive immunotherapy.</a> Nat Commun. 12 (1), (2021).</li>
<li>Kankeu Fonkoua, L. A., Sirpilla, O., Sakemura, R., Siegler, E. L., Kenderian, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CAR+T+cell+therapy+and+the+tumor+microenvironment%3A+Current+challenges+and+opportunities%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther+Oncolyt%22%5BJournal%5D)">CAR T cell therapy and the tumor microenvironment: Current challenges and opportunities.</a> Mol Ther Oncolyt. 25, 69-77 (2022).</li>
<li>Stroncek, D. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elutriated+lymphocytes+for+manufacturing+chimeric+antigen+receptor+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Trans+Med%22%5BJournal%5D)">Elutriated lymphocytes for manufacturing chimeric antigen receptor T cells.</a> J Trans Med. 15 (1), (2017).</li>
<li>Stroncek, D. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myeloid+cells+in+peripheral+blood+mononuclear+cell+concentrates+inhibit+the+expansion+of+chimeric+antigen+receptor+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Myeloid cells in peripheral blood mononuclear cell concentrates inhibit the expansion of chimeric antigen receptor T cells.</a> Cytotherapy. 18 (7), 893-901 (2016).</li>
<li>Sterner, R. M., Cox, M. J., Sakemura, R., Kenderian, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+crispr%2Fcas9+to+knock+out+gm-csf+in+car-t+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Using crispr/cas9 to knock out gm-csf in car-t cells.</a> J Vis Exp. (149), e59629(2019).</li>
<li>Ali, L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PD-1+blockade+and+CDK4%2F6+inhibition+augment+nonoverlapping+features+of+T+cell+activation+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">PD-1 blockade and CDK4/6 inhibition augment nonoverlapping features of T cell activation in cancer.</a> J Exp Med. 220 (4), e20220729(2023).</li>
<li>Wang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+and+Metabolomic+Characterization+of+SARS-CoV-2-Infected+Cynomolgus+Macaque+at+Early+Stage%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Proteomic and Metabolomic Characterization of SARS-CoV-2-Infected Cynomolgus Macaque at Early Stage.</a> Front Immunol. 13, 954121(2022).</li>
<li>Ruella, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overcoming+the+immunosuppressive+tumor+microenvironment+of+Hodgkin+lymphoma+using+chimeric+antigen+receptor+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Dis%22%5BJournal%5D)">Overcoming the immunosuppressive tumor microenvironment of Hodgkin lymphoma using chimeric antigen receptor T cells.</a> Cancer Dis. 7 (10), 1154-1167 (2017).</li>
<li>Sakemura, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+Clinically+Relevant+Reporter+for+Chimeric+Antigen+Receptor+T-cell+Expansion+Trafficking%2C+and+Toxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Immunol+Res%22%5BJournal%5D)">Development of a Clinically Relevant Reporter for Chimeric Antigen Receptor T-cell Expansion Trafficking, and Toxicity.</a> Cancer Immunol Res. 9 (9), 1035-1046 (2021).</li>
<li>Sterner, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GM-CSF+inhibition+reduces+cytokine+release+syndrome+and+neuroinflammation+but+enhances+CAR-T+cell+function+in+xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">GM-CSF inhibition reduces cytokine release syndrome and neuroinflammation but enhances CAR-T cell function in xenografts.</a> Blood. 133 (7), 697-709 (2019).</li>
<li>Smith, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+Three-Dimensional+Skin+Disease+Model+to+Assess+Macrophage+Function+in+Diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Meth%22%5BJournal%5D)">A Novel Three-Dimensional Skin Disease Model to Assess Macrophage Function in Diabetes.</a> Tissue Eng Meth. 27 (2), 49-58 (2021).</li>
<li>Nowak, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pro-inflammatory+monocyte+profile+in+patients+with+major+depressive+disorder+and+suicide+behaviour+and+how+ketamine+induces+anti-inflammatory+M2+macrophages+by+NMDAR+and+mTOR%5BTitle%5D)+AND+%22EBioMedicine%22%5BJournal%5D)">Pro-inflammatory monocyte profile in patients with major depressive disorder and suicide behaviour and how ketamine induces anti-inflammatory M2 macrophages by NMDAR and mTOR.</a> EBioMedicine. 50, 290-305 (2019).</li>
<li>Ajith, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humanized+Mouse+Model+as+a+Novel+Approach+in+the+Assessment+of+Human+Allogeneic+Responses+in+Organ+Transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Humanized Mouse Model as a Novel Approach in the Assessment of Human Allogeneic Responses in Organ Transplantation.</a> Front Immunol. 12, 687715(2021).</li>
<li>Tsukamoto, A., Serizawa, K., Sato, R., Yamazaki, J., Inomata, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vital+signs+monitoring+during+injectable+and+inhalant+anesthesia+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Animals%22%5BJournal%5D)">Vital signs monitoring during injectable and inhalant anesthesia in mice.</a> Exp Animals. 64 (1), 57-64 (2015).</li>
<li>Hickman, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimal+Exposure+Times+for+Irreversible+Euthanasia+with+Carbon+Dioxide+in+Mice+and+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Animal+Sci%22%5BJournal%5D)">Minimal Exposure Times for Irreversible Euthanasia with Carbon Dioxide in Mice and Rats.</a> J Am Assoc Lab Animal Sci. 61 (3), 283-286 (2022).</li>
<li>Zhou, R., Mei, L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aZhou%2C+R+%22Neural+Development%3A+Methods+and+Protocols%22">Neural Development: Methods and Protocols</a>. , Humana Press. Totowa, NJ. (2013).</li>
<li>Gutierrez-Ruiz, O. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ectopic+expression+of+DOCK8+regulates+lysosome-mediated+pancreatic+tumor+cell+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Ectopic expression of DOCK8 regulates lysosome-mediated pancreatic tumor cell invasion.</a> Cell Rep. 42 (9), 113042(2023).</li>
<li>Kirkiles-Smith, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+Humanized+Mouse+Model+to+Study+the+Role+of+Macrophages+in+Allograft+Injury%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Development of a Humanized Mouse Model to Study the Role of Macrophages in Allograft Injury.</a> Transplantation. 87 (2), 189-197 (2009).</li>
<li>Chuprin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humanized+mouse+models+for+immuno-oncology+research%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Humanized mouse models for immuno-oncology research.</a> Nat Rev Clin Oncol. 20 (3), 192-206 (2023).</li>
<li>Yun, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrinsic+immunosuppressive+features+of+monocytes+suppress+CAR-T19+through+IL-1+pathway+modulation+in+mantle+cell+lymphoma%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther+Oncol%22%5BJournal%5D)">Intrinsic immunosuppressive features of monocytes suppress CAR-T19 through IL-1 pathway modulation in mantle cell lymphoma.</a> Mol Ther Oncol. 33 (2), 200985(2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Seringa de 0,5 mL</td><td>Fisher Científico</td><td>329461</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de microcentrífuga de 1,5 mL</td><td>Eppendorf</td><td>1415-2508</td><td></td></tr><tr><td>Tubo cônico de 15 mL</td><td>Ciências da Vida da Corning</td><td>352097</td><td></td></tr><tr><td>Placa transwell de 24 poços (0,4 &mu; m)</td><td>Ciências da Vida da Corning</td><td>3397</td><td></td></tr><tr><td>Tubo cônico de 50 mL</td><td>Ciências da Vida da Corning</td><td>352098</td><td></td></tr><tr><td>CD206 anti-humano conjugado com APC/Cy7</td><td>Biolenda</td><td>321119</td><td>Anticorpo de fluxo</td></tr><tr><td>CD14 anti-humano conjugado com APC</td><td>Biolenda</td><td>325607</td><td>Anticorpo de fluxo</td></tr><tr><td>CD3 anti-humano conjugado com APC</td><td>Biolenda</td><td>344811</td><td>Anticorpo de fluxo</td></tr><tr><td>Solução de enxágue autoMACS</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-222</td><td>Tampão de isolamento de monócitos clássicos&nbsp;</td></tr><tr><td>Matriz de membrana basal</td><td>Ciências da Vida da Corning</td><td>CLS356237</td><td>Matriz de membrana basal solubilizada</td></tr><tr><td>Meios de cultura celular</td><td></td><td></td><td>10% de soro AB humano 1% de penicilina-estreptomicina-glutamina em X-VIVO 15 Meio de Célula Hematopoiética sem soro</td></tr><tr><td>Kit clássico de isolamento de monócitos, humano</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-117-337</td><td></td></tr><tr><td>Sistema CytoFLEX B5-R3-V5</td><td>Beckman Coulter</td><td>C04652</td><td>Citômetro de fluxo</td></tr><tr><td>D-luciferina</td><td>Biotecnologia de Ouro</td><td>SORTE-1G</td><td></td></tr><tr><td>D-PBS (solução salina tamponada com fosfato de Dulbecco)</td><td>Gibco</td><td>14190250&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Pomada para os olhos</td><td>ThermoFisher</td><td>19-090-832</td><td></td></tr><tr><td>Buffer FACS</td><td></td><td></td><td>2% FBS 1% azida de sódio em PBS</td></tr><tr><td>Soro fetal bovino</td><td>Ciências da Vida da Corning</td><td>35-011-CV</td><td></td></tr><tr><td>Placa de fundo plano de 96 poços</td><td>Ciências da Vida da Corning</td><td>CLS3997</td><td></td></tr><tr><td>Soro AB humano inativado por calor</td><td>Pesquisa inovadora</td><td>4931</td><td></td></tr><tr><td>Human TruStain FcX (Solução de Bloqueio do Receptor Fc)</td><td>Biolenda</td><td>422301</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano líquido&nbsp; &nbsp;</td><td>Piramal Pharma Limitada</td><td>66794-017-10</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de imagem in vivo IVIS Spectrum</td><td>PerkinElmer</td><td>124262</td><td></td></tr><tr><td>Meios de cultura de linhagem celular JeKo-1</td><td></td><td></td><td>10% FBS 1% penicilina-estreptomicina-glutamina em meio RPMI-1640</td></tr><tr><td>Kit de coloração de células mortas Aqua corrigível viva/morta, para excitação de 405 nm</td><td>Invitrogen</td><td>L34966</td><td></td></tr><tr><td>Coluna LS</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td>Seleção negativa de contas</td></tr><tr><td>Linfoprep</td><td>Tecnologias de células-tronco</td><td>07811</td><td>Gradiente de densidade médio</td></tr><tr><td>Solução de estoque MACS BSA</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-376</td><td>Tampão de isolamento de monócitos clássicos&nbsp;</td></tr><tr><td>Anticorpo de camundongo anti-humano CD206 conjugado com AF546&nbsp;</td><td>Santa Cruz Biotecnologia</td><td>SC-376232</td><td></td></tr><tr><td>ACENO. Cg-Prkdcsid&nbsp; Camundongos Il2rgtm1Wjl/SzJ (NSG)</td><td>Laboratório Jackson&nbsp;</td><td>5557</td><td></td></tr><tr><td>CD16 anti-humano conjugado com PE</td><td>Biolenda</td><td>302007</td><td>Anticorpo de fluxo</td></tr><tr><td>Penicilina-estreptomicina-glutamina (100x), líquido</td><td>Gibco</td><td>10378-016</td><td></td></tr><tr><td>CD163 anti-humano conjugado com PerCP</td><td>Biolenda</td><td>333625</td><td>Anticorpo de fluxo</td></tr><tr><td>Anticorpo iNOS anti-humano de coelho conjugado com AF647&nbsp;</td><td>Tecnologia de proteína</td><td>CL647-18985</td><td></td></tr><tr><td>GM-CSF humano recombinante</td><td>Tecnologias de células-tronco</td><td>78015</td><td></td></tr><tr><td>RPMI-1640 médio</td><td>Gibco</td><td>11875093</td><td></td></tr><tr><td>SepMate-50 IVD</td><td>Tecnologias de células-tronco</td><td>85450</td><td>Isolamento de PBMC por centrificação de gradiente de densidade&nbsp;</td></tr><tr><td>Azida de sódio, 5% (p / v)</td><td>Ricca Química</td><td>7144.8-16</td><td></td></tr><tr><td>Placa de 48 poços tratada com cultura de tecidos</td><td>Ciências da Vida da Corning</td><td>3548</td><td></td></tr><tr><td>Analisador de viabilidade de células XR de células Vi</td><td>Beckman Coulter</td><td></td><td>Contador de células</td></tr><tr><td>X-VIVO 15 Meio de Células Hematopoiéticas Sem Soro</td><td>Lonza</td><td>04-418Q</td><td></td></tr></tbody></table>

estudando interações entre células mieloides e células t car in vitro e in vivo

Studying Interactions between Myeloid Cells and CAR T Cells In Vitro and In Vivo

O objetivo deste protocolo é estabelecer modelos in vitro e in vivo para estudar interações entre macrófagos imunossupressores humanos e células CART devido à natureza complexa e dinâmica das interações e aos limitados modelos de xenoenxerto existentes. Seguindo o protocolo, monócitos clássicos humanos isolados são diferenciados para adquirir fenótipos semelhantes a M2 e se tornarem funcionalmente imunossupressores.
Para confirmar a pureza dos monócitos clássicos humanos isol...

Estudando interações entre células mieloides e células T CAR in vitro e in vivo

Chimeric antigen receptor T (CART) cell therapy has led to remarkable clinical successes treating hematological malignancies. However, most patients ...

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Research

JoVE Journal

Cancer Research

Pesquisa sobre o Câncer

Este vídeo demonstra um ensaio in vitro para validar a atividade das células T do receptor de antígeno quimérico (CAR). As células do linfoma de células B que expressam o antígeno CD19 e a luciferase citoplasmática são co-cultivadas com células T CAR específicas para CD19. A ligação do CAR ao CD19 em um tumor induz as células T CAR a liberar citocinas e toxinas que causam citotoxicidade das células tumorais. A atividade das células T CAR é avaliada pela quantificação da citocina liberada e...

Um ensaio in vitro para avaliar a atividade antitumoral de células T CAR específicas para tumores

Aqui, apresentamos um protocolo para a determinação na vivo da ativação de células (células T) de T CD4 naïve, proliferação e diferenciação de células Th1 induzida pela medula óssea de GM-CSF (BM)-derivado de células dendríticas (DCs). Além disso, este protocolo descreve isolamento BM e células T, geração de DC e DC e células T transferência adotiva.

Um modelo de rato In Vivo para ativação de células T Naïve CD4 medida, proliferação e diferenciação de células Th1 induzida pelas células dendríticas derivadas de medula óssea

Aqui, apresentamos um protocolo para a produção e testes pré-clínicos de murino células CD19 carro T por transdução retroviral e utilização como uma terapia contra linfoma de célula B A20 syngeneic estabelecida em camundongos BALB/c com ou sem lymphodepleting pré-condicionamento.

Um modelo de linfoma de célula B Syngeneic Mouse para avaliação pré-clínica de pilhas de T de carro CD19

Aqui, descrevemos um método in vitro co-cultura para recursivamente desafio tumor-alvo as células T, que permite a análise fenotípica e funcional da atividade antitumoral de célula T.

Em Vitro Tumor Cell reexposição para avaliação preditiva de Receptor de antígeno quimérico célula T função antitumoral

Descrevemos uma abordagem para gerar de forma confiável células T do receptor de antígeno quimérico (CAR) e testar sua diferenciação e função in vitro e in vivo.

Fabricação de células T do receptor de antígeno quimérico (CAR) para imunoterapia adotiva

Esse protocolo agiliza a produção de vetores retrovirais e a transdução de células T murinas, facilitando a geração eficiente de células CAR-T em camundongos.

Geração Eficiente de Células T do Receptor de Antígeno Quimérico Murino (CAR)-T

Este protocolo fornece um método de isolamento primário de células T murinas e microscopia de lapso de tempo da migração de células T sob condições ambientais específicas com análise quantitativa.

Ensaio de migração in vitro em tempo real para células T CD8+ murinas primárias

O presente protocolo descreve um fluxo de trabalho experimental que permite a análise ex vivo da estimulação de células T humanas em um sistema de co-cultura alogênica com células tumorais pré-tratadas.

Análise da atividade de células T humanas em um ambiente de co-cultura alogênica de células tumorais pré-tratadas

Aqui, descrevemos um método para criar gotículas de emulsão dupla encapsulando uma célula T e uma célula-alvo cancerígena para examinar a morte celular no nível de uma única célula. Este método permite a quantificação dupla de moléculas citotóxicas e apoptose de células-alvo em uma grande população de células T.

Ensaio de citotoxicidade baseado em gotículas para avaliar células T receptoras de antígeno quimérico no nível de célula única

Este protocolo descreve as etapas essenciais para o cultivo das células T primárias, incluindo seu isolamento, ativação, expansão e transfecção transitória por eletroporação de mRNA. Além disso, é proposto um fluxo de trabalho e um painel de anticorpos para análise citométrica de fluxo do fenótipo, marcadores de ativação, viabilidade e expressão do receptor de antígeno quimérico (CAR).

Isolamento, cultivo e transfecção transitória de células T humanas primárias para gerar células T do Receptor de Antígeno Quimérico (CAR)

Aprenda a estudar interações entre macrófagos imunossupressores humanos e células T CAR em modelos simplificados in vitro e in vivo para linfoma de células do manto. Esses modelos facilitam o teste de imunoterapias direcionadas.

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