Name: In vitro Modelo de impacto para gerar lesão subletal de condrócitos em explantes de cartilagem bovina (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-27T13:25:00.000+00:00
Duration: 6 min 42 s
Description: Aprenda a criar um modelo de impacto ex vivo para estudar lesões subletais em condrócitos de cartilagem bovina. Este método permite analisar respostas moleculares ao estresse mecânico e investigar mecanismos da osteoartrite pós-traumática.

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</ol>

<table><tbody><tr><td>#11 lâmina de bisturi estéril</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10-001-823</td><td>Remove cartilagem do osso</td></tr><tr><td>#22 lâmina de bisturi estéril</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10-001-833</td><td>Remove a pele dos tecidos bovinos e abre a articulação cortando os ligamentos</td></tr><tr><td>10-1000 pontas de pipeta ul</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>02-707-411</td><td>Meça e transfira&nbsp; PBS, meios de cultura e outras soluções&nbsp;</td></tr><tr><td>Etanol de 200 provas</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>03-007-647</td><td>Usado para preparar etanol a 70% como agente esterilizante para desinfetar ferramentas cirúrgicas e manter um ambiente estéril durante a preparação e processamento de tecidos.</td></tr><tr><td>Tubo de centrífuga de 50 mL (estéril)</td> <td>Thermo Fisher Scientific</td><td>339652</td><td>Usado para armazenar mídia e amostras</td></tr><tr><td>Garrafão de 5 galões</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>04-355-233</td><td>Recipiente PBS estéril que é conectado ao adaptador giratório por mangueira.</td></tr><tr><td>Placa de 6 poços (estéril)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>140685</td><td>Usado para armazenar temporariamente núcleos osteocondrais em um ambiente estéril com meios pré-aquecidos durante a coleta, incubação antes de estudos de impacto, e imagem Acelerômetro</td></tr><tr><td></td><td>Kistler</td><td>8743A5</td><td>Usado para medir a aceleração produzida durante um</td></tr><tr><td>kit de coloração de apoptose de impacto (CellEvent)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>C10423</td><td>Usado para detectar e visualizar células apoptóticas</td></tr><tr><td>Frascos de lavagem autoclaváveis</td><td>Nalgene</td><td>2405-0500</td><td>Encha com PBS estéril para hidratar a cartilagem durante a colheita de tecidos.</td></tr><tr><td>Serra de autópsia</td><td>Mopec</td><td>BD 810</td><td>Remova qualquer excesso de osso após abrir a articulação ou extrair o núcleo osteocondral</td></tr><tr><td>Lâmina de serra de autópsia&nbsp;</td><td>Mopec</td><td>BD 101</td><td>Usado para cortar o osso para isolar e liberar explantes osteocondrais.</td></tr><tr><td>Betadine</td><td>Avrio Saúde L.P.</td><td>n/a</td><td>Utilizado para desinfecção do exterior de amostras de bovinos antes de serem movidas para o exaustor e diluídas para desinfecção das amostras osteocondrais finais.</td></tr><tr><td>Mangueira transparente de 4 pés</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td>Usada para conectar o garrafão de 5 litros contendo PBS ao adaptador giratório da furadeira&nbsp; para transportar PBS.</td></tr><tr><td>Broca de retirada do núcleo&nbsp;</td><td>UKAM Industrial Superhard Tools</td><td>3EDCD7160</td><td>Usado para extrair explantes osteocondrais do osso perfurando a cartilagem articular e o osso subcondral.-&nbsp; diâmetro da broca: 7/16" (Brocas de Núcleo de Diamante Eletrodepositadas)</td></tr><tr><td>Chave crescente</td><td>McMaster Carr</td><td>5362A1</td><td>Usado para apertar a braçadeira (que mantém a junta no lugar) e apertar a broca de retirada do núcleo&nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td>Pipetas sorológicas descartáveis</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>13-678-11</td><td>Medir e transferir PBS e meios de cultura</td></tr><tr><td>Underpad descartável</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>23-666-062</td><td>Usado para cobrir o espaço de balcão para absorver água e líquidos durante a colheita para maior conveniência e higiene</td></tr><tr><td>Unidades de filtro a vácuo descartáveis</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>SCGP00525</td><td>Filter PBS e outras soluções</td></tr><tr><td>Furadeira&nbsp; &nbsp;</td><td>WEN</td><td>433TV 3,25 polegadas</td><td>Aplique força para perfurar amostras osteocondrais - WEN 433TV</td></tr><tr><td>Torno de ângulo de inclinação da furadeira</td> de bancada de força industrial de 3,25 polegadas <td>WEN</td><td>TV434</td><td>Fixa amostras osteocondrais em uma posição fixa no ângulo desejado durante o processo de retirada do núcleo.</td></tr><tr><td>Torre de queda</td><td>feita sob medida</td><td>n/a</td><td>Usado para impactar as amostras</td></tr><tr><td>FIJI (ImageJ Extension)</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td>Software usado para processar e analisar imagens de microscopia, incluindo viabilidade celular e quantificação de apoptose</td></tr><tr><td>Fórceps</td><td>Fisherbrand</td><td>12-000-163</td><td>Usado para cortar tecido no capuz, abrir a junta e transferir as amostras</td></tr><tr><td>Gaze (estéril)</td><td>Dukal</td><td>6412</td><td>Usado para hidratar a cartilagem articular após a abertura da cápsula articular</td></tr><tr><td>Garrafa de mídia de vidro de 1 litro</td><td>Sigma Aldrich</td><td>CLS13951LHTC</td><td>Usado para armazenar PBS estéril&nbsp;</td></tr><tr><td>Luvas</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>19-130-1597D</td><td>Usado para proteger a equipe de coleta</td></tr><tr><td>Insulina-Transferrina-Selênio (ITS)</td><td>Gibco</td><td>41400-045</td><td>Suplemento de mídia</td></tr><tr><td>Software de aquisição de dados LabVIEW National</td><td>Instruments</td><td>n/a</td><td>Captura dados da célula de carga e acelerômetro durante o teste de impacto para análise subsequente.</td></tr><tr><td>Ácido L-ascórbico</td><td>Merck</td><td>A4403</td><td>Suplemento de mídia</td></tr><tr><td>Microscópio de varredura confocal a laser</td><td>Olympus</td><td>FV1000D</td><td>Usado para capturar imagens tridimensionais de alta resolução de amostras de tecido manchado.</td></tr><tr><td>Kit de coloração de ensaio vivo e morto</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>L3224</td><td>Usado para diferenciar entre células vivas e mortas em amostras de tecido para avaliar a viabilidade celular</td></tr><tr><td>Célula de carga</td><td>Kistler</td><td>9712B5000</td><td>Usado para medir a força aplicada durante um impacto.</td></tr><tr><td>MATLAB&nbsp;</td><td>A MathWorks Inc.</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Serra de fita para carne</td><td>Skymsen</td><td>MSKLE</td><td>Remover casco do carpo de amostras de bovinos</td></tr><tr><td>Micropipeta 10-100 uL</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>FBE00100</td><td>Medição e transferência&nbsp; PBS e meios de cultura</td></tr><tr><td>Meio essencial mínimo (MEM) solução de aminoácidos não essenciais</td><td>Gibco</td><td>11140-050</td><td>Suplemento de mídia</td></tr><tr><td>Modified Eagle' s Meio (DMEM)</td><td>Gibco</td><td>10566-016</td><td>Cultura de explante osteocondral.</td></tr><tr><td>Penicilina-Estreptomicina</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15-140-148</td><td>Suplemento de mídia</td></tr><tr><td>Solução salina tamponada com fosfato</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>BP399-20</td><td>Usado para enxaguar, hidratar e resfriar tecidos para manter as condições fisiológicas, prevenir a desidratação e preparar soluções de coloração</td></tr><tr><td>Porta-amostras na torre de queda</td><td>feito sob medida</td><td>n/a</td><td>Protege o núcleo osteocondral durante o impacto.</td></tr><tr><td>Cabo de bisturi&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>16-100-107</td><td>Usado para corte preciso, dissecção de tecido e abertura da junta.</td></tr><tr><td>Parafusos (adicionar ao cad)</td><td></td><td></td> <td>Rosca 6-32 Tamanho-18-8 Parafusos de cabeça de soquete de aço inoxidável</td></tr><tr><td>Piruvato de sódio</td><td>Gibco</td><td>11360-070</td><td>Suplemento de mídia</td></tr><tr><td>Cabeça de impactor esférica</td><td>McMaster Carr</td><td>9292K52</td><td>Autoclave antes do procedimento de impacto</td></tr><tr><td>Máscaras cirúrgicas</td><td>Filtermask</td><td>375101</td><td>Usado para proteger a equipe de coleta</td></tr><tr><td>Adaptador giratório de água&nbsp;</td><td>UKAM Industrial Superhard Tools</td><td>7035812</td><td>Conecta-se à broca de perfuração para fornecer um fluxo contínuo de PBS para resfriamento durante o processo de perfuração.</td></tr></tbody></table>

in vitro modelo de impacto para gerar lesão subletal de condrócitos em explantes de cartilagem bovina

In Vitro Impact Model to Generate Sublethal Chondrocyte Injury in Bovine Cartilage Explants

A carga de impacto mecânico aos explantes osteocondrais foi aplicada usando uma torre de queda com alturas de 4,0 cm, 4,5 cm e 5,0 cm acima do tecido (n = 3 ou 4). O aumento da altura do carro antes de ser liberado resultou em maiores forças de impacto, tensões médias de pico, taxas de carregamento e energias de impacto (Tabela 1).
Procuramos desenvolver um modelo de lesão de cartilagem ex vivo que fosse subletal por 24 h após o impacto. A caracterização da coloração ...

In vitro Modelo de impacto para gerar lesão subletal de condrócitos em explantes de cartilagem bovina

Post-Traumatic Osteoarthritis (PTOA) is a prevalent, degenerative, and painful progressive joint disease that typically arises after significant joint ...

in-vitro-impact-model-to-generate-sublethal-chondrocyte-injury-bovine

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bioengenharia

Uma técnica experimental para o tratamento de lesões condrais no joelho do coelho é descrito. O implante de condrócitos autólogos semeadas numa matriz é um método bem aceite para a remodelação e reparação de lesões da cartilagem articular que fornecem resultados satisfatórios a longo prazo. Matrix-assistida transplante de condrócitos autólogos (MACT) oferece um método padronizado e implante clinicamente estabelecida.

Matrix-assistida Transplante autólogo de condrócitos para remodelação e reparação de lesões condrais em um modelo de coelho

Apresentamos um método para avaliar a extensão espacial da lesão/morte celular na superfície articular das articulações murino intactas após a aplicação de cargas mecânicas controladas ou impactos. Esse método pode ser usado para investigar como osteoartrite, fatores genéticos e/ou regimes de carregamento diferentes afetam a vulnerabilidade dos condrócitos em situ .

Visualização em tempo real e análise do condrócito prejuízo devido ao carregamento mecânico em explantes de cartilagem murino totalmente intacta

Aqui, apresentamos um protocolo que descreve o isolamento e a culturing de explants de cartilagem de joelhos bovinos. Este método fornece uma ferramenta fácil e acessível para descrever mudanças de tecido em resposta a estímulos biológicos ou novas terapêuticas visando a articulação.

Um modelo ex vivo da cultura do tecido da cartilagem que remodela em explants bovinos do joelho

Aqui, apresentamos o modelo de lesão da cartilagem intra-articular induzida por carga cíclica do joelho de rato, gerado por 60 compressões cíclicas acima de 20 N, resultando em danos à cartilagem condilar femoral em ratos.

Um Método Não Invasivo para Gerar o Modelo de Lesão da Cartilagem Intra-Articular Induzida por Carga Cíclica do Joelho de Rato

O modelo aberto de impacto do côndilo femoral medial em coelhos é confiável para estudar a osteoartrite pós-traumática (PTOA) e novas estratégias terapêuticas para mitigar a progressão da PTOA. Este protocolo gera um defeito cartilaginoso isolado do côndilo femoral medial posterior em coelhos utilizando uma torre de queda baseada em carruagem com cabeça de impacto.

Modelo de impacto de cartilagem reprodutível para gerar osteoartrite pós-traumática em coelhos

Este protocolo estabelece um modelo de defeitos de cartilagem de espessura total (FTCD) através da perfuração de orifícios no sulco troclear femoral de ratos e mensuração do comportamento da dor e alterações histopatológicas subsequentes.

Desenvolvimento e Avaliação de um Modelo de Defeitos Cartilaginosos em Rato

O protocolo proposto envolve uma abordagem global para avaliar a formação óssea no contexto da regeneração óssea usando análises multimodais. Tem como objetivo fornecer informações qualitativas e quantitativas sobre a nova formação óssea, aumentando o rigor e a validade das investigações básicas e pré-clínicas.

Caracterização abrangente da mineralização tecidual em um modelo ex vivo

Aqui, apresentamos um protocolo integrado para gerar lesões osteocondrais controladas nos joelhos de ovelha, a fim de estabelecer um modelo experimental adequado para estudos de regeneração óssea e cartilaginosa. O protocolo descreve um método para induzir um defeito osteocondral de espessura total no côndilo femoral, utilizando técnicas que minimizam os impactos no bem-estar animal e a variabilidade nos resultados.

Estabelecimento e Avaliação de um Modelo Ovino de Defeito Osteocondral de Espessura Total

Accurate, quantificação baseada em causalidade da função diastólica global tem sido alcançado por meio de análise baseada na modelização cinemática do fluxo transmitral através do parametrizada enchimento diastólico formalismo (PDF). PDF gera rigidez, relaxamento e parâmetros de carga únicas e elucida 'novo' fisiologia, proporcionando índices sensíveis e específicos de disfunção.

Quantificação da função global diastólica por análise baseada em Modelagem cinemática de transmitral fluxo através do formalismo de enchimento parametrizada diastólica

Nós desenvolvemos um teste de irritação nos olhos que utiliza um modelo de tecido tridimensional epitelial córnea-like humana reconstruída (RHCE). O teste é capaz de discriminar entre irritante ocular e materiais corrosivos (GHS Categorias 1 e 2 combinados) e aqueles que não necessitam de rotulagem (GHS nenhuma categoria).

Irritação dos olhos Test (EIT) para identificação de perigos de olho irritantes químicos usando reconstruída Humano Córnea-like epitelial (RHCE) Modelo Tissue

Aprenda a criar um modelo de impacto ex vivo para estudar lesões subletais em condrócitos de cartilagem bovina. Este método permite analisar respostas moleculares ao estresse mecânico e investigar mecanismos da osteoartrite pós-traumática.

In vitro Modelo de impacto para gerar lesão subletal de condrócitos em explantes de cartilagem bovina

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