Name: In vitro Exposições à Cannabis de Células Epiteliais Pulmonares na Interface Ar-Líquido (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-20T13:05:00.000+00:00
Duration: 7 min 5 s
Description: Aprenda a expor células epiteliais pulmonares ao vapor de cannabis em interface ar-líquido usando microbalança de cristal de quartzo. Este protocolo padronizado melhora a dosimetria em tempo real para toxicologia por inalação.

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</ol>

<table><tbody><tr><td>Tubo de centrífuga de 15 mL, rack (rack de poliestireno), estéril</td><td>Montreal Biotech Inc.</td><td></td><td></td>MBI601051C</tr><tr><td>frascos de vidro de 30 mL Thomas</td><td>Scientific</td><td>1755F32</td><td></td></tr><tr><td>A549 células</td><td>ATCC</td><td>CCL-185</td><td></td></tr><tr><td>Antibiótico-antimicótico (100x)</td><td>Wisent</td><td>450-115-EL</td><td></td></tr><tr><td>Moedor de ervas de cannabis</td><td>Genchi</td><td>https://www.amazon.ca/Genchi-Grinder-Crystal-Threads-Premium/dp/B094WX443Y/ref=sr_1_10?crid=A1EV93N8PW1V&dib=eyJ2Ijo iMSJ9.WX_vMBLeAHzc6JplZiba8i w7k_cGpHrEm0VunfiDZqO0U1mT NA0Tr8j5nGMqrGq1BW75hAV8Fr3 SDCGH7O7zwsmmCWOxvdAEN4 97Npj07w0FHMuNDtuKZ3hKv9d8 vauHRtueWaDqYEPOCIAy956bGf PwXu2Gp9nCWVhFCo1gHqgeh1N nrWwD3lJ_r_wx2GoauoNdVw9eH A2QYc1tx3XKMidd2YkVRF_ABYL ZJd0EIDxi22hBnzaM4KklLO6Ep0v OGb1QifhM062KUvTTY9PAOUn8F -O1V0qNYQiRk6SQo2WId2wOHS Mz_zo4YCbkDQf2rNGy81iXhuBzV qu9LhvOcI1xnPUd-JPLx_4rZdSC92 Q_QZODiSxBhH-ellca78LW2iV4XXU vIr-fVWIKdhrS49MD7KV1lCjdBcT_ K3l4bT0mBgZB1_Qpgf_5tmrj-kf.-ctY GDLXKn-ovr6On-5g1G0_oK5mrHdj CN3LXumyu8Q& dib_tag = se & palavras-chave=herb%2Bgrinder& qid=1736346511& sprefix=herb%2Bgrinder%2Caps% 2C168& sr = 8-10 & th=1</td><td></td></tr><tr><td>Colágeno da placenta humana, tipo IV</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C7521</td><td></td></tr><tr><td>Costar 12 mm transwell, 0.4 &micro; Membrana de poliéster de poros m Inserções Stemcell</td><td>Technologies</td><td>38023</td><td></td></tr><tr><td>Kit de detecção de citotoxicidade (LDH)</td><td></td>Vaporizador de ervas secas <td>Roche</td> 11644793001 <td></td></tr><tr><td>Davinci MIQRO-C</td><td>DAVINCI</td><td>https://davincivaporizer.com/products/davinci-miqro-c</td><td></td></tr><tr><td>Dimetilsulfóxido Sigma-Aldrich</td><td></td><td>34869</td><td></td></tr><tr><td>Meio DMEM</td><td>Wisent</td><td>319-005-CL</td><td></td></tr><tr><td>Flor de cannabis seca</td><td>Soci&eacute; t&eacute; qu&eacute; b&eacute; coise du cannabis</td><td>https://www.sqdc.ca/en-CA/dried-cannabis?&fn1=CannabinoidBalanceLookup Value&fv1=THC</td><td>Cannabinoid Content: 17&ndash; 23% de THC < 0,1% de CBD&nbsp;</td></tr><tr><td>Soro fetal bovino</td><td>Wisent</td><td>080-150</td><td>FBS</td></tr><tr><td>flexiWare&nbsp;</td><td>SCIREQ</td><td>https://www.scireq.com/downloads/</td> <td>Versão 8.4.1</td></tr><tr><td>Gentamicina</td><td>Wisent</td><td>450-134-XL</td><td></td></tr><tr><td>Ácido acético glacial</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>100063&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Glutamax</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>inExpose expoCube in vitro exposure package&nbsp; &nbsp;</td><td>SCIREQ</td><td>IX-XCP&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Infinite 200 PRO</td><td>TECAN</td><td>30125944</td><td></td></tr><tr><td>metanol de grau LC/MS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>106035</td><td></td></tr><tr><td>Solução salina tamponada com fosfato</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>T175 EasYFlask, TC Surface, Filter Cap</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>159910</td><td></td></tr><tr><td>T75 EasYFlask, TC Surface, Filter Cap</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td></td><td></td>156499</tr><tr><td>Brometo de tetrazólio azul de tiazolilo</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M 2128</td><td>MTT</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>108603</td><td></td></tr><tr><td>Banho de limpeza ultrassônico</td><td>VWR</td><td>18303</td><td>Sonicator Bath</td></tr><tr><td>Organizador semanal de pílulas</td><td>HealthSmart</td><td>640-8223-0000</td><td></td></tr></tbody></table>

in vitro exposições à cannabis de células epiteliais pulmonares na interface ar-líquido

In vitro Cannabis Exposures of Lung Epithelial Cells at the Air-Liquid Interface

Durante os experimentos com o sistema expoCube, quatro poços recebem a exposição ao vapor de cannabis, quatro poços são expostos ao ar condicionado como controles do veículo e os quatro poços restantes são totalmente fechados como controles negativos (Figura 1C) 17 . Essa configuração permite uma comparação precisa entre condições tratadas, veiculares e negativas. O sistema é umidificado para criar um ambiente adequado para culturas de células (Figura 2), e a regulação da temperatura dentro do sistema aumenta a deposição de partículas por meio da termoforese, permitindo a entrega eficiente de compostos vaporizados às células18. Para quantificar a exposição, medimos a quantidade de Δ9-THC como um marcador de deposição de vapor de cannabis no local de exposição celular. Essa quantificação é crucial para otimizar os tempos e doses de exposição, permitindo que os pesquisadores ajustem os períodos de exposição ativa para atingir as doses desejadas em experimentos de cultura de células (Figura 3). Ao calcular a proporção de Δ9-THC coletado no filtro de fluxo de exposição para a quantidade depositada em poços individuais, podemos estimar a dose real fornecida às células (Tabela 1). Essa dose calculada informa a faixa de exposição desejada, auxiliando na determinação de parâmetros ideais para estudar as respostas celulares ao vapor de cannabis de maneira consistente e mensurável. Isso pode ser realizado para outros canabinóides, dependendo do perfil canabinóide da cepa de cannabis selecionada. Além disso, a análise QCM pode ser realizada para medir a deposição de vapor de cannabis em tempo real. A Figura 4 mostra a deposição de vapor de cannabis em um período de 30 minutos em que o vaporizador e o material de cannabis foram trocados a cada 5 minutos. Cada poço exibiu um aumento consistente na massa ao longo do tempo, indicando deposição efetiva e contínua de partículas inteiras de vapor de cannabis.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68102/68102fig01.jpg"> 
Figura 1: Esquema do sistema de exposição in vitro/ex vivo ALI/Transwell para exposição ao vapor de cannabis no ALI. (A) O vaporizador DaVinci MIQRO foi usado para gerar vapor de cannabis. Esta amostra é umidificada e transportada através do amostrador isocinético para o local de exposição. A unidade de controle permite ajustes nas saídas de fluxo de ar e gradientes de temperatura. (B) Fotografias da configuração do sistema de exposição. (C) O interior do expoCube é compartimentado em três fileiras: uma fileira de teste para exposição ao vapor de cannabis, uma fileira de controle do veículo de ar condicionado e a fileira de controle negativo fechada que permanece intocada por qualquer fluxo de ar. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68102/68102fig01large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68102/68102fig02.jpg"> 
Figura 2: Perfil de umidade relativa (%) registrado ao longo do tempo. Esses dados mostram os níveis de umidade relativa quando os Aeronebs são ativados, atingindo e mantendo uma umidade média de 75%. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68102/68102fig02large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68102/68102fig03.jpg"> 
Figura 3: Quantificação da deposição de Δ 9-THC por meio da análise LC/MS após exposições de 30 minutos ao vapor de cannabis. (UMA-C) A deposição de Δ9-THC foi medida em cada poço após três exposições independentes ao vapor de 30 minutos, cada uma usando 1,5 g de uma cultivar de cannabis com alto teor de THC. Os níveis de Δ9-THC foram quantificados por LC / MS. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68102/68102fig03large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68102/68102fig04.jpg"> 
Figura 4: Medições de QCM da deposição de vapor de cannabis no sistema de exposição in vitro / ex vivo ALI / Transwell durante um regime de exposição de 30 minutos. (AD) Cada gráfico representa a deposição cumulativa de partículas de vapor de cannabis nos poços 1-4, com massa medida em microgramas (μg) ao longo do tempo. A taxa de deposição demonstra um acúmulo constante em todos os poços. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68102/68102fig04large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Deposição do filtro de fluxo primário (μg)</td>
			<td>Deposições de poços (μg)</td>
			<td>Porcentagem de fluxo primário depositado no poço (%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="4">Exposição 1</td>
			<td rowspan="4">2142.3</td>
			<td>4.7</td>
			<td>0.22</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4.4</td>
			<td>0.2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4.6</td>
			<td>0.22</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4.4</td>
			<td>0.21</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="4">Exposição 2</td>
			<td rowspan="4">2726.5</td>
			<td>4.1</td>
			<td>0.15</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3.9</td>
			<td>0.14</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4.4</td>
			<td>0.16</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4.6</td>
			<td>0.17</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="4">Exposição 3</td>
			<td rowspan="4">2400</td>
			<td>3.6</td>
			<td>0.15</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3.8</td>
			<td>0.16</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5</td>
			<td>0.21</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4</td>
			<td>0.17</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Média</td>
			<td>2422.9</td>
			<td>4.3</td>
			<td>0.18</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Desvio padrão</td>
			<td>292.8</td>
			<td>0.4</td>
			<td>0.03</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabela 1. Comparação da deposição de Δ9-THC no sistema de exposição in vitro/ex vivo ALI/Transwell entre o filtro de fluxo de exposição e o local de exposição celular.

In vitro Exposições à Cannabis de Células Epiteliais Pulmonares na Interface Ar-Líquido

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Este protocolo destina-se a demonstrar o método de exposição de culturas de células a produtos químicos tóxicos inalados. Exposição de diferenciado interface ar-líquido (LPA) culturas de células epiteliais das vias aéreas oferece um modelo único de exposição das vias aéreas de gases tóxicos como o cloro. Nesse artigo, descrevem efeito de exposição ao cloro em culturas de interface ar-líquido de células epiteliais e de cultura submersa de cardiomiócitos. Em sistemas de exposição in vitro...

A cultura in vitro modelo celular para Toxic Chemical Testing Inhaled

O objetivo deste protocolo é expor modelos organotípicos de tecido brônquico e nasal 3D humanos à fumaça de cigarro convencional (CS) na interface ar-líquido. O impacto do CS nos tecidos é então investigado usando um ensaio de atividade do citocromo P450, uma medição de batimento de cílios e uma abordagem de biologia de sistemas.

Avaliação do Impacto da exposição repetida de Organotípicas 3D brônquica e cultura nasal Tissue Models para Whole fumo do cigarro

Descreveremos um protocolo fácil projetado especificamente para atingir concentrações precisas e controladas de sevoflurano ou isoflurano em vitro a fim de melhorar a nossa compreensão dos mecanismos envolvidos na lesão pulmonar epitelial e para testar o romance terapias para a síndrome respiratória aguda.

In Vitro Método de controle de concentrações de Gases halogenados em culturas de células epiteliais alveolares

Aqui, apresentamos um protocolo para realizar exposições de aerossol de celular portátil e medir a resposta celular. O método utiliza células, crescidas na interface ar-líquido, imitando a fisiologia na vivo . Observou-se resposta celular de aerossóis de nanopartículas de cobre como estresse oxidativo através da geração de espécies reativas de oxigênio e citotoxicidade como liberação de lactato desidrogenase.

Um novo portátil em Vitro Cassette exposição para amostragem de aerossol

Apresentamos um sistema robusto, transferível e preditivo de exposição in vitro para a triagem e monitoramento de partículas transmitidas pelo ar sobre sua citotoxicidade pulmonar aguda, expondo células pulmonares humanas cultivadas na interface ar-líquido (ALI).

Avaliação da toxicidade da inalação aguda de partículas transmitidas por expor células pulmonares humanas cultivadas na Interface Ar-Líquido

Descrito aqui é um protocolo para estudar como o extrato de fumaça de cigarro afeta a colonização bacteriana em células epiteliais pulmonares.

Estudando efeitos da fumaça do cigarro na infecção por pseudomonas em células epiteliais pulmonares

Descrito é o método de cultura celular e exposição de um modelo brônquico in vitro para exposição realista e repetida de inalação a partículas para testes de toxicidade.

Um modelo epitelial de interface ar-líquido para exposição de inalação realista e repetida a partículas aéreas para testes de toxicidade

O presente protocolo descreve células pluripotentes pluripotentes induzidas por células-tronco derivadas do tipo 2 (iAT2s). Essas células podem ser cultivadas como esferas de auto-renovação na cultura 3D ou adaptadas à cultura de interface ar-líquido (ALI).

Gerando esferas 3D e culturas de interface ar-líquido 2D de células-tronco pluripotentes induzidas pelo homem

Aqui, descrevemos um modelo in vitro para isolar e diferenciar células epiteliais das vias aéreas murinas, com foco em sua aclimatação ao extrato de fumaça de cigarro crônico (CSE). O modelo pode ser utilizado para caracterizar de forma abrangente o impacto multi-ômico do CSE, o que possivelmente fornece informações sobre as respostas celulares sob exposição crônica à fumaça.

Modelo in vitro para estudo da diferenciação e alterações de multiômicas em células epiteliais das vias aéreas murinas estimuladas com extrato de fumaça de cigarro

Os cartuchos vape destilados de cannabis são dispositivos alimentados por bateria que aerossolizam extratos contendo altas concentrações de canabinóides. A ausência de modelos pré-clínicos estabelecidos para esses produtos cria desafios no estudo de seus efeitos fisiológicos. Para resolver essa lacuna, foi desenvolvido um modelo murino de inalação pré-clínico padronizado para destilados de cannabis vaporizados.

Desenvolvimento de um modelo pré-clínico de inalação para testar destilados de cannabis vaporizados

Aprenda a expor células epiteliais pulmonares ao vapor de cannabis em interface ar-líquido usando microbalança de cristal de quartzo. Este protocolo padronizado melhora a dosimetria em tempo real para toxicologia por inalação.

In vitro Exposições à Cannabis de Células Epiteliais Pulmonares na Interface Ar-Líquido

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