Name: Otimizando o isolamento e a purificação de células mesangiais glomerulares murinas (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-07T14:50:00.000+00:00
Duration: 4 min 46 s
Description: Aprenda a isolar e cultivar células mesangiais glomerulares murinas usando digestão com colagenase. Este método otimizado mantém a expressão de proteínas e viabilidade celular para pesquisas renais.

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<ol><li>Pollak, M. R., Quaggin, S. E., Hoenig, M. P., Dworkin, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+glomerulus%3A+The+sphere+of+influence%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">The glomerulus: The sphere of influence.</a> Clin J Am Soc Nephrol. 9 (8), 1461-1469 (2014).</li>
<li>Mené, P., Simonson, M. S., Dunn, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiology+of+the+mesangial+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Physiology of the mesangial cell.</a> Physiol Rev. 69 (4), 1347-1424 (1989).</li>
<li>Avraham, S., Korin, B., Chung, J. J., Oxburgh, L., Shaw, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mesangial+cell+-+the+glomerular+stromal+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Nephrol%22%5BJournal%5D)">The mesangial cell - the glomerular stromal cell.</a> Nat Rev Nephrol. 17 (12), 855-864 (2021).</li>
<li>Chadban, S. J., Atkins, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glomerulonephritis%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Glomerulonephritis.</a> Lancet. 365 (9473), 1797-1806 (2005).</li>
<li>Qian, Y., Feldman, E., Pennathur, S., Kretzler, M., Brosius, F. C. 3rd <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+fibrosis+to+sclerosis%3A+Mechanisms+of+glomerulosclerosis+in+diabetic+nephropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">From fibrosis to sclerosis: Mechanisms of glomerulosclerosis in diabetic nephropathy.</a> Diabetes. 57 (6), 1439-1445 (2008).</li>
<li>Zhu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Iga+Gut+microbiome+regulates+the+production+of+hypoglycosilated+iga1+via+the+tlr4+signaling+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrol+Dial+Transplant%22%5BJournal%5D)">Iga Gut microbiome regulates the production of hypoglycosilated iga1 via the tlr4 signaling pathway.</a> Nephrol Dial Transplant. 39 (10), 1624-1641 (2024).</li>
<li>Kong, L. -L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+murine+models+of+diabetic+nephropathy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Diabetes+Res%22%5BJournal%5D)">Advances in murine models of diabetic nephropathy.</a> J Diabetes Res. 2013, 797548(2013).</li>
<li>Schiffer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibitory+smads+and+tgf-beta+signaling+in+glomerular+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Inhibitory smads and tgf-beta signaling in glomerular cells.</a> J Am Soc Nephrol. 13 (11), 2657-2666 (2002).</li>
<li>Gyarmati, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sparsentan+improves+glomerular+hemodynamics%2C+cell+functions%2C+and+tissue+repair+in+a+mouse+model+of+FSGS%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Sparsentan improves glomerular hemodynamics, cell functions, and tissue repair in a mouse model of FSGS.</a> JCI Insight. 9 (19), e177775(2024).</li>
<li>Chafin, C. B., Regna, N. L., Hammond, S. E., Reilly, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+and+urinary+microRNA+alterations+in+NZB%2FW+mice+with+hydroxychloroquine+or+prednisone+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Immunopharmacol%22%5BJournal%5D)">Cellular and urinary microRNA alterations in NZB/W mice with hydroxychloroquine or prednisone treatment.</a> Int Immunopharmacol. 17 (3), 894-906 (2013).</li>
<li>Lucero, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tnf-%CE%B1+plus+il-1%CE%B2+induces+opposite+regulation+of+cx43+hemichannels+and+gap+junctions+in+mesangial+cells+through+a+rhoa%2Frock-dependent+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Tnf-α plus il-1β induces opposite regulation of cx43 hemichannels and gap junctions in mesangial cells through a rhoa/rock-dependent pathway.</a> Int J Mol Sci. 23 (17), (2022).</li>
<li>Schnaper, H. W., Hayashida, T., Hubchak, S. C., Poncelet, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tgf-beta+signal+transduction+and+mesangial+cell+fibrogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">Tgf-beta signal transduction and mesangial cell fibrogenesis.</a> Am J Physiol Renal Physiol. 284 (2), F243-F252 (2003).</li>
<li>Mackay, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glomerular+epithelial%2C+mesangial%2C+and+endothelial+cell+lines+from+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Glomerular epithelial, mesangial, and endothelial cell lines from transgenic mice.</a> Kidney Int. 33 (3), 677-684 (1988).</li>
<li>Wilson, H. M., Stewart, K. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glomerular+epithelial+and+mesangial+cell+culture+and+characterization%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Glomerular epithelial and mesangial cell culture and characterization.</a> Methods Mol Med. 107, 269-282 (2005).</li>
<li>Menè, P., Stoppacciaro, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+propagation+of+glomerular+mesangial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation and propagation of glomerular mesangial cells.</a> Methods Mol Biol. 466, 3-17 (2009).</li>
<li>Gilbert, S. F., Migeon, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((D-valine+as+a+selective+agent+for+normal+human+and+rodent+epithelial+cells+in+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">D-valine as a selective agent for normal human and rodent epithelial cells in culture.</a> Cell. 5 (1), 11-17 (1975).</li>
<li>Kreisberg, J. I., Venkatachalam, M., Troyer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contractile+properties+of+cultured+glomerular+mesangial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Contractile properties of cultured glomerular mesangial cells.</a> Am J Physiol. 249 (4 Pt 2), F457-F463 (1985).</li>
<li>Adam, M., Potter, A. S., Potter, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Psychrophilic+proteases+dramatically+reduce+single-cell+rna-seq+artifacts%3A+A+molecular+atlas+of+kidney+development%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Psychrophilic proteases dramatically reduce single-cell rna-seq artifacts: A molecular atlas of kidney development.</a> Development. 144 (19), 3625-3632 (2017).</li>
<li>Sadovnic, M. J., Brand-Elnaggar, J., Bolton, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+characterization+of+chicken+mesangial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nephron%22%5BJournal%5D)">Isolation and characterization of chicken mesangial cells.</a> Nephron. 58 (1), 75-84 (1991).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>100 &micro; m Filtro de células</td><td>Biosharp</td><td>BS-100-CS</td><td></td></tr><tr><td>Placa de Petri de 100 mm</td><td>Sorfa</td><td>230301</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de centrífuga de 15 mL</td><td>Sorfa</td><td>411000</td><td></td></tr><tr><td>Placa de cultura de células com fundo de vidro de 15 mm</td><td>Sorfa</td><td>201200</td><td></td></tr><tr><td>180 kDa Plus Marcador de proteína prestada</td><td>Vazyme</td><td>MP201-01</td><td></td></tr><tr><td>2 mM L-glutamina</td><td>BasalMedia</td><td>S210JV</td><td></td></tr><tr><td>4% Paraformaldeído</td><td>Biosharp</td><td>BL539A</td><td></td></tr><tr><td>40 &micro; Filtro de Células m</td><td>Biosharp</td><td>BS-40-XBS</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de Centrífuga de 50 mL</td><td>Sorfa</td><td>41000</td><td></td></tr><tr><td>Placa de Petri de 60 mm</td><td>Sorfa</td><td>230201</td><td></td></tr><tr><td>75% Álcool</td><td>Knowles</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>Placas de Cultura de Células de 96 Poços, Antibióticos Servicebio</td><td></td><td>CCP-96H</td><td></td>tratados com TC</tr><tr><td>(10 &mu; g/mL de ceftriaxona mais 100 &mu; g / mL gentamicina)</td> <td>NCM</td><td>C100C5</td><td></td></tr><tr><td>BCA (ácido bicinconínico) Kit de ensaio de proteína</td><td>CWBIO</td><td>CW0014S</td><td></td></tr><tr><td>Kit de contagem de células-8</td><td>Oriscience</td><td>CB101</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio confocal</td><td>FV-3000</td><td>Olympus</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>Earle's Solução salina balanceada (1x EBSS)&nbsp;</td><td>Beyotime</td><td>&nbsp; C0213</td><td></td></tr><tr><td>Soro Fetal Bovino (FBS)</td><td>Excell</td><td>FSP500</td><td></td></tr><tr><td>Analisador de Células de Fluorescência</td><td>Mira FL&nbsp;</td><td>Mídia Countstar</td><td></td></tr><tr><td>Fluoromount</td><td>Southern Biotech</td><td>0100-01</td><td></td></tr><tr><td>Solução de Insulina, Transferrina, Selênio 100x (ITS -G)</td>Microscópio de Fluorescência <td>Invertida Gibco 41400045</td><td></td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Tampão</td> de Lise Olympus <td>IX83</td><td></td></tr> Kit de Preparação de PÁGINA de Uma Etapa <tr><td></td><td>Adilab</td><td>PP1101</td><td></td></tr><tr><td>(10%)</td><td>Oriscience</td><td>PB102</td><td></td></tr><tr><td>Kit de Preparação de PÁGINA em Um Passo (7.5%)</td><td>Oriscience</td><td>PB101</td><td></td></tr><tr><td>PE anti-mouse CD140b Anticorpo</td><td>Biolegend</td><td>323605</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate Buffered Saline (PBS)</td><td>Servicebio</td><td>G4202</td><td></td></tr><tr><td>Pilão de Célula Plástica</td><td>Biofil</td><td>&nbsp; CC-4090</td><td></td></tr><tr><td>Inibidor de Proteinase Coquetel</td><td>Roche</td><td>4693159001</td><td></td></tr><tr><td>Membrana PVDF</td><td>Vazyme</td><td>E802-01</td><td></td></tr><tr><td>Insulina Humana Recombinante</td><td>Solarbio</td><td>11061-68-0</td><td></td></tr><tr><td>Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 Medium</td><td>Corning</td><td>10-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>SDS-PAGE Buffer de carregamento de amostras (5x)</td> <td>Servicebio</td><td>G2013</td><td></td></tr><tr><td>Especialmente personalizado Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 Medium (D-valina em vez de L-valina)</td> <td>Procell</td><td>WH3923U222</td><td></td></tr><tr><td>TBS (Tris Buffered Saline)&nbsp;</td><td>Servicebio</td><td>G0001-2L</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Biosharp</td><td>BS084</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA (0,25%)</td><td>Gibco</td><td>25200072</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Biosharp</td><td>BS100</td><td></td></tr><tr><td>Tipo I colagenase</td><td>Solarbio</td><td>&nbsp; CB140</td><td></td></tr></tbody></table>

otimizando o isolamento e a purificação de células mesangiais glomerulares murinas

Optimizing Isolation and Purification of Murine Glomerular Mesangial Cells

Este estudo desenvolveu um protocolo otimizado para isolamento de MCs murinos e cultura de células ex vivo. Até onde sabemos, não existe um método padrão para validar MCs primários ex vivo. De acordo com publicações anteriores, os MCs são caracterizados pela expressão de αSMA, Vimentina e Fibronectina 3,14,15. A análise de Western blot foi usada para detectar os níveis de expressão de MCs. Os MCs isolados neste...

Otimizando o isolamento e a purificação de células mesangiais glomerulares murinas

Mesangial cells (MCs) are stromal cells located in the middle space of the glomerulus, with pivotal functions in glomerular homeostasis. Methods for ...

optimizing-isolation-purification-murine-glomerular-mesangial

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Neste relatório nós descrevemos um método para o isolamento e cultura do nicho de células progenitoras do rim do rato embrionárias que podem ser usadas para estudar vias de sinalização que regulam tronco / progenitoras células do rim em desenvolvimento. Estas células em cultura são altamente acessível a pequenas moléculas e tratamento de proteínas recombinantes, e importante também para a transdução viral, que permite a manipulação eficiente das vias candidato.

Isolamento e cultura de células da zona nefrogênica do rim do rato embrionárias

Este vídeo descreve o método para isolar glomérulos intactos dos rins de camundongos. Os glomérulos encapsulados e descapsulados assim obtidos podem ser usados para a cultura de conseqüências de células epiteliais parietais do rim murino.

Isolamento de glomérulos: uma técnica para obter glomérulos intactos do rim murino

Neste vídeo, demonstramos as etapas para isolar e purificar células epiteliais tubulares renais para uma ampla gama de estudos de biologia molecular e cultura de células.

Isolamento de células renais murinas: uma técnica para isolar e gerar cultura primária de células epiteliais tubulares renais

Técnicas confiáveis e eficientes para o isolamento de células imunes renais são necessárias para aplicações a jusante. Isso requer a marcação de anticorpos de superfície de um pequeno número de células imunes renais. Aqui, descrevemos um método conciso para isolamento de células imunes renais que aparentemente atinge esse objetivo.

Extração Eficiência confiável e alta de rim células imunes

Um protocolo para a isolação de micróglia primária do cérebro murino é apresentado. Esta técnica ajuda a promover o entendimento atual de condições neurológicas. Centrifugação de gradiente de densidade e separação magnética são combinados para produzir rendimento suficiente de uma amostra altamente puro. Além disso, descrevem as etapas para a caracterização da micróglia.

Caracterização e isolamento de Mouse Microglia primária por centrifugação gradiente de densidade

O foco principal do presente protocolo é eficientemente isolar culturas viáveis glomérulos primário com contaminantes mínimas para uso em uma variedade de aplicações a jusante. Os glomérulos isolados mantém relações estruturais entre tipos de células do componente e podem ser cultivadas ex vivo por um curto período de tempo.

Um método eficiente de crivagem para isolar intactos glomérulos do rim de rato adulto

Aqui nós apresentamos um protocolo para murino na vivo rotulagem das proteínas de superfície celular glomerular com biotina. Este protocolo contém informações sobre como perfundir os rins do rato, isolar glomérulos e executar endógena imunoprecipitação da proteína de interesse.

Isolamento de glomérulos e In Vivo de rotulagem das proteínas de superfície celular Glomerular

Nós otimizamos um protocolo para isolar e purificar pericitos cardíacos murinos para pesquisa básica e investigação de sua biologia e potencial terapêutico.

Isolamento e purificação de Pericytes cardíacos murinos

Este artigo descreve um método para culminar e analisar os crescimentos de células epiteliais parieais glomerulares de glomeruli encapsulado isolados do rim do rato. Este método pode ser usado para estudar caminhos envolvidos na proliferação e migração de células epiteliais parietal.

Crescimento glomerular como um ensaio ex vivo para analisar caminhos envolvidos na ativação de células epiteliais parietal

O artigo descreve o método de isolamento de células endoteliais glomerulares imortalizadas condicionalmente dos rins de camundongos transgênicos expressando o vírus símio termolábil 40 e mitocôndrias fotoativáveis,excisadas por PhAM. Descrevemos o procedimento para isolamento de glomérulos de rins inteiros usando contas, etapas de digestão, semeadura e cultura de GECs-CD31 positivos.

Isolamento de células endoteliais glomerulares de camundongos imortalizadas condicionalmente com mitocôndrias fluorescentes

Aprenda a isolar e cultivar células mesangiais glomerulares murinas usando digestão com colagenase. Este método otimizado mantém a expressão de proteínas e viabilidade celular para pesquisas renais.

Otimizando o isolamento e a purificação de células mesangiais glomerulares murinas

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