Name: Determinação da morfologia mitocondrial em células vivas usando microscopia confocal (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-03T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 57 s
Description: Aprenda a avaliar a morfologia mitocondrial em células SH-SY5Y vivas usando microscopia confocal e MitoTracker. Este protocolo acessível auxilia pesquisadores em estudos neurofarmacológicos e doença de Parkinson.

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<ol><li>von der Malsburg, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+mechanism+of+mitochondrial+membrane+remodelling+by+human+OPA1%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Structural mechanism of mitochondrial membrane remodelling by human OPA1.</a> Nature. 620 (7976), 1101-1108 (2023).</li>
<li>Giacomello, M., Pyakurel, A., Glytsou, C., Scorrano, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cell+biology+of+mitochondrial+membrane+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The cell biology of mitochondrial membrane dynamics.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 21 (4), 204-224 (2020).</li>
<li>Kalia, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+basis+of+mitochondrial+receptor+binding+and+constriction+by+DRP1%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Structural basis of mitochondrial receptor binding and constriction by DRP1.</a> Nature. 558 (7710), 401-405 (2018).</li>
<li>Cao, Y. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MFN1+structures+reveal+nucleotide-triggered+dimerization+critical+for+mitochondrial+fusion%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">MFN1 structures reveal nucleotide-triggered dimerization critical for mitochondrial fusion.</a> Nature. 542 (7641), 372-376 (2017).</li>
<li>Chan, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+dynamics+and+its+involvement+in+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Pathol%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial dynamics and its involvement in disease.</a> Annu Rev Pathol. 15, 235-259 (2020).</li>
<li>Solaini, G., Sgarbi, G., Lenaz, G., Baracca, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+mitochondrial+membrane+potential+in+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biosci+Rep%22%5BJournal%5D)">Evaluating mitochondrial membrane potential in cells.</a> Biosci Rep. 27 (1-3), 11-21 (2007).</li>
<li>Gan, Z., Audi, S. H., Bongard, R. D., Gauthier, K. M., Merker, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantifying+mitochondrial+and+plasma+membrane+potentials+in+intact+pulmonary+arterial+endothelial+cells+based+on+extracellular+disposition+of+rhodamine+dyes%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol-Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Quantifying mitochondrial and plasma membrane potentials in intact pulmonary arterial endothelial cells based on extracellular disposition of rhodamine dyes.</a> Am J Physiol-Lung Cell Mol Physiol. 300 (5), L762-L772 (2011).</li>
<li>Zhong, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roflupram+exerts+neuroprotection+via+activation+of+CREB%2FPGC-1%CE%B1+signalling+in+experimental+models+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Roflupram exerts neuroprotection via activation of CREB/PGC-1α signalling in experimental models of Parkinson's disease.</a> Br J Pharmacol. 177 (10), 2333-2350 (2020).</li>
<li>Xu, B. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitofusin-2+mediates+cannabidiol-induced+neuroprotection+against+cerebral+ischemia+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Pharmacol+Sin%22%5BJournal%5D)">Mitofusin-2 mediates cannabidiol-induced neuroprotection against cerebral ischemia in rats.</a> Acta Pharmacol Sin. 44 (3), 499-512 (2023).</li>
<li>Hu, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PRDM16+exerts+critical+role+in+myocardial+metabolism+and+energetics+in+type+2+diabetes+induced+cardiomyopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Metabolism%22%5BJournal%5D)">PRDM16 exerts critical role in myocardial metabolism and energetics in type 2 diabetes induced cardiomyopathy.</a> Metabolism. 146, 155658(2023).</li>
<li>Reichardt, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA-binding+protein-A+promotes+kidney+ischemia%2Freperfusion+injury+and+participates+in+mitochondrial+function%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">DNA-binding protein-A promotes kidney ischemia/reperfusion injury and participates in mitochondrial function.</a> Kidney Int. 106 (2), 241-257 (2024).</li>
<li>Ahmad, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computational+classification+of+mitochondrial+shapes+reflects+stress+and+redox+state%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Dis%22%5BJournal%5D)">Computational classification of mitochondrial shapes reflects stress and redox state.</a> Cell Death Dis. 4 (1), e461(2013).</li>
<li>Valente, A. J., Maddalena, L. A., Robb, E. L., Moradi, F., Stuart, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+imagej+macro+tool+for+analyzing+mitochondrial+network+morphology+in+mammalian+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Histochem%22%5BJournal%5D)">A simple imagej macro tool for analyzing mitochondrial network morphology in mammalian cell culture.</a> Acta Histochem. 119 (3), 315-326 (2017).</li>
<li>Hemel, I., Engelen, B., Luber, N., Gerards, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+hitchhiker%27s+guide+to+mitochondrial+quantification%5BTitle%5D)+AND+%22Mitochondrion%22%5BJournal%5D)">A hitchhiker's guide to mitochondrial quantification.</a> Mitochondrion. 59, 216-224 (2021).</li>
<li>Vowinckel, J., Hartl, J., Butler, R., Ralser, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitoloc%3A+A+method+for+the+simultaneous+quantification+of+mitochondrial+network+morphology+and+membrane+potential+in+single+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mitochondrion%22%5BJournal%5D)">Mitoloc: A method for the simultaneous quantification of mitochondrial network morphology and membrane potential in single cells.</a> Mitochondrion. 24, 77-86 (2015).</li>
<li>Dagda, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+PINK1+function+promotes+mitophagy+through+effects+on+oxidative+stress+and+mitochondrial+fission%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Loss of PINK1 function promotes mitophagy through effects on oxidative stress and mitochondrial fission.</a> J Biol Chem. 284 (20), 13843-13855 (2009).</li>
<li>Przedborski, S., Tieu, K., Perier, C., Vila, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MPTP+as+a+mitochondrial+neurotoxic+model+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bioenerg+Biomembr%22%5BJournal%5D)">MPTP as a mitochondrial neurotoxic model of Parkinson's disease.</a> J Bioenerg Biomembr. 36 (4), 375-379 (2004).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Iodeto de 1-metil-4-fenilpiridínio (MPP+)</td><td>Macklin</td><td>M875357</td><td>Usado para induzir estresse oxidativo</td></tr><tr><td>Prato confocal</td><td>NINHO</td><td>801001</td><td>Usado para cultivar as células</td></tr><tr><td>Microscópio confocal</td><td>Nikon</td><td>C2</td><td>Usado para capturar imagens</td></tr><tr><td>Meio Eagle Modificado de Dulbecco/Mistura de Nutrientes F-12</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>11320033</td><td>Usado para fornecer nutrição às células</td></tr><tr><td>Dimetilsulfóxido (DMSO)</td><td>Beyotime</td><td>ST038</td><td>Usado para dissolver a sonda mitotracker</td></tr><tr><td>Soro fetal bovino (FBS)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A3161001C</td><td>Usado para fornecer nutrição às células</td></tr><tr><td>ImagemJ</td><td>Institutos Nacionais de Saúde</td><td>ImagemJ</td><td>Usado para analisar a morfologia mitocondrial</td></tr><tr><td>MitoTracker Vermelho CMXRos</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>M7512</td><td>Usado para visualizar mitocôndrias</td></tr><tr><td>Tampão fosfato salino (PBS)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>C10010500BT</td><td>Usado para lavar as células em pratos confocais</td></tr><tr><td>Célula SH-SY5Y</td><td>ATCC</td><td>CRL-2266</td><td>Usado para demonstrar o fluxo de trabalho da análise da morfologia mitocondrial</td></tr><tr><td>Adaptador de palco TI-SH-U</td><td>Nikon</td><td>MEC59110</td><td>Usado para proteger espécimes</td></tr></tbody></table>

determinação da morfologia mitocondrial em células vivas usando microscopia confocal

Determination of Mitochondrial Morphology in Live Cells Using Confocal Microscopy

Este protocolo descreve um procedimento detalhado e passo a passo para análise morfológica mitocondrial por meio de três módulos de otimização interdependentes: padronização de protocolos de preparação de amostras, otimização sistemática de parâmetros ópticos para imagens de microscopia confocal e diretrizes de processamento de imagem computacional. O protocolo ideal de preparação de amostras é fundamental para obter dados confiáveis de imagem mitocondrial. A avaliação sistemática das concentrações do MitoTracker Red CMX...

Determinação da morfologia mitocondrial em células vivas usando microscopia confocal

The dynamic balance of mitochondrial fusion and fission directly contributes to mitochondrial homeostasis, which influences numerous cellular functions in ...

determination-mitochondrial-morphology-live-cells-using-confocal

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Neuroscience

Neurociência

Fusão mitocondrial foi medida seguindo o equilíbrio da GFP matriz segmentada photoconverted através da rede mitocondrial ao longo do tempo. Até agora, apenas uma célula possa ser sujeita a uma análise de longo horas cinética de cada vez. Nós apresentamos um método que mede simultaneamente várias células, acelerando assim o processo de coleta de dados.

Uma resolução mais rápida, alta, MTPA-GFP baseada em ensaio de fusão mitocondrial aquisição de dados cinéticos de várias células em paralelo usando microscopia confocal

Fibroblastos de pacientes portadores de mutações no causadores de doenças de Parkinson genes representam um facilmente...

A utilização de recursos primários fibroblastos humanos de Monitoramento Fenótipos mitocondriais no Campo da Doença de Parkinson

Fonte: Kennedy, L. H., et. al. Visualização e imagem ao vivo de organelas de oligodendrócitos em fatias cerebrais organotípicas usando vírus adeno-associado e microscopia confocal. J. Vis. Exp. (2017)Este vídeo demonstra a imagem de mitocôndrias de oligodendrócitos em fatias de cérebro de camundongos organotípicos. A fatia é colocada dentro de uma câmara de banho com circulação contínua de fluido e temperatura controlada. Depois de configurar vários parâmetros do microscópio confocal, imagens...

Imagem confocal do movimento mitocondrial dentro de oligodendrócitos em culturas organotípicas de fatias cerebrais

As mitocôndrias pode utilizar o potencial electroquímico através da membrana seu interior (Δ Ψm) para sequestrar cálcio (Ca2 +), o que lhes permite moldar citosólica de Ca 2+ de sinalização dentro da célula. Descreve-se um método para medir simultaneamente mitocôndrias Ca 2+ de fixação e ΔΨ m em células vivas utilizando corantes fluorescentes e microscopia confocal.

Medição simultânea de mitocondrial de cálcio e mitocondrial potencial de membrana em células vivas por Microscopia fluorescente

Este artigo explica como usar o aprendizado de máquina supervisionado por simulação para analisar a morfologia das mitocôndrias em imagens de microscopia de fluorescência de células fixas.

Analisando a Morfologia Mitocondrial Através da Aprendizagem Supervisionada por Simulação

Aqui, apresentamos um protocolo para analisar mudanças na densidade mitocondrial e distribuição longitudinal por imagens de músculo esquelético vivo usando microscopia confocal para varredura de rede mitocondrial.

Análise da densidade mitocondrial e distribuição longitudinal em fibras musculares esqueléticas vivas de ratos por microscopia confocal

Este protocolo fornece uma abordagem padronizada para imagens da morfologia mitocondrial em múltiplos tecidos de C. elegans durante o envelhecimento.

Imagem e Quantificação da Morfologia Mitocondrial em C. elegans Durante o Envelhecimento

Aqui descrevemos o localizador de eventos mitocondriais (MEL), um plugin ImageJ útil na quantificação das mudanças tridimensionais na fissão mitocondrial e na atividade de fusão ao longo do tempo. Também descrevemos um pipeline de processamento de imagem útil para a limpeza de micrografias antes da análise no ImageJ.

Compreendendo as mudanças na morfologia mitocondrial por meio de micrografias de fluorescência dinâmicas e tridimensionais

Nós demonstramos a aplicação do indicador de fluorescência, TMRM, em neurônios corticais para determinar a alterações relativas na intensidade de fluorescência TMRM antes e após a aplicação de um estímulo específico. Mostramos também a aplicação da sonda de fluorescência...

Determinação de Membrana Mitocondrial Espécies de Oxigênio Reativas Potencial e em neurônios de rato vivo Cortical

Neste vídeo, descrevemos um método para imagens de células vivas de células em divisão assimétrica órgão sensorial progenitoras e células epidérmicas em...

Em células vivas, imagens de células precursoras de órgãos sensoriais na Intact Drosophila As pupas

Aprenda a avaliar a morfologia mitocondrial em células SH-SY5Y vivas usando microscopia confocal e MitoTracker. Este protocolo acessível auxilia pesquisadores em estudos neurofarmacológicos e doença de Parkinson.

Determinação da morfologia mitocondrial em células vivas usando microscopia confocal

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