Name: Ensaio cometa para quantificar danos ao DNA em células 32D que expressam mutantes FLT3 após exposição a inibidores de FLT3 tipo I e tipo II (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-17T13:20:00.000+00:00
Duration: 4 min 36 s
Description: Aprenda o ensaio cometa para quantificar danos ao DNA em células 32D mutantes FLT3 tratadas com inibidores tipo I e II. Este método auxilia pesquisadores a otimizar terapias para leucemia mieloide aguda.

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1. Construção de um modelo de dano ao DNA em células 32D com mutações FLT3-ITD 18
<ol>
	<li>Recuperação celular<ol>
		<li>Usando fórceps, transfira rapidamente células 32D mutantes FLT3-ITD criopreservadas (armazenadas a -80 ° C). Recupere criogeniais usando fórceps e mergulhe-os imediatamente em banho-maria com temperatura regulada (37 °C ± 0,5 °C) por precisamente 60 s para completar o descongelamento controlado. NOTA: Durante o descongelamento, agite intermitentemente os criotubos no banho-maria para garantir um aquecimento uniforme.</li>
		<li>Centrifugar as amostras criopreservadas a 150 × g durante 5 min a 25 °C ± 1 °C. Aspire cuidadosamente o sobrenadante usando pipetas sorológicas estéreis, retendo o pellet celular.</li>
		<li>Adicione 1 mL de meio de crescimento completo (RPMI 1640 + 10% de soro fetal bovino + 1% de penicilina/estreptomicina) ao tubo de criopreservação. Realize uma trituração suave através de 10 ciclos de pipetagem sequenciais (volume de 1 mL) para garantir a ressuspensão completa. Transferir a suspensão celular para uma placa de cultura de células de 100 mm e adicionar 7 ml de meio completo para obter um volume final de 8 ml.</li>
		<li>Agite suavemente o vaso de cultura com cinco movimentos horizontais e cinco rotacionais. Mantenha as células em uma incubadora umidificada a 37,0 °C ± 0,2 °C com 5% de CO2 e 95% de umidade. Incubar durante 24 H antes do processamento experimental.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Avaliação da viabilidade celular<ol>
		<li>Selecione células 32D mutantes FLT3-ITD na fase de crescimento logarítmico com bom estado celular para o experimento. NOTA: As células na fase de crescimento logarítmico geralmente têm um ciclo de divisão curto e uma alta frequência de divisão celular.<ol>
			<li>Observe a morfologia e o estado de crescimento das células 32D com mutação FLT3-ITD usando um microscópio eletrônico. Certifique-se de que os critérios para limiares de proliferação celular sejam atendidos: Procure células que estejam na forma de um único glóbulo com bordas lisas, dispersão uniforme, poucos agregados, tamanho de célula uniforme, integridade da membrana plasmática intacta e detritos celulares &lt; 5%.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Use um contador de células para determinar a concentração da suspensão celular. NOTA: Misture as suspensões celulares (10 ciclos de pipetagem sequenciais usando pontas estéreis de 1 mL a 50% da velocidade máxima da pipeta).</li>
		<li>Padronize a suspensão celular para 2,0 × 105 células/mL em meio de crescimento completo usando diluição iterativa. Usando uma pipeta, dispense alíquotas de 50 μL nos poços centrais (B2-G7) de uma placa de fundo plano de 96 poços. Encha os poços periféricos (A1-H12) com 100 μL de PBS estéril para manter a umidade e minimizar os efeitos de evaporação da borda.</li>
		<li>Preparação do meio contendo inibidor de FLT3: Selecione nove poços em uma placa de cultura de células de 12 poços e rotule-os de acordo com a escada de concentração do inibidor de FLT3 (0, 3.90625, 7.8125, 15.625, 31.25, 62.5, 125, 250, 500 e 1000 nM). Adicione 400 μL de meio completo aos poços rotulados como 10,0 μM e 200 μL de meio completo aos poços restantes.<ol>
			<li>Diluição de gilteritinibe: Adicione 4 μL de reagente de gilteritinibe 100 μM (Gilteritinibe em Dimetilsulfóxido) a cada um dos poços marcados a 1000 nM usando uma pistola de pipeta e misture bem a solução. Pipetar 200 μL de Gilteritinibe 1000 nM nos poços marcados com 500 nM e misturar; em seguida, pipetar 200 μL de Gilteritinibe 500 nM nos poços marcados com 250 nM e misturar. A cada vez, leve 200 μL da diluição anterior para o próximo poço e misture para atingir a concentração desejada.</li>
			<li>Diluição AC220: Adicione 4 μL de reagente AC220 100 μM (AC220 em dimetilsulfóxido) a cada um dos poços marcados a 1000 nM usando uma pipeta. Siga a etapa 1.2.4.1 para os outros poços. NOTA: Certifique-se de que a solução estoque do inibidor FLT3 na pipeta seja completamente transferida para os poços para evitar solução residual. Certifique-se de que a solução esteja bem misturada antes de prosseguir com a diluição.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Incubação: Dispense meios contendo inibidores de FLT3 em poços designados (50 μL / poço) usando uma pipeta. Mantenha a placa de 96 poços em condições fisiológicas de cultura (37,0 °C ± 0,2 °C, 5% CO2, 95% de umidade) por precisamente 72 H ± 15 min.</li>
		<li>Alíquota de 10 μL de reagente CCK-8 para todos os poços de controle experimentais e em branco usando uma pipeta. Proteger a placa da luz e incubá-la em condições normóxicas (37 °C, 5% CO2) durante 2,0 H ± 10 min. NOTA: Dispense o reagente em baixa velocidade de pipeta com uma profundidade de imersão da ponta de 2 mm para minimizar a formação de bolhas. Evite bolhas de ar durante a adição da amostra para evitar interferência nas leituras de OD.</li>
		<li>Remova a placa de 96 poços da incubadora e meça a absorbância a 450 nm usando um leitor de microplacas. Registre os resultados.</li>
		<li>Calcular a % de inibição de acordo com a fórmula de cálculo do IC50 : Inibição (%) = <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/68469/68469eq1.jpg" style="margin: auto;"> × 100% O poço experimental da droga denota poços celulares tratados com a droga. O poço de controle celular denota poços celulares que não foram tratados com o medicamento. Os poços de controle em branco indicam apenas o meio sem células.</li>
		<li>Analise os dados de dose-resposta normalizados por meio de regressão não linear, empregando um modelo logístico de quatro parâmetros. Clique no botão Curva de ajuste para ajustar a curva. Derive a concentração inibitória semimáxima (IC50) da convergência do modelo (R2 &gt; 0,98, soma residual dos quadrados &lt; 0,15) e calcule os intervalos de confiança de 95% por meio da reamostragem de bootstrap de 1000 iterações.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Experimento de dano ao DNA de células 32D com mutação FLT3-ITD induzida por inibidor de FLT3<ol>
		<li>Selecione células 32D mutantes FLT3-ITD exibindo surto de crescimento (tempo de duplicação da população &lt; 24 h) para avaliação de danos ao DNA.</li>
		<li>Conte as células (consulte a etapa 1.2.2 para obter detalhes).</li>
		<li>Semeadura celular: Ajuste a densidade da suspensão celular para 1 × 106 células por placa, usando uma placa de 6 cm de diâmetro e 4 mL de suspensão celular por placa.</li>
		<li>Prepare três réplicas para cada concentração de inibidor: 55 nM gilteritinibe: 4 mL de meio + 2,2 μL de estoque de 100 μM, 0,15 nM AC220: 4 mL de meio + 6 μL de estoque de 100 nM. Misturar as soluções em vórtice e equilibrá-las a 37 °C durante 15 min; agite suavemente os tubos para garantir uma mistura adequada. Aspirar o meio original e substituí-lo por 4 ml/prato de meio contendo inibidores recentemente preparado, utilizando pipetas serológicas estéreis.</li>
		<li>Incubar as células tratadas em condições fisiológicas (37 °C, 5% CO2, 95% de umidade) por intervalos definidos (0, 2, 4, 6 H). Processe controles de tempo zero imediatamente para avaliação de danos ao DNA na linha de base.</li>
		<li>Ensaio de exclusão de azul de tripano<ol>
			<li>Centrifugue as células coletadas a 150 × g por 1 min. Rejeitar o sobrenadante e ressuspender as células com 1 ml de meio de cultura.</li>
			<li>Pipete 100 μL de células ressuspensas em um tubo de centrífuga de plástico, adicione 100 μL de mancha azul de tripano (2x), misture delicadamente e cove por 3 min.</li>
			<li>Conte as células (consulte a etapa 1.2.2 para obter detalhes).</li>
			<li>Calcule a viabilidade celular da seguinte forma: % de sobrevivência celular = <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/68469/68469eq2.jpg" style="margin: auto;"> × 100% NOTA: Apenas amostras com viabilidade ≥90% foram processadas para o ensaio cometa.</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. Preparação de reagentes e preparação de amostras de células
<ol>
	<li>Equilibre a solução de lise (contendo 2,5 M de NaCl, 100 mM de EDTA, 10 mM de Tris, pH 10, 1% de Triton X-100, 10% de DMSO) a 4 ° C ± 0,5 ° C por 30 min usando uma geladeira.</li>
	<li>Derreta a agarose de baixo ponto de fusão (LMA) a 95 °C por 15 min e mantenha-a em banho-maria a 37 °C para evitar a solidificação.</li>
	<li>Preparar o tampão de electroforese alcalina (300 mM de NaOH, 1 mM de EDTA, pH &gt;13) pesando 12 g de NaOH utilizando uma balança electrónica, pipetando 2 ml de solução de EDTA a 500 mM e, em seguida, adicionando ddH2O para perfazer até 1 L do tampão.</li>
	<li>Colheita de células<ol>
		<li>Recolha a suspensão celular em um tubo de centrífuga de 15 mL. Centrifugar as suspensões celulares a 800 × g durante 5 min. Aspirar os sobrenadantes por filtração a vácuo.<ol>
			<li>Ressuspenda suavemente as células em 1 mL de meio completo usando pontas de pipeta de 1 mL de diâmetro largo, seguidas por 10 inversões verticais.</li>
			<li>Conte as células como na etapa 1.2.</li>
			<li>Centrifugue a suspensão celular em um tubo de centrífuga de 15 mL a 150 × g por 5 min para remover o meio completo. Ressuspenda as células lavadas em PBS livre de cálcio para ~ 5,0 × 105 células / mL.</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. Procedimento de ensaio cometa
<ol>
	<li>Prepare lâminas de ensaio de cometa e amostras de células com antecedência. Prepare uma mistura 10:1 (v/v) de agarose LMA e suspensão celular (5 × 105 células/mL) em tubos de 1,5 mL usando uma pipeta e misture delicadamente. Dispensar alíquotas de 55 μL da mistura de células de agarose nas lâminas de cometa utilizando uma pipeta mantida num ângulo de 45°, mantendo uma distância de 2 mm da superfície da lâmina. Colocar as lâminas revestidas com a mistura a 4 °C durante 30 min para evitar a luz. NOTA: Durante a adição do LMA e da mistura de células às lâminas de ensaio cometa, dispense a suspensão lenta e uniformemente para evitar a formação de bolhas e garantir uma distribuição homogênea do gel.</li>
	<li>Mergulhe as lâminas solidificadas em solução de lise pré-resfriada (contendo 2,5 M de NaCl, 100 mM de EDTA, 10 mM de Tris, pH 10, 1% de Triton X-100, 10% de DMSO) e realize a lise por ≥1 H a 4 °C em condições de proteção contra luz.</li>
	<li>Após a lise, remova a lâmina do lisado e use uma pistola de pipeta para sugar o máximo de líquido possível ao redor da pá. Em seguida, colocar a lâmina em tampão de eletroforese alcalina (300 mM de NaOH, 1 mM de EDTA, pH &gt;13) e pré-equilibrar durante 1 h a 4 °C, tendo o cuidado de evitar a luz.</li>
	<li>Eletroforese: Posicione as lâminas em uma câmara de eletroforese e adicione solução de eletroforese alcalina suficiente para imergir as lâminas. Realize eletroforese a 24 V (equivalente a 0,74 V / cm) com corrente constante (300 mA) por 30 min usando tampão pré-equilibrado (4 ° C) para minimizar os danos ao DNA.</li>
	<li>Neutralização: Após a eletroforese, use uma pistola de pipeta para aspirar a solução de eletroforese alcalina da lâmina, mergulhe as lâminas por 2 x 5 min em dH2O e, em seguida, mergulhe-as em etanol a 70% por 5 min. Secar as lâminas numa incubadora a 37 °C durante 15 min.</li>
	<li>Coloração: Aplique uma alíquota de 100 μL de 1x coloração de ácido nucleico YeaRed por poço e incube por 30 min em temperatura ambiente sob condições protegidas contra a luz. Remova o excesso de mancha com enxágue aquoso suave seguido de secagem térmica a 37 °C.</li>
	<li>Imagem: Realize a visualização de fluorescência usando um microscópio de fluorescência equipado com uma objetiva 4x, com aquisição de imagem digital realizada sob condições de exposição padronizadas.</li>
</ol>
4. Processamento de dados
<ol>
	<li>Realize análises quantitativas de imagens para determinar os parâmetros padrão do cometa, incluindo DNA da cauda (%), momento da cauda da azeitona e comprimento da cauda (μm).<ol>
		<li>Abra a interface do software (Figura 5).</li>
		<li>Importe uma imagem para o software, clique em Ficheiro e, em seguida, clique em Selecionar Ficheiro para importar a imagem que pretende analisar para o software. Em seguida, mantenha pressionado o botão do mouse e arraste até que uma caixa azul apareça. Arraste a caixa azul para garantir que a célula que você deseja analisar esteja dentro da caixa. A opção Ajustar na figura pode ser usada para ajustar a posição do quadro para incluir a célula inteira (Figura 5).</li>
		<li>Antes de iniciar a análise, clique em Iniciar e, em seguida, clique em Analisar. Os resultados da análise de célula única serão exibidos no lado direito em 'Perfis'. Depois de analisar cada célula, clique em Salvar. Os parâmetros que podem ser detectados são exibidos no lado direito de 'Perfis' e os valores numéricos de vários parâmetros são exibidos na parte inferior. Por fim, clique em Arquivo | Exportar resultados. Os resultados obtidos incluem HeadArea, TailArea, HeadDNA, TailDNA, HeadDNA%, TailDNA%, HeadRadius, TailLength, CometLength, HeadMeanX, TailMeanX, TailMoment e OliveTailMoment.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>Swaminathan, M., Wang, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+therapies+for+AML%3A+A+round-up+for+clinicians%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Rev+Clin+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Novel therapies for AML: A round-up for clinicians.</a> Expert Rev Clin Pharmacol. 13 (12), 1389-1400 (2020).</li>
<li>Daver, N., Schlenk, R. F., Russell, N. H., Levis, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+flt3+mutations+in+AML%3A+Review+of+current+knowledge+and+evidence%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">Targeting flt3 mutations in AML: Review of current knowledge and evidence.</a> Leukemia. 33 (2), 299-312 (2019).</li>
<li>Papaemmanuil, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+classification+and+prognosis+in+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Genomic classification and prognosis in acute myeloid leukemia.</a> N Engl J Med. 374 (23), 2209-2221 (2016).</li>
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<li>Döhner, H., Wei, A. H., Löwenberg, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+precision+medicine+for+AML%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Towards precision medicine for AML.</a> Nat Rev Clin Oncol. 18 (9), 577-590 (2021).</li>
<li>Kantarjian, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+myeloid+leukemia%3A+Current+progress+and+future+directions%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Cancer+J%22%5BJournal%5D)">Acute myeloid leukemia: Current progress and future directions.</a> Blood Cancer J. 11 (2), 41(2021).</li>
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<li>Jackson, S. P., Bartek, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+DNA-damage+response+in+human+biology+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The DNA-damage response in human biology and disease.</a> Nature. 461 (7267), 1071-1078 (2009).</li>
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<li>Wang, Y., Lin, X., Wang, Y., Wang, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergistic+effect+of+adavosertib+and+fimepinostat+on+acute+myeloid+leukemia+cells+by+enhancing+the+induction+of+DNA+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+New+Drugs%22%5BJournal%5D)">Synergistic effect of adavosertib and fimepinostat on acute myeloid leukemia cells by enhancing the induction of DNA damage.</a> Invest New Drugs. 42 (1), 70-79 (2024).</li>
<li>Kumar, S., Yedjou, C. G., Tchounwou, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arsenic+trioxide+induces+oxidative+stress%2C+DNA+damage%2C+and+mitochondrial+pathway+of+apoptosis+in+human+leukemia+%28hl-60%29+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Arsenic trioxide induces oxidative stress, DNA damage, and mitochondrial pathway of apoptosis in human leukemia (hl-60) cells.</a> J Exp Clin Cancer Res. 33 (1), 42(2014).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0,5 M EDTA</td><td>Beyotime</td><td>ST066</td><td></td></tr><tr><td>1x coloração de ácido nucleico YeaRed</td><td>Yeasen</td><td>10202ES</td><td></td></tr><tr><td>CÉLULA 32D</td><td>Cobioer</td><td>CBP60995</td><td></td></tr><tr><td>AC220</td><td>TargetMol</td><td>T2066</td><td></td></tr><tr><td>Kit de contagem de células-8</td><td>Dojindo</td><td>CK04</td><td></td></tr><tr><td>Placa de contagem de células</td><td>QiuJing</td><td>XB-K-25</td><td></td></tr><tr><td>Incubadora CO2</td><td>Thermo</td><td>51032872</td><td></td></tr><tr><td>Projeto de software de ensaio cometa (CASP)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kit de ensaio CometAssay</td><td>Trevigen</td><td>4250-050-K</td><td></td></tr><tr><td>Citação 5</td><td>BioTek</td><td>16280004</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>PANELA</td><td>ST30-3302</td><td></td></tr><tr><td>Gilteritinibe</td><td>TargetMol</td><td>T4409</td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism 9.0</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>centrífuga de alta velocidade</td><td>Thermo</td><td>&nbsp; 9AQ2861</td><td></td></tr><tr><td>Pipetas L-1000XLS+</td><td>Rainin</td><td>17014382</td><td></td></tr><tr><td>Pipetas L-20XLS+</td><td>Rainin</td><td>17014392</td><td></td></tr><tr><td>tanque de nitrogênio líquido</td><td>Mvecryoge</td><td>YDS-175-216</td><td></td></tr><tr><td>Fotômetro de microplacas Multiskan FC</td><td>Thermo</td><td>1410101</td><td></td></tr><tr><td>Na2OH</td><td>DADÃO</td><td>1588</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Solarbio</td><td>Pág. 1020</td><td></td></tr><tr><td>Solução de Penicilina-Estreptomicina, 100x</td><td>Beyotime</td><td>C0222</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 médio</td><td>Gibco</td><td>C22400500BT</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio trinocular de células vivas</td><td>Motico</td><td>1.1001E+12</td><td></td></tr><tr><td>Congelador de temperatura ultrabaixa</td><td>Cabelo</td><td>V118574</td><td></td></tr></tbody></table>

ensaio cometa para quantificar danos ao dna em células 32d que expressam mutantes flt3 após exposição a inibidores de flt3 tipo i e tipo ii

Comet Assay to Quantify DNA Damage in FLT3 Mutant-expressing 32D Cells after Exposure to Type I and Type II FLT3 Inhibitors

O ensaio cometa foi sistematicamente empregado para quantificar perfis diferenciais de danos ao DNA induzidos por gilteritinibe e AC220 em linhagens celulares mutantes FLT3. As análises mostraram que a diferença no dano ao DNA entre as populações de células não tratadas com gilteritinibe e AC220 não foi estatisticamente significativa (P &gt; 0,05). Os aumentos dependentes da dose nos valores de DNA da cauda (%) e cauda do momento da azeitona (OMT) alcançaram significância estatística (P &lt; 0,05) após exposições de 2-6 ...

Ensaio cometa para quantificar danos ao DNA em células 32D que expressam mutantes FLT3 após exposição a inibidores de FLT3 tipo I e tipo II

FMS-like tyrosine kinase 3 (FLT3), a class III receptor tyrosine kinase, exhibits a mutation frequency of approximately 30% in acute myeloid leukemia ...

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Biology

Biologia

O vídeo demonstra o ensaio cometa para detectar danos ao DNA após a exposição a agentes nocivos. Sob condições alcalinas, o DNA se desenrola e desnatura e, após a eletroforese, o DNA não danificado e danificado migra de maneira diferente no gel de agarose, formando uma estrutura em forma de cometa. O DNA não danificado de migração lenta forma a cabeça circular do cometa, enquanto os fragmentos de DNA danificados de migração rápida formam a cauda alongada do cometa.

Ensaio cometa para detecção de danos ao DNA em células

O ensaio cometa é uma forma eficiente de detectar quebras simples e de fita dupla, incluindo álcali-lábeis sites e DNA-DNA/DNA-protein ligações cruzadas no DNA em todas as células, incluindo neurônios do hipocampo. O método tira partido da migração diferencial de DNA num campo eléctrico devido a diferenças na quantidade de danos no DNA.

Ensaio danos no DNA em neurônios do hipocampo Usando o Ensaio Cometa

Descrevemos aqui uma plataforma que permite a detecção de teste do cometa de danos no DNA, com taxa de transferência sem precedentes. Os padrões de dispositivos de células de mamíferos para um microarranjo e permite o processamento em paralelo de amostras 96. A abordagem facilita a análise de danos ao DNA nível base, danos ao DNA induzidos por exposição e reparo do DNA cinética.

CometChip: A alta taxa de transferência de plataforma 96-Bem, para avaliação dos danos causados ​​no DNA em células Microarrayed Humanos

O ensaio cometa é um método eficiente para detectar danos do DNA incluindo single e double-stranded DNA quebra. Descrevemos o cometa alcalino e neutro de ensaios para medir o dano de DNA em células cancerosas para avaliar o efeito terapêutico da quimioterapia.

Avaliação In Vitro o dano de DNA usando ensaio cometa

Este protocolo descreve vários procedimentos para a preparação de amostras de tecido congelado de alta qualidade no momento da necropsia para uso no ensaio do cometa para avaliar danos no DNA: 1) tecido picado, 2) células epiteliais raspadas do trato gastrointestinal e 3) tecido em cubos amostras, necessitando de homogeneização usando um dispositivo de picar tecido.

Uso de tecido congelado no ensaio do cometa para avaliação de danos no DNA

O ensaio de cometa é um meio popular de detectar danos ao DNA. Este estudo descreve uma abordagem para a execução de lâminas em variantes representativas do ensaio do cometa. Essa abordagem aumentou significativamente o número de amostras, diminuindo o tempo de execução do ensaio, o número de manipulações de lâminas e o risco de danos aos géis.

Uma abordagem de ensaio de cometa de alto rendimento para avaliar danos ao DNA celular

De hipersensibilidade do tipo retardado (DTH) é uma reação inflamatória mediada por CCR7 efetuador linfócitos T de memória. Aqui demonstramos como induzir DTH ativa em ratos Lewis e monitorar a resposta inflamatória.

Indução e Monitoramento de hipersensibilidade do tipo retardada Ativa (DTH) em ratos

Células T reguladoras: potencial terapêutico para tratar a rejeição de transplantes e Diabetes Tipo I

De hipersensibilidade do tipo retardado (DTH) é uma reação inflamatória mediada por CCR7-efetoras de memória T (TEM) linfócitos. Aqui demonstramos como ativar células antígeno-específicas TEM, induzir DTH adotivos em ratos Lewis e monitorar a resposta inflamatória.

Indução e Monitoramento de hipersensibilidade tardia-Type Adoptive em Ratos

Um protocolo detalhado é descrito para a formação de imagem em tempo real de complexos de reparo de DNA...

Mismatch Repair imagem e respostas celulares a danos no DNA em Bacillus subtilis</em

Aprenda o ensaio cometa para quantificar danos ao DNA em células 32D mutantes FLT3 tratadas com inibidores tipo I e II. Este método auxilia pesquisadores a otimizar terapias para leucemia mieloide aguda.

Ensaio cometa para quantificar danos ao DNA em células 32D que expressam mutantes FLT3 após exposição a inibidores de FLT3 tipo I e tipo II (Vídeo) | JoVE Journal

Ensaio cometa para quantificar danos ao DNA em células 32D que expressam mutantes FLT3 após exposição a inibidores de FLT3 tipo I e tipo II

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