Name: Cartografia Molecular de Modalidade Dupla: Integrando a Detecção de RNA Multiplex com a Citometria de Massa por Imagem de Proteínas (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-14T12:45:00.000+00:00
Duration: 6 min 51 s
Description: Aprenda a detectar mRNA multiplex com citometria de massa por imagem de proteínas em tecidos de câncer de ovário. Este método integrado identifica novos alvos terapêuticos e biomarcadores para prever a sobrevida dos pacientes.

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<ol><li>Cai, S., Allam, M., Coskun, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplex+spatial+bioimaging+for+combination+therapy+design%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Cancer%22%5BJournal%5D)">Multiplex spatial bioimaging for combination therapy design.</a> Trends Cancer. 6 (10), 813-818 (2020).</li>
<li>Lu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+biomarker+modalities+for+predicting+response+to+PD-1%2FPD-L1+checkpoint+blockade%3A+a+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA+Oncol%22%5BJournal%5D)">Comparison of biomarker modalities for predicting response to PD-1/PD-L1 checkpoint blockade: a systematic review and meta-analysis.</a> JAMA Oncol. 5 (8), 1195-1204 (2019).</li>
<li>Parolini, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microplastic+contamination+in+snow+from+western+Italian+Alps%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Environ+Res+Public+Health%22%5BJournal%5D)">Microplastic contamination in snow from western Italian Alps.</a> Int J Environ Res Public Health. 18 (2), 768(2021).</li>
<li>Carstens, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stabilized+epithelial+phenotype+of+cancer+cells+in+primary+tumors+leads+to+increased+colonization+of+liver+metastasis+in+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Stabilized epithelial phenotype of cancer cells in primary tumors leads to increased colonization of liver metastasis in pancreatic cancer.</a> Cell Rep. 35 (2), 108990(2021).</li>
<li>Allam, M., Cai, S., Coskun, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplex+bioimaging+of+single-cell+spatial+profiles+for+precision+cancer+diagnostics+and+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Precis+Oncol%22%5BJournal%5D)">Multiplex bioimaging of single-cell spatial profiles for precision cancer diagnostics and therapeutics.</a> NPJ Precis Oncol. 4 (1), 1-12 (2020).</li>
<li>Ferri-Borgogno, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((metabolic%2C+and+subcellular+mapping+of+the+tumor+immune+microenvironment+via+3D+targeted+and+non-targeted+multiplex+multi-omics+analyses%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">metabolic, and subcellular mapping of the tumor immune microenvironment via 3D targeted and non-targeted multiplex multi-omics analyses.</a> Cancers (Basel). 16 (5), 846(2024).</li>
<li>Schulz, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+multiplexed+imaging+of+mRNA+and+proteins+with+subcellular+resolution+in+breast+cancer+tissue+samples+by+mass+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Syst%22%5BJournal%5D)">Simultaneous multiplexed imaging of mRNA and proteins with subcellular resolution in breast cancer tissue samples by mass cytometry.</a> Cell Syst. 6 (1), 25-36.e25 (2018).</li>
<li>Kochan, J., Wawro, M., Kasza, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+detection+of+mRNA+and+protein+in+single+cells+using+immunofluorescence-combined+single-molecule+RNA+FISH%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">Simultaneous detection of mRNA and protein in single cells using immunofluorescence-combined single-molecule RNA FISH.</a> Biotechniques. 59 (4), 209-221 (2015).</li>
<li>Ferri-Borgogno, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+transcriptomics+depict+ligand-receptor+cross-talk+heterogeneity+at+the+tumor-stroma+interface+in+long-term+ovarian+cancer+survivors%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Spatial transcriptomics depict ligand-receptor cross-talk heterogeneity at the tumor-stroma interface in long-term ovarian cancer survivors.</a> Cancer Res. 83 (9), 1503-1516 (2023).</li>
<li>Mok, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+gene+signature+predictive+for+outcome+in+advanced+ovarian+cancer+identifies+a+survival+factor%3A+microfibril-associated+glycoprotein+2%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">A gene signature predictive for outcome in advanced ovarian cancer identifies a survival factor: microfibril-associated glycoprotein 2.</a> Cancer Cell. 16 (6), 521-532 (2009).</li>
<li>Yeung, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anticancer+immunotherapy+by+MFAP5+blockade+inhibits+fibrosis+and+enhances+chemosensitivity+in+ovarian+and+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Anticancer immunotherapy by MFAP5 blockade inhibits fibrosis and enhances chemosensitivity in ovarian and pancreatic cancer.</a> Clin Cancer Res. 25 (21), 6417-6428 (2019).</li>
<li>Ogura, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-17+promotes+autoimmunity+by+triggering+a+positive-feedback+loop+via+interleukin-6+induction%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Interleukin-17 promotes autoimmunity by triggering a positive-feedback loop via interleukin-6 induction.</a> Immunity. 29 (4), 628-636 (2008).</li>
<li>Murakami, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+microbleeding+facilitates+IL-6-+and+IL-17-dependent+arthritis+in+the+absence+of+tissue+antigen+recognition+by+activated+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Local microbleeding facilitates IL-6- and IL-17-dependent arthritis in the absence of tissue antigen recognition by activated T cells.</a> J Exp Med. 208 (1), 103-114 (2011).</li>
<li>Hou, W., Jin, Y. -H., Kang, H. S., Kim, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-6+%28IL-6%29+and+IL-17+synergistically+promote+viral+persistence+by+inhibiting+cellular+apoptosis+and+cytotoxic+T+cell+function%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Interleukin-6 (IL-6) and IL-17 synergistically promote viral persistence by inhibiting cellular apoptosis and cytotoxic T cell function.</a> J Virol. 88 (15), 8479-8489 (2014).</li>
<li>Geskin, L. J., Viragova, S., Stolz, D. B., Fuschiotti, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-13+is+overexpressed+in+cutaneous+T-cell+lymphoma+cells+and+regulates+their+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Interleukin-13 is overexpressed in cutaneous T-cell lymphoma cells and regulates their proliferation.</a> Blood. 125 (18), 2798-2805 (2015).</li>
<li>Aspord, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breast+cancer+instructs+dendritic+cells+to+prime+interleukin+13-secreting+CD4%2B+T+cells+that+facilitate+tumor+development%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Breast cancer instructs dendritic cells to prime interleukin 13-secreting CD4+ T cells that facilitate tumor development.</a> J Exp Med. 204 (5), 1037-1047 (2007).</li>
<li>Votava, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+expression+profiles+of+CD47+in+the+tumor+microenvironment+of+salivary+gland+cancers%3A+a+next+step+in+histology-driven+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">The expression profiles of CD47 in the tumor microenvironment of salivary gland cancers: a next step in histology-driven immunotherapy.</a> BMC Cancer. 22 (1), 1-12 (2022).</li>
<li>Liu, X., Kwon, H., Li, Z., Fu, Y. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+CD47+an+innate+immune+checkpoint+for+tumor+evasion%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hematol+Oncol%22%5BJournal%5D)">Is CD47 an innate immune checkpoint for tumor evasion.</a> J Hematol Oncol. 10 (1), 1-10 (2017).</li>
<li>Salerno, F., Guislain, A., Cansever, D., Wolkers, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TLR-mediated+innate+production+of+IFN-%CE%B3+by+CD8%2B+T+cells+is+independent+of+glycolysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">TLR-mediated innate production of IFN-γ by CD8+ T cells is independent of glycolysis.</a> J Immunol. 196 (9), 3695-3705 (2016).</li>
<li>Kalia, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prolonged+interleukin-2R%CE%B1+expression+on+virus-specific+CD8%2B+T+cells+favors+terminal-effector+differentiation+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Prolonged interleukin-2Rα expression on virus-specific CD8+ T cells favors terminal-effector differentiation in vivo.</a> Immunity. 32 (1), 91-103 (2010).</li>
<li>Cancino-Díaz, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-13+receptor+in+psoriatic+keratinocytes%3A+overexpression+of+the+mRNA+and+underexpression+of+the+protein%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Interleukin-13 receptor in psoriatic keratinocytes: overexpression of the mRNA and underexpression of the protein.</a> J Invest Dermatol. 119 (5), 1114-1120 (2002).</li>
<li>Wang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNAscope%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Diagn%22%5BJournal%5D)">RNAscope.</a> J Mol Diagn. 14 (1), 22-29 (2012).</li>
<li>Marlin, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+process+for+H%26E%2C+immunofluorescence%2C+and+imaging+mass+cytometry+on+a+single+slide+with+a+concise+analytics+pipeline%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+A%22%5BJournal%5D)">A novel process for H&E, immunofluorescence, and imaging mass cytometry on a single slide with a concise analytics pipeline.</a> Cytometry A. 103 (12), 1010-1018 (2023).</li>
<li>Pemberton, J., Kala, S., Dikshit, A., Hupple, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regular+and+young+investigator+award+abstracts%5BTitle%5D)+AND+%22Thorax%22%5BJournal%5D)">Regular and young investigator award abstracts.</a> Thorax. 72 (Suppl 3), A1654(2017).</li>
<li>Hu, K., Harman, A., Baharlou, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+mass+cytometry+for+in+situ+immune+profiling%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Imaging mass cytometry for in situ immune profiling.</a> Methods Mol Biol. 2779, 407-423 (2024).</li>
<li>Chevrier, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compensation+of+signal+spillover+in+suspension+and+imaging+mass+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Syst%22%5BJournal%5D)">Compensation of signal spillover in suspension and imaging mass cytometry.</a> Cell Syst. 6 (5), 612-620.e15 (2018).</li>
<li>Shi, S. R., Imam, S. A., Young, L., Cote, R. J., Taylor, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antigen+retrieval+immunohistochemistry+under+the+influence+of+pH+using+monoclonal+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">Antigen retrieval immunohistochemistry under the influence of pH using monoclonal antibodies.</a> J Histochem Cytochem. 43 (2), 193-201 (1995).</li>
<li>Duncan, J. S., Elliott, K. L., Kersigo, J., Gray, B., Fritzsch, B. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDuncan%2C+JS+%22In+situ+hybridization+methods%22">In situ hybridization methods</a>. , Springer. New York, NY. (2015).</li>
<li>Rivest, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fully+automated+sequential+immunofluorescence+%28seqIF%29+for+hyperplex+spatial+proteomics%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Fully automated sequential immunofluorescence (seqIF) for hyperplex spatial proteomics.</a> Sci Rep. 13 (1), 1-12 (2023).</li>
<li>Sans, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+transcriptomics+of+intraductal+papillary+mucinous+neoplasms+of+the+pancreas+identifies+NKX6-2+as+a+driver+of+gastric+differentiation+and+indolent+biological+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discov%22%5BJournal%5D)">Spatial transcriptomics of intraductal papillary mucinous neoplasms of the pancreas identifies NKX6-2 as a driver of gastric differentiation and indolent biological potential.</a> Cancer Discov. 13 (8), 1844-1861 (2023).</li>
<li>Glasson, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+high-dimensional+imaging+mass+cytometry%3A+one+step+beyond+in+oncology%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Immunopathol%22%5BJournal%5D)">Single-cell high-dimensional imaging mass cytometry: one step beyond in oncology.</a> Semin Immunopathol. 46 (1), 1-12 (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>&nbsp; https://www.protocols.io/view/oligonucleotide-polymer-conjugation-for-imaging-ma-dm6gpjz91gzp/v2.</td><td>Protocols.IO</td><td>dx.doi.org/10.17504/protocols.io.dm6gpjz91gzp/v2</td><td>Conjugação oligonucleotídeo-polímero para citometria de massa de imagem V.2&nbsp;</td></tr><tr><td>10x TBS sem RNAse</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>J62780. K7</td><td>Para lavagens intermitentes entre etapas</td></tr><tr><td>Sistema de Hibridização ACD HybEZ II</td><td>ACD Biotechne</td><td>321711</td><td>Forno para lâminas de papel de assamento</td></tr><tr><td>Diluente de Anticorpos</td><td>Dako</td><td>S0809&nbsp;</td><td>Buffer diluente de anticorpos</td></tr><tr><td>Anticorpo: B7-H3</td><td>Bethyl</td><td>A700-025CF, A700-026CF</td><td>Clone: BLR025F, BLR026F</td></tr><tr><td>Anticorpo: B7-H4</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>14-5949-82</td><td>Clone: H74</td></tr><tr><td>Anticorpo: BRD4(6F11)</td><td>Bethyl</td><td>A700-005CF</td><td>Clone: BL-151-6F11</td></tr><tr><td>Anticorpo: CCR6</td><td>R& D</td><td>MAB195-100</td><td>Clone: 53103</td></tr><tr><td>Anticorpo: CD11b</td><td>Abcam&nbsp;</td><td>ab209970</td><td>Clone: EPR1344</td></tr><tr><td>Anticorpo: CD25</td><td>Abcam&nbsp;</td><td>ab215378</td><td>Clone: EPR6452</td></tr><tr><td>Anticorpo: CD278/ICOS</td><td>CST&nbsp;</td><td>89601BF</td><td>Clone: D1K2T</td></tr><tr><td>Anticorpo: CD31</td><td>Abcam&nbsp;</td><td>AB207090</td><td>Clone: EPR3094</td></tr><tr><td>Anticorpo: CD33</td><td>Abcam&nbsp;</td><td>ab238784</td><td>Clone: SP266</td></tr><tr><td>Anticorpo: CD3e & nbsp;</td><td>CST</td><td>85061BF</td><td>Clone: D7A6E</td></tr><tr><td>Anticorpo: CD4</td><td>Abcam</td><td>ab181724</td><td>Clone: EPR6855</td></tr><tr><td>Anticorpo: CD44</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>MA1-10225</td><td>Clone: IM7</td></tr><tr><td>Anticorpo: CD45</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>14-9457-82</td><td>Clone: CD45-2B11</td></tr><tr><td>Anticorpo: CD8a</td><td>CST&nbsp;</td><td>85336BF</td><td>Clone: D8A8Y</td></tr><tr><td>Anticorpo: CXCL13</td><td>R& D</td><td>AF801</td><td>Clone: Policlonal</td></tr><tr><td>Anticorpo: CXCR5</td><td>R& D</td><td>MAB190-100</td><td>Clone: CXCR5</td></tr><tr><td>Anticorpo: gamma-H2AX</td><td>Bethyl</td><td>A700-053CF</td><td>Clone: BLR053F</td></tr><tr><td>Anticorpo: Granzima B</td><td>Santa Cruz</td><td>SC-8022 X</td><td>Clone: 2C5</td></tr><tr><td>Anticorpo: KAP1</td><td>Bethyl</td><td>A700-014CF</td><td>Clone: BL-248-2G6</td></tr><tr><td>Anticorpo: Ki67</td><td>Bethyl</td><td>A700-021CF</td><td>Clone: BLR021E</td></tr><tr><td>Anticorpo: LCK & nbsp;</td><td>CST</td><td>2984BF</td><td>Clone: D88</td></tr><tr><td>Anticorpo: MFAP5</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>PMID: 31332047 / Clone: 130A & nbsp; (Nota: projetado sob medida)&nbsp;</td></tr><tr><td>Anticorpo: SMA</td><td>CST</td><td>56856BF</td><td>Clone: 1A4</td></tr><tr><td>Anticorpo: VEGF</td><td>STB-Fluidigm</td><td>3163028D</td><td>Clone: G153-494</td></tr><tr><td>Anticorpo: VISTA</td><td>CST</td><td>64953BF</td><td>Clone: D1L2G</td></tr><tr><td>AZ-AR1 Elegance Citra&nbsp;</td><td>BioGeneX</td><td>HK546-XAK</td><td>Buffer de recuperação de antígeno</td></tr><tr><td>Álcool Etílico 100% (200 Proof)</td><td>Pharmco</td><td>111000200</td><td>Para a desparafinização</td></tr><tr><td>EZ & ndash; Retriever IR</td><td>BioGeneX</td><td>MW016-IR</td><td>Sistema de Coleta de Antígeno para Seções de Tecido FFPE</td></tr><tr><td>Sistema de Hibridização HybEZ II</td><td>ACD Biotechne</td><td>321710</td><td>O sistema compreende: forno HybEZ (PN 321710/321720), uma bandeja de controle de umidade (PN 310012) e Papel Umidificador HybEZ (2 folhas PN 310025), Bandeja de Lavagem EZ Batch (PN 321717), Suporte de Ferrolho EZ Batch (PN 321716)</td></tr><tr><td>Caneta PAP de Barreira Hidrofóbica ImmEdge & nbsp;</td><td>VectorLabs</td><td>H-4000</td><td>Cerca-barreira hidrofóbica</td></tr><tr><td>Solução Intercalador Ir</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>NC1038184</td><td>Usado para identificar células nucleadas</td></tr><tr><td>KERATIN 18/08</td><td>CST&nbsp;</td><td>4546BF</td><td>Clone: C51</td></tr><tr><td>Metal Oligos</td><td>Vários</td><td>Vários</td><td>Etiqueta metálica variando de T1 a T12, dependendo de qual for necessária</td></tr><tr><td>Água livre de nuclease (NFW)</td><td>Corning&nbsp;</td><td>46-000-CM&nbsp;</td><td>Limpar e preparar todos os equipamentos, e usar como diluiente quando necessário</td></tr><tr><td>RNAscope Protease Plus&nbsp;</td><td>ACD Biotechne</td><td>322331&nbsp;</td><td>Usado para permeabilizar membranas celulares de amostras</td></tr><tr><td>Suporte de lâminas de lote EZ RNAscope</td><td>ACD Biotechne</td><td>310017</td><td>Projetado para processar manualmente em lote até 20 slides de forma eficiente</td></tr><tr><td>RNAscope HiPlex12 Reagents Kit v2&nbsp;</td><td>ACD Biotechne</td><td>324409</td><td>Reagentes para RNAScope</td></tr><tr><td>Sonda RNAscope HiPlex - Sondas-alvo</td><td>ACD Biotechne</td><td>Vários</td><td>Varia de T1 a T12, dependendo de qual é necessário</td></tr><tr><td>Solução de Descontaminação RNase RNaseZap</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>AM9782</td><td>Uma solução de descontaminação superficial que destrói RNases</td></tr><tr><td>Suporte para cesta de lâminas para microscópio de coloração 24 lugares Plástico resistente a produtos químicos</td><td>Ciência Ótima</td><td>3028</td><td>Para colorir múltiplos slides</td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>AAJ20605AP</td><td>Para lavagens intermitentes entre etapas</td></tr><tr><td>Bloqueio de Proteína Ultravisão</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>TA125PBQ</td><td>Buffer de bloqueio</td></tr></tbody></table>

cartografia molecular de modalidade dupla: integrando a detecção de rna multiplex com a citometria de massa por imagem de proteínas

Dual-modality Molecular Cartography: Integrating Multiplex mRNA Detection with Protein Imaging Mass Cytometry

Cartografia Molecular de Modalidade Dupla: Integrando a Detecção de RNA Multiplex com a Citometria de Massa por Imagem de Proteínas

The ability to detect protein and mRNA in the same assay helps us understand how the cell is priming for an arrival and what cues it receives as it ...

dual-modality-molecular-cartography-integrating-multiplex-mrna

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Pesquisa sobre o Câncer

A imuno-histoquímica é uma poderosa técnica de laboratório para avaliar a localização e expressão de proteínas nos tecidos. Os métodos semiautomatizados atuais de quantificação introduzem subjetividade e muitas vezes criam resultados irreproduzíveis. Aqui, descrevemos métodos para imuno-histoquímica multiplexada e quantificação objetiva da expressão e co-localização de proteínas usando imagens multiespectrais.

A quantificação da expressão da proteína e co-localização Usando multiplexada Imuno-histoquímica Coloração e Multispectral Imagiologia

Demonstamos um método para imagem de múltiplas moléculas dentro de nanoestruturas heterogêneas com precisão de molécula única usando ligação sequencial e eluição de anticorpos marcados fluorescentemente.

Imagem altamente multiplexada e de super resolução de células T usando madSTORM

Descrevemos um método de coloração rápida para realizar imagens multiespectrais em tecidos congelados.

Um método rápido para imagem de fluorescência multiespectral de seções de tecido congelado

Aqui, descrevemos um protocolo para ajuste fino de regiões de interesse (ROIs) para tecnologias de Ômica Espacial para melhor caracterizar o microambiente tumoral e identificar populações celulares específicas. Para ensaios proteômicos, protocolos personalizados automatizados podem orientar a seleção de ROI, enquanto os ensaios transcriptômicos podem ser ajustados utilizando ROIs tão pequenos quanto 50 μm.

Perfil espacial da expressão de proteínas e RNA em tecidos: uma abordagem para ajustar a microdissecção virtual

Na era da imunoterapia contra o câncer, o interesse em elucidar a dinâmica do microambiente tumoral aumentou de forma impressionante. Este protocolo detalha uma técnica de imagem de espectrometria de massa em relação às suas etapas de coloração e imagem, que permitem uma análise espacial altamente multiplexada.

Expandindo a compreensão do microambiente tumoral usando imagens de espectrometria de massa de amostras de tecido fixo e parafina

A análise de imagens multiplexadas com código de barras tem melhorado recentemente a caracterização do microambiente tumoral, permitindo estudos abrangentes da composição celular, estado funcional e interações célula-célula. Neste artigo, descrevemos um protocolo de coloração e imagem usando o código de barras de anticorpos conjugados a oligonucleotídeos e imagens cíclicas, que permite o uso de uma técnica de análise de imagens de alta dimensão.

Análise de Imagem de Código de Barras Multiplexado para Caracterização de Imunoprofiling e Mapeamento Espacial na Análise Unicelular de Amostras de Parafina

Este protocolo descreve um método abrangente de análise de citometria de massa (citometria por tempo de voo [CyTOF]) para avaliar as respostas imunes sistêmicas e locais no carcinoma hepatocelular (CHC). A abordagem visa fornecer informações sobre a paisagem imunológica do CHC, oferecendo uma compreensão mais profunda do microambiente tumoral e dos mecanismos imunológicos associados.

Análise por citometria de massa das respostas imunes sistêmicas e locais no carcinoma hepatocelular

Este relatório descreve um protocolo automatizado para ensaios de imunofluorescência multiplex (mIF) em um corador de lâmina automatizado. Ele demonstra a alta reprodutibilidade da proteômica espacial em autocorantes de tecido padrão de alto rendimento e imageadores de fluorescência de lâmina inteira, o que é ideal para ensaios mIF personalizados em um grande número de lâminas de tecido em pesquisa translacional.

Ensaios automatizados de imunofluorescência multiplex de alto rendimento para pesquisa translacional

Este protocolo fornece um guia passo a passo para projetar um painel de anticorpos de imunofluorescência multiplex para imagens baseadas em código de barras de DNA de tecidos murinos de melanoma FFPE. Também descrevemos um pipeline de análise de imagem usando ferramentas de código aberto para gerar insights proteômicos espaciais sobre o microambiente imunológico do tumor de melanoma murino.

Imagem de imunofluorescência multiplex baseada em código de barras de DNA para analisar amostras FFPE de melanoma murino geneticamente reprogramado

Ortotópico intracraniana injeção de células de tumor tem sido usada na pesquisa do câncer para estudar a biologia do tumor de cérebro, progressão, evolução e resposta terapêutica. Aqui nós apresentamos fluorescência molecular tomografia computadorizada de xenografts tumor, que fornece em tempo real imagens intravital e quantificação de um tumor massa em modelos pré-clínicos glioblastoma.

Fluorescência Molecular Tomography para a imagem latente na Vivo de Glioblastoma Xenografts

Aprenda a detectar mRNA multiplex com citometria de massa por imagem de proteínas em tecidos de câncer de ovário. Este método integrado identifica novos alvos terapêuticos e biomarcadores para prever a sobrevida dos pacientes.

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