Linfodenectomia Renal Bilateral Murina

Estudamos o tráfego de células imunes do linfonodo renal para o rim e do antígeno renal para o linfonodo que drena. Nossa abordagem cirúrgica permite a vantagem única de podermos alterar seletivamente os linfonodos renais enquanto deixamos todos os outros linfonodos intactos em um modelo de sobrevivência a longo prazo bem tolerado. Agora que esse modelo foi desenvolvido, podemos explorar as contribuições das respostas dos linfonodos renais e do sistema imunológico, e como a remoção desses linfonodos contribui para a lesão renal relacionada ao sistema imunológico.

Para começar, coloque o animal anestesiado na mesa de cirurgia e aplique pomada. Use fita adesiva para fixar o braço esquerdo do animal em uma direção superior e a cauda em uma direção inferior para criar uma postura relaxada, porém alongada. Raspe o pelo e desinfete a área cirúrgica três vezes.

Após confirmar a profundidade da anestesia com uma pinça no dedo do pé, faça uma incisão oblíqua de um centímetro na pele logo abaixo do baço, aproximadamente um centímetro abaixo da última costela. Utilizando a dissecação contunda, separe a pele da parede abdominal e torácica e identifique o baço dentro do abdômen. Depois, faça uma incisão de um centímetro através da musculatura da parede abdominal, logo abaixo do baço, para entrar na cavidade peritoneal.

Identifique o rim esquerdo como um órgão liso localizado ao longo da parede abdominal posterior, logo abaixo do baço. Usando duas pinças anguladas, dissece de forma direta atrás do rim esquerdo para acessar o retroperitônio e refletir suavemente o rim esquerdo em direção anteromedial. Localize a almofada de tecido adiposo que envolve o linfonodo renal esquerdo, que fica atrás do rim e acima dos vasos renais.

Identifique e evite a glândula adrenal localizada na parte superior, a aorta na parte posterior e a cisterna quyli anteromedialmente. Usando pinças de ponta fina, dissece de forma direta ao redor da cápsula linfântica para separá-la dos vasos adjacentes, enquanto proporciona contratensão suave com pinças anguladas. Use pinças retas de ponta fina para retrair o linfonodo superiormente.

Depois, use tesouras de ponta fina para cortar bem os acessórios posteromediais. Examine a área para confirmar a hemostasia. Em seguida, devolve o rim à sua posição anatômica normal.

Feche a parede abdominal e depois a pele usando um ponto de polipropileno monofilamento 6-0 em um ponto contínuo. Aplique cola cirúrgica estéril para selar a ferida. Opcionalmente, para melhorar a identificação dos linfonodos renais, injete de 10 a 20 microlitros de tinta azul Evans estéril e filtrada a 5% em PBS em ambas as almofadas posteriores do pé antes da linfadenectomia renal.

Em cinco minutos após a injeção, o contraste chega aos linfonodos renais por meio da drenagem ao longo do trato linfático ilíaco. Reposicione o animal na posição lateral esquerda do decúbio com o lado esquerdo voltado para baixo. Use fita adesiva para fixar o braço direito do animal em uma direção superior e a cauda em direção inferior para manter uma postura relaxada, porém alongada.

Agora, faça uma incisão oblíqua de um centímetro logo abaixo da última costela, que ficará um pouco mais alta do que do lado esquerdo. Com dissecação contundente, separe a pele da parede abdominal e torácica. Depois, faça uma incisão de um centímetro através da musculatura da parede abdominal para acessar a cavidade peritoneal.

Identifique o rim direito, que é um órgão liso localizado ao longo da parede abdominal posterior e logo abaixo do fígado. Usando duas pinças angulares, dissece de forma direta atrás do rim direito para entrar no espaço retroperitoneal e refletir o rim direito em direção anteromedial. Identifique a almofada de tecido adiposo que envolve o linfonodo renal direito, que fica atrás do rim e acima dos vasos renais.

Identifique e evite a glândula adrenal localizada acima do linfonodo. Agora, usando pinças de ponta fina, dissece de forma direta ao redor da cápsula do linfonodo para separá-la dos vasos próximos enquanto aplica uma contratração suave com pinças inclinadas. Depois, com pinças de ponta fina, puxe os linfonodos para cima e corte bruscamente as fixações posteromediais com tesoura de ponta fina.

Inspecione a área para garantir hemostasia. Por fim, devolve o rim direito à sua posição anatômica. Feche a parede abdominal e a pele em duas camadas usando sutura monofilamentosa de polipropileno 6-0 em padrão contínuo e aplique cola cirúrgica estéril sobre o local da incisão.

A citometria de fluxo confirmou extração bem-sucedida dos linfonodos em todas as cinco amostras de linfadenectomia renal esquerda e cinco direita, cada uma mostrando mais de 50% de células vivas positivas para CD45, em comparação com menos de 2% nos controles viscerais adiposos. A quantificação das células CD45-positivas mostrou uma diferença altamente significativa entre amostras de linfadenectomia renal esquerda e direita em comparação com tecido adiposo visceral, sem diferença significativa entre os lados esquerdo e direito.