Estudo Comparativo sobre o Conteúdo de Polissacarídeos e Atividades Antioxidantes de Hippophae rhamnoides subsp. sinensis e Hippophae gyantsensis

Este estudo compara o conteúdo de polissacarídeos e a atividade antioxidante entre Hippophae rhamnoides sub. sinensis e Hippophae gyantsensis para elucidar suas diferenças. O estudo é metodologicamente sólido e aborda uma lacuna na literatura sobre diferenças específicas de espécies nas características dos polissacarídeos.

Os achados deste estudo são significativos para a avaliação da qualidade e as potenciais aplicações farmacêuticas. Para começar, transfira cinco gramas de pó de amostra de espinheiro-mar para um balão de fundo redondo de 250 mililitros. Em seguida, adicione 50 mililitros de etanol anidro e deixe de molho em temperatura ambiente de 25 graus Celsius por 24 horas.

No dia seguinte, filtre o pó de amostra embebido usando um funil de Buchner para obter o resíduo do filtro. Lave o resíduo do filtro três vezes com 50 mililitros de água deionizada. Transferir agora o resíduo filtrante desengordurado para um balão seco de fundo redondo de 250 ml.

Adicione 150 mililitros de água deionizada em uma proporção sólido-líquido de um a 30 gramas por mililitro. Realize a extração de refluxo em banho-maria a 80 graus Celsius por duas horas duas vezes. Em seguida, concentrar o extracto utilizando um evaporador rotativo.

Armazene a solução concentrada em uma geladeira a quatro graus Celsius para uso posterior. Em seguida, adicione o reagente Sevag à solução de polissacarídeo bruto na proporção de um a quatro volumes e coloque em um agitador magnético. Em seguida, transfira a mistura para um tubo de centrífuga de 50 mililitros.

Centrifugar a suspensão a 4 000 g durante 15 minutos e recolher o sobrenadante. Para concentrar o extrato de polissacarídeo após a remoção da proteína, adicione etanol anidro em uma proporção de volume de um para três para precipitar polissacarídeos. Coloque a mistura a quatro graus Celsius durante a noite.

No dia seguinte, remova a camada superior de etanol. Transfira a mistura para um tubo de centrifugação de 50 mililitros e centrifugue como antes. Liofilizar o precipitado para obter polissacarídeos totais.

Transferir três gramas de fenol para um balão volumétrico castanho. Adicione 50 mililitros de água deionizada para dissolver o fenol. Agitar até ficar homogéneo, em seguida, rotular e guardar o frasco para utilização posterior.

Em seguida, transferir 10 miligramas de glicose anidra para um balão volumétrico de 10 mililitros. Adicione água deionizada e agite bem a mistura. Em seguida, rotule o balão.

Para a preparação da solução da amostra para análise, pesar cinco miligramas de polissacáridos liofilizados de espinheiro marítimo em balões volumétricos. Adicione água deionizada para levar cada um a um volume final de 50 mililitros. Sonicar cada mistura por 20 minutos até dissolver completamente.

Dilua a solução padrão de glicose com água deionizada a 0,1 miligramas por mililitro. Em seguida, usando uma micropipeta, transfira 200, 300, 400, 500, 600 e 700 microlitros para seis tubos de ensaio limpos. Adicione água pura para levar cada um a um volume total de um mililitro e misture delicadamente cada solução para garantir uma diluição uniforme.

Adicione um mililitro de solução de fenol a 6% e cinco mililitros de ácido sulfúrico a cada tubo de ensaio e misture bem. Transfira as amostras para cubetas. Use água pura como branco e meça a absorbância a 490 nanômetros com um espectrofotômetro UV visível em três réplicas.

Para o teste de precisão, prepare a solução de teste. Realize colorimetria de fenol-ácido sulfúrico. Determine a absorbância e repita seis vezes para calcular o desvio-padrão relativo.

Para o ensaio de estabilidade, preparar a solução de ensaio. Realize colorimetria em zero, duas, quatro, seis, oito e 10 horas após a preparação. Determine a absorbância nos pontos de tempo acima mencionados para calcular o desvio padrão relativo.

Para o ensaio de repetibilidade, preparar seis réplicas paralelas da amostra. Conduza colorimetria de fenol-ácido sulfúrico e determine a absorbância seguindo o procedimento estabelecido. Para realizar o teste de recuperação, prepare nove réplicas paralelas da solução de teste.

Adicione volumes de referência equivalentes a 80, 100 e 120% do conteúdo total de polissacarídeos. Em seguida, execute a colorimetria de fenol-ácido sulfúrico. Para determinação do conteúdo, prepare a solução de amostra.

Realize colorimetria de fenol-ácido sulfúrico seguindo o método estabelecido. Em seguida, determine a absorbância. Pesar 2,7 miligramas de DPPH num balão volumétrico vazio de 50 ml.

Adicione 50 mililitros de etanol anidro para dissolver o DPPH e prepare uma solução estoque. Em seguida, dissolva cinco miligramas de vitamina C em 10 mililitros de água deionizada para preparar uma solução de 0,5 miligrama por mililitro. Diluir esta solução sucessivamente para preparar soluções de teste de vitamina C.

Agora dissolva cinco miligramas de cada amostra de polissacarídeo de espinheiro-mar em 10 mililitros de água deionizada para preparar uma solução de 0,5 miligrama por mililitro. Diluir sucessivamente estas soluções para obter as concentrações de ensaio. Usando a solução DPPH como substrato, prepare os grupos de teste em uma placa de 96 poços.

Adicione 150 microlitros de água e 50 microlitros de DPPH para o grupo de controle negativo, A0. Adicionar 150 microlitros da amostra ou solução de vitamina C e 50 microlitros de DPPH para o grupo de amostra A1. Para o grupo de controle de amostra A2, adicione 150 microlitros de amostra e 50 microlitros de etanol anidro. Deixe a reação prosseguir no escuro por 30 minutos. Em seguida, meça a absorbância em 517 nanômetros.

A curva padrão de glicose mostrou uma forte relação linear entre absorbância e concentração na faixa de 0,02 a 0,07 miligramas por mililitro. O rendimento médio de polissacarídeos de Hippophae gyantsensis foi significativamente maior do que o de Hippophae rhamnoides subespécie sinensis. O teste de precisão demonstrou variação mínima na absorbância em seis medições e RSD de 0,21%, indicando alta precisão do instrumento.

O teste de estabilidade mostrou que os valores de absorbância permaneceram consistentes durante um período de 10 horas, com valor de RSD de 0,45% confirmando a estabilidade da solução da amostra. O teste de repetibilidade produziu valores de absorbância consistentes em seis repetições com RSD de 0,5% validando a repetibilidade do método. O experimento de recuperação do teor de glicose produziu uma taxa média de recuperação de 99,18%, confirmando a precisão do método.

O teor médio de polissacarídeos de Hippophae rhamnoides subespécie sinensis foi significativamente maior do que o de Hippophae gyantsensis. Hippophae gyantsensis exibiu atividade antioxidante ligeiramente maior do que Hippophae rhamnoides subespécie sinensis em todas as concentrações testadas. A 0,5 miligramas por mililitro, a taxa de depuração do DPPH de Hippophae gyantsensis atingiu 81,93%, enquanto Hippophae rhamnoides subespécie sinensis atingiu 75,17%