Name: Produção e uso de moldes de agarose personalizáveis para cultura de folículos ovarianos de camundongos sem andaimes (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-24T13:10:00.000+00:00
Duration: 9 min 50 s
Description: Aprenda a produzir moldes de agarose personalizáveis para cultura de folículos ovarianos de camundongos sem andaimes. Este método melhora o crescimento folicular e a taxa de ovulação em comparação com técnicas tradicionais.

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<table><tbody><tr><td><forte>Materiais e Produtos Químicos</resistente></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; Tubos de centrífuga de poliestireno de 50 mL</td><td>Globe Scientific</td><td>941-11017-CS</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de microcentrífuga de 1,5 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>MCT-150</td><td>Para congelar e armazenar mídia</td></tr><tr><td>Placa de 100 mm, não tratada</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-757-100D&nbsp;</td><td>Para fabricar e armazenar micromoldes de agarose</td></tr><tr><td>100% etanol</td><td>Mercedes Scientific</td><td>1200</td><td>Processamento de tecidos</td></tr><tr><td>1000 & micro; L&nbsp; Ponteiras de pipeta, baixa retenção</td><td>MIDSCI</td><td>PR-1000BK</td><td>Dicas de cultura &nbsp;</td></tr><tr><td>200 & micro; L&nbsp; Ponteiras de pipeta, baixa retenção</td><td>MIDSCI</td><td>PR-200BK</td><td>Dicas de cultura &nbsp;</td></tr><tr><td>Placa de 24 poços</td><td>Corning</td><td>353047</td><td>Cultura</td></tr><tr><td>Antenas de 35 mm</td><td>Falcon</td><td>351008</td><td>Isolar ovários e incubar em meios enizmáticos</td></tr><tr><td>95% de etanol</td><td>Mercedes Scientific</td><td>1210</td><td>Processamento de tecidos</td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Hoefer</td><td>GR140</td><td>Micromoldes</td></tr><tr><td>Óleo Mineral BioXtra, Óleo Leve, Adequado para cultura de células embrionárias de camundongos</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M5310-500ML</td><td>Usado como agente biocompatível de desmoldagem</td></tr><tr><td>Albumina Sérica Bovina &nbsp;</td><td>MP Biomédicos</td><td>103700</td><td>Meios de Crescimento</td></tr><tr><td>Espanadores de limpeza, 10 oz., pacote de 6</td><td>Office Depot&nbsp;</td><td>110284</td><td>Ar comprimido</td></tr><tr><td>Resina V4 Transparente 1 L</td><td>Formlabs, Inc</td><td>RS-F2-GPCL-04</td><td>Resina para impressão 3D</td></tr><tr><td>Béquer plástico reutilizável Corning de baixa forma de 100 mL, polipropileno graduado</td><td>Corning</td><td>1000P-100</td><td>Béquer para misturar componentes de silicone &nbsp;</td></tr><tr><td>DNAse I</td><td>Qiagen</td><td>79254</td><td>Mídia Enzimática</td></tr><tr><td>Ecoflex 00-45 Quase Livre</td><td>Smooth-On, Inc</td><td>B09M8Y9PTV</td><td>Material de silicone</td></tr><tr><td>F-12 + GlutaMAX</td><td>Gibco</td><td>31765-035</td><td>Meios de Crescimento</td></tr><tr><td>Feto Bovino Fetal</td><td>Sigma</td><td>F-3385</td><td>Meios de Crescimento</td></tr><tr><td>Soro Bovino Fetal (FBS)</td><td>Soro de pico</td><td>PS-FB2</td><td>Dissecação de Mídia, Mídia Enzimática, &nbsp; Mídia de Manutenção & Mídia de Maturação</td></tr><tr><td>Fisherbrand&nbsp; Bolsas de Esterilização</td><td>Fisher Scientific</td><td>01-812-50&nbsp;</td><td>Bolsas de Esterilização</td></tr><tr><td>Hormônio folículo-estimulante (FSH)</td><td>EMD Serono, Inc.</td><td>Apenas Gonal-F Rx &nbsp;</td><td>Mídia de Crescimento & Mídia de Maturação</td></tr><tr><td>Gibco&nbsp; DPBS, cálcio, magnésio</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-040-182&nbsp;</td><td>Soro tampão fosfatado de Dulbecco</td></tr><tr><td>Gonadotrofina coriônica humana (hCG)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C1063-1VL</td><td>Mídia de Maturação</td></tr><tr><td>Insulina-transferrina-selênio (ITS)</td><td>ThermoFisher</td><td>41400045</td><td>Meios de Crescimento</td></tr><tr><td>Sondas Moleculares de Invitrogen Rhodamine Phaloidin</td><td>Fisher Scientific</td><td>R415</td><td>Mancha do citoesqueleto do ovo</td></tr><tr><td>Pratos de FIV</td><td>Termo Científica</td><td>150260</td><td>Para isolar, selecionar e pré-equilibrar os folículos</td></tr><tr><td>Leibovit'z 15 (L15)</td><td>Gibco</td><td>11415-064</td><td>Dissecação e Mídia Mídia Enzimática</td></tr><tr><td>Liberase</td><td>Sigma Aldrich</td><td>5401119001</td><td>Mídia Enzimática</td></tr><tr><td>MEM? + GlutaMAX</td><td>Gibco</td><td>32561-037</td><td>Mídia de Manutenção, &nbsp; Mídia de Crescimento & Mídia de Maturação</td></tr><tr><td>Fator de crescimento epidérmico do camundongo (EGF)</td><td>BD em Biociências</td><td>354010</td><td>Mídia de Maturação</td></tr><tr><td>Dessecador Nalgene Transparente de Policarbonato Clássico</td><td>Termo Científica</td><td>5311-0250</td><td>Dessecador a vácuo &nbsp;</td></tr><tr><td>Parafina</td><td>Fisher Scientific</td><td>83-30</td><td>Processamento de Tecidos e Processamento de Tecidos Incorporação</td></tr><tr><td>Penicilina-estreptomicina</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td>Meios de Dissecação, Meios Enzimáticos e Mídia de Manutenção</td></tr><tr><td>Ponteiras de stripper</td><td>Origio</td><td>MXL3-200</td><td>Cultura</td></tr><tr><td>Médio de montagem antifade VECTASHIELD PLUS com DAPI</td><td>Laboratórios Vector</td><td>H-2000</td><td>Coloração do núcleo do ovo</td></tr><tr><td>Xylene</td><td>Mercedes Scientific</td><td>9840</td><td>Processamento de tecidos</td></tr><tr><td>&alpha;-Tubulina (11H10) Coelho mAb (Alexa Fluor 488 Conjugado)</td><td>Tecnologia de Sinalização Celular</td><td>5063S</td><td>Coloração de ovo com tubulina</td></tr><tr><td><forte>Equipamento</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Build Platform 2</td><td>Formlabs, Inc</td><td>BP-F3-02-01&nbsp;</td><td>Componente de impressora 3D</td></tr><tr><td>Dino-Lite Edge AF4915ZTL, USB 2.0</td><td>Dino-Lite</td><td>AF4915ZTL</td><td>Imager para configuração de timelapse</td></tr><tr><td>Forma 3 Tanque de Resina V2.1&nbsp;</td><td>Formlabs, Inc</td><td>RT-F3-02-01</td><td>Componente de impressora 3D</td></tr><tr><td>Impressora 3D Formulário 3B+</td><td>Formlabs, Inc</td><td>F3B-P-IMPRESSORA</td><td>Impressora 3D de estereolitografia (SLA) da Formlabs</td></tr><tr><td>Cura da forma&nbsp;</td><td>Formlabs, Inc</td><td>FH--01</td><td>Plataforma de cura &nbsp;</td></tr><tr><td>Lavagem de forma</td><td>Formlabs, Inc</td><td>FH-WA-01</td><td>Plataforma de lavagem</td></tr><tr><td>Borrifador com vaporizador de bomba</td><td>VWR</td><td>0309-3005</td><td>Para aplicar o agente de desmoldagem</td></tr><tr><td>Capacitor de focalizador/concentrador de luz para a série Edge (excluindo os modelos T5, T8)</td><td>Dino-Lite</td><td>N3C-R</td><td>Componente do imager para configuração de timelapse</td></tr><tr><td>Conjunto Suporte de Montagem que combina o rack RK-10 e a extensão de braço RK-10-EX</td><td>Dino-Lite</td><td>RK-10A</td><td>Componente do imager para configuração de timelapse</td></tr><tr><td>Embedder de tecido</td><td>Leica</td><td>HistoCore Arcadia</td><td>Para incorporar micromoldes</td></tr><tr><td>Processador de tecidos</td><td>Leica</td><td>TP1020</td><td>Para processar micromoldes</td></tr><tr><td>Incubadora de Sacudição 211DS (Sacudidor Orbital)</td><td>Labnet International</td><td>I-5211-DS</td><td>Incubar ovários em meios enzimáticos para liberação de folículos</td></tr><tr><td>Software&nbsp; </forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Autodesk Fusion</td><td>Autodesk, Inc</td><td></td><td>Software de design assistido por computador (CAD). A Autodesk oferece acesso educacional gratuito por meio do programa Autodesk Education.</td></tr><tr><td>DinoCapture 3.0 versão 1.1.1.3&nbsp;</td><td>Dino-Lite</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>Institutos Nacionais de Saúde</td><td></td><td>Analisar imagens de OCT e medir folículos</td></tr><tr><td>Pré-forma</td><td>Formlabs, Inc</td><td></td><td>Software gratuito de preparação de impressão projetado para funcionar com impressoras de estereolitografia (SLA) da Formlabs.&nbsp;</td></tr></tbody></table>

produção e uso de moldes de agarose personalizáveis para cultura de folículos ovarianos de camundongos sem andaimes

Production and Use of Customizable Agarose Molds for Scaffold-Free Mouse Ovarian Follicle Culture

Produção e uso de moldes de agarose personalizáveis para cultura de folículos ovarianos de camundongos sem andaimes

The ovarian follicle is the functional unit of the ovary that produces hormones and gametes needed to sustain female reproductive function and health. The ...

production-use-customizable-agarose-molds-for-scaffold-free-mouse

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Biologia do Desenvolvimento

Um novo método para encapsulação de ovário folículos em uma rede de fibrina 3D alginato-interpenetrantes é descrito. Este sistema combina suporte estrutural, com a degradação proteolítica para apoiar o desenvolvimento de folículos imaturos para produzir ovócitos maduros. Este método pode ser aplicado a agregados de cultura de células para manter contatos célula-célula sem limitar a expansão.

Um método para Encapsulation ovário folículo e Cultura em um proteoliticamente Degradáveis ​​3 Sistema Dimensional

Cultura de células normais em seu contexto tridimensional representa um método alternativo para estudar os eventos iniciais necessárias para a transformação celular e tumorigênese. Este método é usado para crescer ovariano normal e células oviductal para estudar os eventos iniciais na formação de câncer de ovário.

Hidrogéis alginato para Tridimensional Cultura Órgão de ovários e tubas uterinas

Este protocolo descreve a cultura primária / co-cultura de tecido ovariano rato, usando ovários de camundongos recém-nascidos e folículos ovarianos individuais de ratos pré-púberes. As técnicas de cultura de suportar o desenvolvimento de uma forma altamente fisiológico, que permita a investigação do efeito de agentes extrínsecos no ovário, e das interacções entre os folículos do ovário.

Cultura e Co-Culture of Mouse ovários e folículos ovarianos

Este protocolo descreve uma plataforma para a fabricação de anéis de tecido Self montado em tamanhos variáveis, usando um molde de plástico personalizado 3D-impresso. PDMS negativos são curados em molde 3D-impresso; Então a agarose é convertido nos negativos PDMS curados. As células são semeadas em poços de agarose resultante onde eles agregam em anéis de tecido.

Fabricação de poços de Agarose personalizado para a propagação de células e tecido anel Self-assembly usando moldes 3D-impresso

Apresentados aqui estão dois protocolos para o encapsulamento de oócitos suínos em condições culturais 3D. No primeiro, os complexos cumulus-oocyte (COCs) são encapsulados em contas fibrina-alginato. No segundo, são fechados com partículas fluoradas de propileno de etileno (microbioreatores). Ambos os sistemas garantem condições ideais para manter sua organização 3D.

Hidrogéis alginatos desordeiros descabidos proteolíticos e microbiorreatores hidrofóbicos para encapsulamento de oócito suíno

Aqui, são descritos quatro métodos para a geração de organoides testiculares testiculares de células testiculares neonatais primárias, ou seja, matriz extracelular (ECM) e ambientes de cultura 2D e 3D livres de ECM. Essas técnicas possuem múltiplas aplicações de pesquisa e são especialmente úteis para estudar desenvolvimento testicular e fisiologia in vitro.

Geração extra-baseada em matriz celular e extra-celular livre de organoides testiculares de murina

O presente protocolo descreve uma técnica para produzir esferoides de tecido em larga escala de forma econômica usando um dispositivo semelhante a um selo impresso em 3D.

Geração de esferoides de tecido por meio de um dispositivo semelhante a um selo impresso em 3D

Este protocolo descreve um novo modelo de cultura tridimensional (3-D) usando um hidrogel de hialuronano ligado à tiramina para encapsular e cultivar folículos pré-antrais do ovário de camundongo. Também detalhamos duas abordagens para a criopreservação do folículo ovariano por vitrificação.

Aplicação de um novo hidrogel de hialuronano para cultura de folículos tridimensionais e metodologia para criopreservação de folículos ovarianos de camundongos

Este estudo apresenta uma metodologia econômica e eficiente para gerar estruturas celulares 3D usando um sistema baseado em carimbos para criar micropoços em moldes de agarose. O sistema promove a formação de esferóides/organoides uniformes, melhorando assim as interações celulares. Essa abordagem reduz a variabilidade experimental e oferece suporte a aplicações em testes de medicamentos e engenharia de tecidos.

Geração de esferoides/organoides tridimensionais a partir de culturas de células bidimensionais usando um novo dispositivo de carimbo

Descrevemos métodos para isolar células somáticas ovarianas de camundongos a partir de uma fração rica em estroma do ovário e para gerar organoides somáticos ovarianos de camundongos usando uma abordagem sem andaimes.

Sondando o Microambiente Ovariano: Métodos para Isolamento, Cultura 2D e Cultura Organoide de Células Somáticas Ovarianas de Camundongos

Aprenda a produzir moldes de agarose personalizáveis para cultura de folículos ovarianos de camundongos sem andaimes. Este método melhora o crescimento folicular e a taxa de ovulação em comparação com técnicas tradicionais.

Produção e uso de moldes de agarose personalizáveis para cultura de folículos ovarianos de camundongos sem andaimes

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