Avaliação Doppler por Onda Pulsada da Disfunção Diastolica no modelo ZSF-1 de Rato de Hipertensão Pulmonar Devido a Doença Cardíaca Esquerda

Nossa pesquisa foca em insuficiência cardíaca com fração de ejeção preservada e nas diferenças significativas de sexo que a doença manifesta. A disfunção diastólica é uma característica marcante da HFpEF, com índices que podem ser avaliados usando sonografia Doppler sem ecocardiografia 2D, que é cara e requer equipamentos sofisticados. Para começar, ligue o tablet conectado ao painel de rastreamento do ECG.

Selecione o RS Monitor entre as aplicações disponíveis. Depois, ligue o painel de ECG pressionando o botão redondo à frente. Toque nas configurações no canto inferior direito da interface do usuário.

Selecione presets no menu de configurações experimentais. Toque no menu suspenso sob presets salvos, depois escolha Rat CV e clique em OK no canto inferior direito. Em seguida, limpe o pad de ECG com álcool etílico 70% para remover qualquer resíduo de gel de ECG.

Obtenha gel eletrodo altamente condutivo para o eletrocardiograma e gel hipoalergênico solúvel em água para o Doppler. Coloque o animal anestesiado em deitado sobre a almofada de ECG não invasiva, com o nariz posicionado no cone do nariz de tamanho adequado e a saída do vaporizador ajustada para 1,5 a 2%. Usando um aplicador com ponta de algodão, aplique uma pequena quantidade de gel eletrodo na superfície dorsal das quatro patas e no lado plantar das patas traseiras. Prenda as patas com fita adesiva na superfície de contato do eletrodo do painel de ECG, garantindo contato suficiente entre o gel e o almofado.

Depois, use um creme depilatório suave para remover os pelos do peito e abdominais. Limpe qualquer creme residual para evitar irritação da pele. Certifique-se de que a linha de base isoelétrica e as formas de onda P, QRS e T estejam claramente exibidas no monitor do computador.

Crie uma nova pasta identificando o animal e os dados de interesse. Ligue o dispositivo transceptor Doppler de pulso usando os interruptores de energia na frente e atrás da grande caixa azul. Depois, ligue o processador de sinal Doppler.

Em seguida, abra o software de estação de trabalho de processamento de sinal Doppler. Clique em Configurar e selecione Configuração do Sistema. Selecione a frequência de sonda de 20 megahertz para o experimento.

Conecte a sonda de 20 megahertz ao investigar um rato ou rato jovem. Use uma sonda de 10 megahertz para ratos mais velhos, maiores ou obesos. Se ambas as sondas estiverem conectadas, use o interruptor de alavanca na frente do módulo transceptor para alternar entre frequências conforme necessário.

Certifique-se de que o transdutor de sonda portátil esteja conectado à tomada do canal A ou B no módulo do transceptor. Selecione o canal correspondente para operar a sonda portátil. Configure o interruptor de direção para TWD para exibir o fluxo em direção à sonda acima da linha base de fluxo zero.

Depois, ajuste o alcance para 2,5 a 3,5 milímetros para camundongos ou de quatro a seis milímetros para ratos. Ajuste o filtro para 15 para suavizar a saída da velocidade fase para um sinal amortecido. Pressione ir no canto superior esquerdo da interface do usuário.

Na janela pop-up, insira as informações relevantes de aquisição, incluindo tipo de animal, gênero, data de nascimento, idade na data de aquisição e peso. Selecione a pasta pré-criada desejada no menu suspenso do diretório e clique em OK. Ajuste a linha base do ECG puxando a barra da escala do eixo para cima ou para baixo e até que as ondas R fiquem claramente visíveis. Para realizar medições Doppler, primeiro se aplica uma pequena quantidade de gel de ultrassom na região subesternal e epigástrica do peito e abdômen do animal anestesiado.

Coloque a sonda Doppler na linha média sob o diafragma, logo abaixo do esterno, com a cabeça apontando a cefálade em direção à orelha esquerda do animal. Faça uma varredura lenta para o fluxo sanguíneo movendo a sonda em pequenos movimentos circulares com raio crescente. Mantenha uma pressão suave da sonda contra a pele sob o diafragma o tempo todo.

Se o fluxo mitral não for detectado, ajuste o mostrador de alcance em incrementos de 0,5 milímetros até que a forma de onda transmissora seja identificada. Certifique-se de que a forma de onda Doppler e o eletrocardiograma sejam exibidos simultaneamente na tela. Crie instantâneos usando o pedal assim que o fluxo correto for identificado e repita até que a qualidade ideal dos dados seja registrada.

Pare a aquisição de dados clicando em parar quando estiver satisfeito com a qualidade dos dados. Clique em Arquivo e selecione Abrir no menu suspenso. Escolha o arquivo de dados de maior qualidade da pasta pré-criada para análise.

Pressione em Análise e depois em Modo Análise. Escolha o passo dois, configuração geral e defina o tipo de dado para Doppler. Depois, ajuste o sinal para entrada mitral.

Selecione o modelo animal apropriado e escolha todos os nomes de medição sob os nomes padrão das medições. Selecione o passo cinco, editor R-peak no menu suspenso de controle de análise. Ative os marcadores de batida e R-pico de exibição e clique em auto-calcular.

Depois, escolha o passo seis, editor de beats no menu suspenso de controle de análise. Ative os marcadores de batida e pico R e clique em selecionar todas as batidas. Em seguida, escolha o passo sete, editor de marcadores.

Clique em marcadores de análise de exibição e escolha o parâmetro desejado sob o marcador atual selecionado. Certifique-se de que os parâmetros fornecidos estejam disponíveis para a completude dos dados. Selecione o passo oito, resultados da medição.

Clique em copiar resultados para a área de transferência para copiar os dados em um arquivo Excel e salvá-los. Remova a fita das patas do animal após desligar o vaporizador. Depois, retire o animal da almofada do eletrodo.

Limpe qualquer creme depilatório e gel de eletrodos restantes do animal. Depois, transferir o animal de volta para a gaiola, com acesso livre a água e comida para recuperação. Para a avaliação mais precisa da função diastólica, padrões de fluxo antegrado e retrógrado relacionados à abertura e fechamento da válvula mitral e aórtica precisam ser visualizados dentro do mesmo ciclo cardíaco ao longo de múltiplos ciclos.

Múltiplos índices foram determinados a partir do padrão de fluxo transmissor bifásico, incluindo o pico de enchimento precoce, o pico de contração auricular, a razão entre esses dois picos e o tempo de desaceleração do pico inicial de preenchimento. O tempo de relaxamento isovolumoso, ou IVRT, foi um bom indicador de disfunção diastólica em roedores. A IVRT aumentou durante o envelhecimento no modelo ZS F1 de hipertensão pulmonar cardíaca esquerda.

Essa mudança pode ser detectada já com 16 semanas de idade. Ratos machos obesos de 24 semanas apresentaram IVRT mais alta em comparação com os períodos anteriores nos controles magros. Esse protocolo permite que o pesquisador estude índices ecocardiográficos estabelecidos de HFpEF, incluindo a razão E/A, IVT ou tempo de desaceleração da onda E.

Essa técnica não possui visualização 2D do coração, e alguns marcadores da função diastólica dependem da carga, uma condição difícil de controlar. Esta é uma técnica de baixo custo que detecta de forma confiável a progressão da doença ao longo do tempo em doenças cardiopulmonares que manifestam disfunção diastólica.