Name: Procedimento de Amostragem Baseada em Fio Vermelho de Fenol para Lipidômicos de Fluido Lagrimal Não Alvo na Descoberta de Biomarcadores (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-12-12T14:25:00.000+00:00
Duration: 8 min 16 s
Description: Aprenda a coletar fluido lacrimal humano com fios de vermelho de fenol para análise lipidômica não alvo por LC-MS/MS. Este protocolo padronizado reduz a variabilidade entre operadores e melhora a reprodutibilidade na descoberta de biomarcadores oculares.

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<ol><li>Esam, S., Singh, S., Konda, N., Gandhi, R., Vemuganti, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tear+film+lipid+layer+thickness%3A+Measurement+techniques%2C+normative+values+and+alteration+in+ocular+surface+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Tear film lipid layer thickness: Measurement techniques, normative values and alteration in ocular surface diseases.</a> Curr Eye Res. , (2025).</li>
<li>Ambaw, Y. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Profile+of+tear+lipid+mediator+as+a+biomarker+of+inflammation+for+meibomian+gland+dysfunction+and+ocular+surface+diseases%3A+Standard+operating+procedures%5BTitle%5D)+AND+%22Ocul+Surf%22%5BJournal%5D)">Profile of tear lipid mediator as a biomarker of inflammation for meibomian gland dysfunction and ocular surface diseases: Standard operating procedures.</a> Ocul Surf. 26, 318-327 (2022).</li>
<li>Sheppard, J. D., Nichols, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dry+eye+disease+associated+with+meibomian+gland+dysfunction%3A+Focus+on+tear+film+characteristics+and+the+therapeutic+landscape%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmol+Ther%22%5BJournal%5D)">Dry eye disease associated with meibomian gland dysfunction: Focus on tear film characteristics and the therapeutic landscape.</a> Ophthalmol Ther. 12 (3), 1397-1418 (2023).</li>
<li>Lam, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipidomic+analysis+of+human+tear+fluid+reveals+structure-specific+lipid+alterations+in+dry+eye+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22J+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">Lipidomic analysis of human tear fluid reveals structure-specific lipid alterations in dry eye syndrome.</a> J Lipid Res. 55 (2), 299-306 (2014).</li>
<li>Borchman, D., Ramakrishnan, V., Henry, C., Ramasubramanian, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+meibum+and+tear+lipid+composition+and+conformation%5BTitle%5D)+AND+%22Cornea%22%5BJournal%5D)">Differences in meibum and tear lipid composition and conformation.</a> Cornea. 39 (1), 122-128 (2020).</li>
<li>Miyamoto, M., Sassa, T., Sawai, M., Kihara, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+polarity+gradient+formed+by+%CF%89-hydroxy+lipids+in+tear+film+prevents+dry+eye+disease%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Lipid polarity gradient formed by ω-hydroxy lipids in tear film prevents dry eye disease.</a> eLife. 9, 53582(2020).</li>
<li>Zhao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipidomics+profiles+revealed+alterations+in+patients+with+meibomian+gland+dysfunction+after+exposure+to+intense+pulsed+light%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neurol%22%5BJournal%5D)">Lipidomics profiles revealed alterations in patients with meibomian gland dysfunction after exposure to intense pulsed light.</a> Front Neurol. 13, 827544(2022).</li>
<li>Bland, H. C., Moilanen, J. A., Ekholm, F. S., Paananen, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigating+the+role+of+specific+tear+film+lipids+connected+to+dry+eye+syndrome%3A+A+study+on+o-acyl-%CF%89-hydroxy+fatty+acids+and+diesters%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Investigating the role of specific tear film lipids connected to dry eye syndrome: A study on o-acyl-ω-hydroxy fatty acids and diesters.</a> Langmuir. 35 (9), 3545-3552 (2019).</li>
<li>Khanna, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolomics+and+lipidomics+approaches+in+human+tears%3A+A+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Surv+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Metabolomics and lipidomics approaches in human tears: A systematic review.</a> Surv Ophthalmol. 67 (4), 1229-1243 (2022).</li>
<li>Winiarczyk, M., Biela, K., Michalak, K., Winiarczyk, D., Mackiewicz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+tear+proteomic+profile+in+ocular+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Environ+Res+Public+Health%22%5BJournal%5D)">Changes in tear proteomic profile in ocular diseases.</a> Int J Environ Res Public Health. 19 (20), 13341(2022).</li>
<li>Bertram, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+Schirmer+strip+wetness+on+volume+absorbed%2C+volume+recovered%2C+and+total+protein+content+in+canine+tears%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Influence of Schirmer strip wetness on volume absorbed, volume recovered, and total protein content in canine tears.</a> Vet Ophthalmol. 24 (4), 425-428 (2021).</li>
<li>Zhan, X., Li, J., Guo, Y., Golubnitschaja, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mass+spectrometry+analysis+of+human+tear+fluid+biomarkers+specific+for+ocular+and+systemic+diseases+in+the+context+of+3p+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22EPMA+J%22%5BJournal%5D)">Mass spectrometry analysis of human tear fluid biomarkers specific for ocular and systemic diseases in the context of 3p medicine.</a> EPMA J. 12 (4), 449-475 (2021).</li>
<li>Gijs, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pre-analytical+sample+handling+effects+on+tear+fluid+protein+levels%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Pre-analytical sample handling effects on tear fluid protein levels.</a> Sci Rep. 13 (1), 1317(2023).</li>
<li>Kecskeméti, G., Tóth-Molnár, E., Janáky, T., Szabó, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+extensive+study+of+phenol+red+thread+as+a+novel+non-invasive+tear+sampling+technique+for+proteomics+studies%3A+Comparison+with+two+commonly+used+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">An extensive study of phenol red thread as a novel non-invasive tear sampling technique for proteomics studies: Comparison with two commonly used methods.</a> Int J Mol Sci. 23 (15), 8647(2022).</li>
<li>Barmada, A., Shippy, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantifying+sample+collection+and+processing+impacts+on+fiber-based+tear+fluid+chemical+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Vis+Sci+Technol%22%5BJournal%5D)">Quantifying sample collection and processing impacts on fiber-based tear fluid chemical analysis.</a> Transl Vis Sci Technol. 9 (10), 23(2020).</li>
<li>Hao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validation+of+the+phenol+red+thread+test+in+a+Chinese+population%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Validation of the phenol red thread test in a Chinese population.</a> BMC Ophthalmol. 23 (1), 498(2023).</li>
<li>Matyash, V., Liebisch, G., Kurzchalia, T. V., Shevchenko, A., Schwudke, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+extraction+by+methyl-tert-butyl+ether+for+high-throughput+lipidomics%5BTitle%5D)+AND+%22J+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">Lipid extraction by methyl-tert-butyl ether for high-throughput lipidomics.</a> J Lipid Res. 49 (5), 1137-1146 (2008).</li>
<li>Ulmer, C. Z., Jones, C. M., Yost, R. A., Garrett, T. J., Bowden, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+Folch%2C+Bligh-Dyer%2C+and+Matyash+sample-to-extraction+solvent+ratios+for+human+plasma-based+lipidomics+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chim+Acta%22%5BJournal%5D)">Optimization of Folch, Bligh-Dyer, and Matyash sample-to-extraction solvent ratios for human plasma-based lipidomics studies.</a> Anal Chim Acta. 1037, 351-357 (2018).</li>
<li>Lam, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extensive+characterization+of+human+tear+fluid+collected+using+different+techniques+unravels+the+presence+of+novel+lipid+amphiphiles%5BTitle%5D)+AND+%22J+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">Extensive characterization of human tear fluid collected using different techniques unravels the presence of novel lipid amphiphiles.</a> J Lipid Res. 55 (2), 289-298 (2014).</li>
<li>Quah, J. H., Tong, L., Barbier, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient+acceptability+of+tear+collection+in+the+primary+healthcare+setting%5BTitle%5D)+AND+%22Optom+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Patient acceptability of tear collection in the primary healthcare setting.</a> Optom Vis Sci. 91 (4), 452-458 (2014).</li>
<li>Saini, R. K., Prasad, P., Shang, X., Keum, Y. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+lipid+extraction+methods-a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Advances in lipid extraction methods-a review.</a> Int J Mol Sci. 22 (24), 13643(2021).</li>
<li>Chen, J., Nichols, K. K., Wilson, L., Barnes, S., Nichols, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Untargeted+lipidomic+analysis+of+human+tears%3A+A+new+approach+for+quantification+of+o-acyl-omega+hydroxy+fatty+acids%5BTitle%5D)+AND+%22Ocul+Surf%22%5BJournal%5D)">Untargeted lipidomic analysis of human tears: A new approach for quantification of o-acyl-omega hydroxy fatty acids.</a> Ocul Surf. 17 (2), 347-355 (2019).</li>
<li>Köfeler, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recommendations+for+good+practice+in+MS-based+lipidomics%5BTitle%5D)+AND+%22J+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">Recommendations for good practice in MS-based lipidomics.</a> J Lipid Res. 62, 100138(2021).</li>
<li>Ulmer, C. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+efforts+to+improve+lipid+stability+during+sample+preparation+and+standardization+efforts+to+ensure+accuracy+in+the+reporting+of+lipid+measurements%5BTitle%5D)+AND+%22Lipids%22%5BJournal%5D)">A review of efforts to improve lipid stability during sample preparation and standardization efforts to ensure accuracy in the reporting of lipid measurements.</a> Lipids. 56 (1), 3-16 (2021).</li>
<li>Sens, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pre-analytical+sample+handling+standardization+for+reliable+measurement+of+metabolites+and+lipids+in+LC-MS-based+clinical+research%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mass+Spectrom+Adv+Clin+Lab%22%5BJournal%5D)">Pre-analytical sample handling standardization for reliable measurement of metabolites and lipids in LC-MS-based clinical research.</a> J Mass Spectrom Adv Clin Lab. 28, 35-46 (2023).</li>
<li>Salem, M., Bernach, M., Bajdzienko, K., Giavalisco, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+fractionated+extraction+method+for+the+comprehensive+analysis+of+metabolites%2C+lipids%2C+and+proteins+from+a+single+sample%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A simple fractionated extraction method for the comprehensive analysis of metabolites, lipids, and proteins from a single sample.</a> J Vis Exp. (124), e55802(2017).</li>
<li>Fong, P. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+tear+film+biomarkers+in+the+diagnosis+and+management+of+dry+eye+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Taiwan+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Role of tear film biomarkers in the diagnosis and management of dry eye disease.</a> Taiwan J Ophthalmol. 9 (3), 150-159 (2019).</li>
<li>Sanroque-Muñoz, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tear-derived+extracellular+vesicles+as+diagnostic+biomarkers+for+ocular+and+neurodegenerative+diseases%3A+Opportunities+and+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Extracell+Vesicles+Circ+Nucl+Acids%22%5BJournal%5D)">Tear-derived extracellular vesicles as diagnostic biomarkers for ocular and neurodegenerative diseases: Opportunities and challenges.</a> Extracell Vesicles Circ Nucl Acids. 6 (3), 609-625 (2025).</li>
<li>Vera-Montecinos, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+throughput+tear+proteomics+with+data+independent+acquisition+enables+biomarker+discovery+in+allergic+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">High throughput tear proteomics with data independent acquisition enables biomarker discovery in allergic conditions.</a> Sci Rep. 15 (1), 31181(2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Acetonitrilo (ACN), grau LC-MS</td><td>RCI Labscan</td><td>LM1005</td><td></td></tr><tr><td>Coluna C18 ACQUITY UPLC CSH</td><td>Waters Corporation</td><td>186005297</td><td>130&Aring;, 1,7 &micro; m, 2,1 mm x 100 mm</td></tr><tr><td>Formiato de amônio, grau LC-MS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>55674</td><td></td></tr><tr><td>Frasco de Vidro Autoamostrador</td><td>Well Rich Scientific</td><td>2ML-9-V1002</td><td>Frasco de rosca de rosca 9-425 de 2mL de vidro transparente 12*32mm com rosca de rosca 9-425 (COM bloco de escrita)</td></tr><tr><td>Tampa de rosca nervada aberta azul 9-425 &nbsp;</td><td>Well Rich Scientific</td><td>9-SP1003</td><td>com 9mm, PTFE branco/septa de silicone vermelho 1mm</td></tr><tr><td>Clorofórmio, grau HPLC</td><td>Reagentes Duksan</td><td>1271</td><td></td></tr><tr><td>Tubos Eppendorf Safe-Lock, 1,5 mL</td><td>Eppendorf</td><td>30120086</td><td></td></tr><tr><td>Ácido Fórmico (FA),&nbsp; Grau LC-MS</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A117-50</td><td></td></tr><tr><td>Micro-inserto de vidro</td><td>Well Rich Scientific</td><td>2ML-N2002</td><td>250 & micro; Inserto em L, vidro transparente, base cônica com polimola, tamanho: 5,8*28,5mm</td></tr><tr><td>Isopropanol, grau LC-MS</td><td>RCI Labscan</td><td>LM1162</td><td></td></tr><tr><td>LipidSearch Software</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>OPTON-30879</td><td>Versão 5</td></tr><tr><td>Metanol, &nbsp; Grau LC-MS</td><td>RCI Labscan</td><td>LM1115</td><td></td></tr><tr><td>Fio Vermelho de Fenol &nbsp; (PRT)</td><td>Tianjin Jingming New Technology Development Co., Ltd</td><td>20192160086</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga refrigerada</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>75007200</td><td></td></tr><tr><td>Concentrador centrífugo refrigerado CentriVap e armadilhas frias CentriVap</td><td>Labconco</td><td>16108335</td><td></td></tr><tr><td>Microtubos com tampa de rosca</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>3488</td><td></td></tr><tr><td>Éter metílico tert-butílico (MTBE), grau HPLC</td><td>Reagentes Duksan</td><td>1070</td><td></td></tr><tr><td>Thermo Scientific Dionex UltiMate 3000 HPLC</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>ULTIM3000RSLCNANO</td><td></td></tr><tr><td>Thermo Scientific Orbitrap IQ-X Tribrid MS</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>FSN05-10001</td><td></td></tr><tr><td>ThermoMixer C</td><td>Eppendorf</td><td>5382000015</td><td></td></tr><tr><td>Limpador Ultrassônico</td><td>Ultrassônico Crest</td><td>P500D-45</td><td></td></tr><tr><td>Misturador de vórtices</td><td>Referência</td><td>BV1003</td><td></td></tr></tbody></table>

procedimento de amostragem baseada em fio vermelho de fenol para lipidômicos de fluido lagrimal não alvo na descoberta de biomarcadores

Phenol Red Thread-based Sampling Procedure for Untargeted Tear Fluid Lipidomics in Biomarker Discovery

Procedimento de Amostragem Baseada em Fio Vermelho de Fenol para Lipidômicos de Fluido Lagrimal Não Alvo na Descoberta de Biomarcadores

Tear lipids are crucial for tear film stability and ocular surface health. Changes in tear composition could be associated with ocular and systemic ...

phenol-red-thread-based-sampling-procedure-for-untargeted-tear-fluid

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A identificação de biomarcadores de RNA e proteínas a partir de lágrimas em modelos de camundongos é uma grande promessa para o diagnóstico precoce em várias doenças. Este manuscrito fornece um protocolo abrangente para otimizar a eficácia e eficiência do isolamento de mRNA e proteína de lágrimas de camundongos.

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Aprenda a coletar fluido lacrimal humano com fios de vermelho de fenol para análise lipidômica não alvo por LC-MS/MS. Este protocolo padronizado reduz a variabilidade entre operadores e melhora a reprodutibilidade na descoberta de biomarcadores oculares.

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