Name: Mapeamento Espacial Aprimorado das Camadas de Músculo Gástrico de Camundongos usando uma técnica modificada do Swiss Roll (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-25T14:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 18 s
Description: Aprenda uma técnica modificada do Swiss Roll para mapeamento espacial das camadas musculares gástricas em camundongos. Este método preserva a arquitetura tecidual e permite análise simultânea de todas as regiões do estômago com orientação espacial precisa.

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</ol>

<table><tbody><tr><td>#5SF Pinças</td><td>FERRAMENTAS CIENTÍFICAS FINAS</td><td>11252-00</td><td></td></tr><tr><td>albumina sérica bovina & nbsp;</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>A7906</td><td></td></tr><tr><td>Fonte de luz LED ColdVision MC-LS</td><td>SCHOTT</td><td>MC-LS</td><td></td></tr><tr><td>Software Confocal &nbsp;</td><td>Nikon</td><td>Software de Imagem Nikon NIS-Elements</td><td></td></tr><tr><td>Crioseal XYL</td><td>Epredida</td><td>9312-4</td><td></td></tr><tr><td>DAPI (4',6-diamidino-2-fenilindol, dilactato)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>D3571</td><td></td></tr><tr><td>Pratos de Dissecação, Grandes</td><td>Sistemas Vivos&nbsp; Instrumentação</td><td>SKU: DD-90</td><td></td></tr><tr><td>Anti-bode Donkey AF647 pAb</td><td>Tecnologias de Vida</td><td>A21447</td><td>Lote: 1739289 RRID:AB_2535864</td></tr><tr><td>Anti-rato Donkey AF555 pAb</td><td>Tecnologias de Vida</td><td>A31570</td><td>Lote: 1774719 RRID:AB_2536180</td></tr><tr><td>Anti-coelho Donkey AF488 pAb</td><td>Tecnologias de Vida</td><td>A21206</td><td>Lote: 2668665 RRID:AB_2535792</td></tr><tr><td>E-cadharina (diluição 1:400)</td><td>BD em Biociências</td><td>610181</td><td>lote: 25510 RRID:AB_397580</td></tr><tr><td>Eosina</td><td>ELITechGroup</td><td>$SS-071C</td><td></td></tr><tr><td>Pinças Revestidas de Epóxi</td><td>FERRAMENTAS CIENTÍFICAS FINAS</td><td>11210-10</td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>459828-4L</td><td></td></tr><tr><td>TUBO FLEXÍVEL 1,5 mL</td><td>Eppendorf</td><td>22364111</td><td></td></tr><tr><td>Esponjas de gaze</td><td>Fisherscientific</td><td>22-362-178</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura Fina Endurecida</td><td>FERRAMENTAS CIENTÍFICAS FINAS</td><td>14090-09</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxilina</td><td>Epredia</td><td>7211</td><td></td></tr><tr><td>KIT (0.2 & micro; g/mL; diluição 1:1000)</td><td>R& Sistemas D</td><td>AF1356</td><td>Lote: IEO0217101 RRID: AB_354750</td></tr><tr><td>SPRAY SPRAY DE SOLUÇÃO DE LIMPEZA DE LENTES DE 1 OZ</td><td>Nikon</td><td>77013066</td><td></td></tr><tr><td>Vidro de Cobertura de Microscópio</td><td>Fisher Scientific</td><td>12541016</td><td></td></tr><tr><td>Lâminas de microscópio</td><td>CardinalHealth</td><td>M6133A</td><td></td></tr><tr><td>Minutien Pins</td><td>FERRAMENTAS CIENTÍFICAS FINAS</td><td>26002-20</td><td></td></tr><tr><td>MYH11 (diluição 1:400)</td><td>Tecnologias Biomédicas</td><td>BT-562</td><td>RRID:AB_10013421</td></tr><tr><td>Esmalte de unhas</td><td>CORES PECAMINOSAS</td><td>7.33855E+11</td><td></td></tr><tr><td>Agulha 30 G x 1/2 pol. &nbsp;</td><td>BD em Biociências</td><td>305106</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldeído</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>158127-500G</td><td></td></tr><tr><td>Lâminas de Aresta Simples Personna</td><td>A Razor Blade Co.</td><td>76247-652</td><td></td></tr><tr><td>Solução de Bloqueio IgG para Mouse-on-Mouse ReadyProbes (30x)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>R37621</td><td>Lote: 3226230</td></tr><tr><td>Montagem SlowFade Diamond Antifade (Mídia de montagem)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>S36972</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de coloração StainTray com 10 slides</td><td>Simport Scientific</td><td>M918-2</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio estereoscópico 0,8x-5x</td><td>Nikon</td><td>SMZ645</td><td></td></tr><tr><td>Sucrose&nbsp;</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>S9378-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Surface-Amps X-100 (Triton X)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>28314</td><td></td></tr><tr><td>TMEM16A (ANO1: diluição 1:400)</td><td>Abcam</td><td>ab53212&nbsp;</td><td>Lote: GP3295656-1 RRID: AB_883075</td></tr><tr><td>Pipeta de transferência</td><td>Falcon</td><td>357575</td><td></td></tr><tr><td>TUBB3 (diluição 1:400)</td><td>Tecnologia de sinalização celular</td><td>4466</td><td>Lote: 5 RRID: AB_1904176</td></tr><tr><td>Xilenes&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>X3P-1GAL</td><td>MUITO 206238</td></tr></tbody></table>

mapeamento espacial aprimorado das camadas de músculo gástrico de camundongos usando uma técnica modificada do swiss roll

Enhanced Spatial Mapping of Mouse Gastric Muscle Layers Using a Modified Swiss Roll Technique

Usando o novo método, os rolos suíços gástricos murinos incluíam as três principais regiões do estômago: fundo, corpo e antro, junto com uma pequena porção do esôfago e do duodeno em uma única seção. Incluir todo o estômago em uma seção permite uma análise regional abrangente (Figura 1). A coloração por hematoxilina e eosina (H&amp;E) em imagens inteiras dos rolos suíços do estômago demonstrou uma arquitetura gástrica bem preservada em todas as regiões, permitindo visualização clara das camadas mucosa, submucosa e muscular (Figura 3). A Figura 4 mostra a coloração imunofluorescente representativa das células intersticiais de Cajal (ICC; células pacemaker que geram ondas lentas rítmicas subjacentes à motilidade intestinal fásica; identificadas por KIT e ANO1), neurônios entéricos (neurônios do sistema nervoso entérico que coordenam a motilidade gastrointestinal; identificados por imunocoloração TUBB3) e núcleos (DAPI). Na mucosa gástrica, a KIT também é expressa nas células de Paneth e cálica, conforme járelatado 9,10,11. O ANO1 também é altamente expresso no epitélio gástrico, particularmente nas células epiteliais colunares do fundo de olho, consistente com seu papel no transporte de cloreto e secreçãomucosa 11. Além disso, TUBB3 é expresso em certas células endócrinas gástricas e células secretoras de muco, segundo dados do Atlas de ProteínasHumanas 12,13. A Figura 5 mostra a coloração imunofluorescente representativa de células musculares lisas marcadas por MYH11, células epiteliais da mucosa gástrica marcadas por E-cadherina e ICC marcadas por KIT. MYH11 também é expressa em miofibroblastos na mucosa gástrica, conforme relatadoanteriormente em 14. Juntos, esses resultados de imunofluorescência confirmam que nosso protocolo preserva a arquitetura tecidual.
<img alt="Figura 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69673/69673fig1.jpg" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="Figure 1"> 
Figura 1: Preparação do "rolo suízo" do estômago do camundongo para criossecção. (A) Todo o estômago é colocado em um prato de dissecação revestido de silicone preto, preenchido com soro fisiológico frio tamponado com fosfato (PBS) imediatamente após a remoção para preservar a integridade dos tecidos. (B) O estômago é aberto ao longo do ponto médio do duodeno. (C) O estômago é suavemente esticado e preso no prato para ficar plano sem aplicar tensão excessiva. Uma linha tracejada vermelha é contornada ao longo do papel para indicar onde deve ser aparado e facilitar o rolamento. (D) O estômago aberto e fixo é colocado sobre papel filtro umedecido com PBS em preparação para enrolar em uma configuração compacta. A seta vermelha mostra a direção do estômago girando. (E) Os pedaços de tecido são incorporados em composto de temperatura de corte ideal (O.C.T.) e congelados em gelo seco em preparação para criossecção. (F) Os blocos congelados são armazenados a −80 °C e criossecados com espessura de 5 μm para análise a jusante. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69673/69673fig1large.jpg" target="_blank">Por favor, clique aqui para ver uma versão ampliada desta figura.</a>
<img alt="Figura 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69673/69673fig2.jpg" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="Figure 2"> 
Figura 2: Configuração da aquisição de ND e visualização de saturação durante a imagem Z-stack. (A) Configurações do laser e do detector configuradas no software de imagem confocal para imagem espectral multicanal. Quatro fluoróforos são utilizados: 4′,6-diamidino-2-fenilindol (DAPI), Alexa Fluor 488 (AF488), Alexa Fluor 555 (AF555) e Alexa Fluor 647 (AF647), cada um acoplado a lasers de excitação e detectores de emissão correspondentes. O gráfico espectral exibe curvas de excitação e emissão, permitindo ajustes para minimizar diafonia e otimizar a detecção de sinais. (B) As configurações de exposição são ajustadas individualmente para cada fluoróforo para evitar a saturação de pixels e preservar detalhes em regiões de alta intensidade. (C) Configuração grande de aquisição de imagem (por exemplo, 6 × 6 campos) permite visualizar todo o rolo gástrico de Swiss Roll; O tamanho do campo da imagem deve ser ajustado de acordo com o tamanho e a compacidade do tecido enrolado. (D) Janela de aquisição ND mostrando as configurações dos parâmetros da pilha Z. A faixa Z é definida selecionando as posições superior e inferior do músculo gástrico, com oito etapas configuradas para capturar a profundidade total do tecido para análise tridimensional (3D). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69673/69673fig2large.jpg" target="_blank">Por favor, clique aqui para ver uma versão ampliada desta figura.</a>
<img alt="Figura 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69673/69673fig3.jpg" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="Figure 3"> 
Figura 3: Imagem de um Swiss roll de camundongo manchado com hematoxilina e eosina. A varredura de azulejo demonstra a capacidade de visualizar todo o rolo suíço gástrico de uma camundonha C57BL/6J de 8 semanas. As principais regiões anatômicas são indicadas, incluindo o esôfago (linha pontilhada vermelha), esfíncter esofágico inferior (linha pontilhada roxa), fundo de olho (linha pontilhada preta), corpo (linha pontilhada azul), antro (linha pontilhada verde) e duodeno (linha pontilhada laranja). Barra de escala: 1000 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69673/69673fig3large.jpg" target="_blank">Por favor, clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figura 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69673/69673fig4.jpg" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="Figure 4"> 
Figura 4: Imagens confocais de um rolo suíço de um estômago murino inteiro: ANO1, KIT, TUBB3. Painéis superiores: Imagens confocais representativas costuradas de um rolo suíço gástrico de uma fêmea de 8 semanas de camundongo C57BL/6J, mostrando imunocoloração para ANO1 (verde), KIT (ciano), TUBB3 (amarelo) e núcleos (azul). Todo o estômago enrolado, incluindo fundo, corpo e antrumo, é visualizado. Barras de escala: 1000 μm. Painéis inferiores: Vistas ampliadas da região delineada pela caixa branca tracejada nos painéis superiores, destacando detalhes celulares das células intersticiais de Cajal (ANO1+ e KIT+; setas amarelas) e neurônios entéricos (TUBB3⁺; setas vermelhas). Barras de escala: 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69673/69673fig4large.jpg" target="_blank">Por favor, clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figura 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69673/69673fig5.jpg" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="Figure 5"> 
Figura 5: Imagens confocais de um rolo suíço de um estômago murino inteiro: MYH11, KIT, E-cadherina. Painéis superiores: Imagens confocais representativas costuradas de um rolo suíço gástrico de uma camundonha C57BL/6J de 8 semanas, mostrando imunocoloração para MYH11 (verde), KIT (ciano), E-cadherin (amarelo) e núcleos (azul). Todo o estômago enrolado, incluindo fundo, corpo e antrumo, é visualizado. Barras de escala: 1000 μm. Painéis inferiores: Vistas ampliadas da região delineada pela caixa branca tracejada nos painéis superiores. Linhas pontilhadas brancas delimitam o epitélio mucoso (E-cadherina) e a camada muscular (MYH11). Setas brancas indicam células intersticiais KIT+ do Cajal (ICC). Barras de escala: 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69673/69673fig5large.jpg" target="_blank">Por favor, clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

Mapeamento Espacial Aprimorado das Camadas de Músculo Gástrico de Camundongos usando uma técnica modificada do Swiss Roll

Spatial "omics" technologies provide unprecedented opportunities to study the biology and interactions of individual cells of the gastric neuromuscular ...

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As células intersticiais de Cajal (ICC) são as células marcapasso do trato gastrointestinal (TGI). Eles formam redes complexas entre as células do músculo liso e fibras pós-ganglionares neuronal para regular a contratilidade GI. Aqui, apresentamos métodos de imunofluorescência transversal e todo o monte de visualização de redes murino ICC.

Visualização das células intersticiais de Cajal Network (ICC) em ratos

A medição in vivo das contrações do músculo liso ao longo do trato gastrointestinal de animais de laboratório continua sendo uma técnica poderosa, embora subutilizada. Strain gages flexíveis de elemento duplo não estão disponíveis comercialmente e requerem fabricação. Este protocolo descreve a construção de strain gages confiáveis e baratos para implantação aguda ou crônica em roedores.

Fabricação e Implantação de miniatura de elemento duplo Medidores de tensão para medição<em&gt; In Vivo</em&gt; Gastrointestinal Contrações em roedores.

Este artigo demonstra procedimentos cirúrgicos de refluxo gastroesofágico com camundongos. Esses modelos são ferramentas úteis para pesquisa sobre mecanismos e tratamento da doença do refluxo gastroesofágico e potencialmente esôfago de Barrett e adenocarcinoma esofágico.

Modelos cirúrgicos de refluxo gastroesofágico com Ratos

O uso de um dispositivo simples para cortar e 'rolar' intestinos de camundongos para preparar rapidamente preparações de montaria inteiras é descrito.

Um dispositivo simples de preparar rapidamente inteiras Mounts do mouse Intestino

As técnicas de gravação de vídeo e mapeamento espaço-temporal (STmap) recentemente disponíveis tornam possível visualizar e quantificar os padrões de propagação e mistura da motilidade intestinal. O objetivo deste protocolo é explicar a geração e análise de STmaps usando o sistema GastroIntestinal Motility Monitoring (GIMM).

Mapeamento espacial e temporal da motilidade em<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Preparações dos intestinos

Este artigo descreve uma técnica de imagem de vídeo e mapeamento espaço-temporal de alta resolução para identificar mudanças na regulação neural da motilidade colônica em camundongos adultos. Efeitos sutis na função gastrointestinal (GI) podem ser detectados usando essa abordagem em preparações de tecidos isolados para avançar nossa compreensão da doença gastrointestinal.

Vídeo Imagem e Mapas espaço-temporais para analisar Motilidade Gastrointestinal em Ratos

A identificação precisa e localização de células epiteliais ao longo da mucosa intestinal são essenciais para definir diferentes linhagens celulares. imagiologia adequado dos tecidos intestinais é crucial para a identificação de padrões de expressão de proteínas com uma resolução máxima. Este estudo visa delinear os métodos ótimos e as condições de processamento do mouse tecidos intestinais.

Técnica Swiss-rolamento melhorado para preparo intestinal tecido por imuno-histoquímica e análises de imunofluorescência

A seguir descreve o desempenho de gastrectomia de manga vertical em camundongos. Este é um tipo de cirurgia de perda de peso que envolve a remoção de aproximadamente 70% do estômago.

Um modelo murino de gastrectomia de manga Vertical

O intestino é vital para a digestão e absorção. Cada região - duodeno, jejuno, íleo, cólon - tem funções distintas devido a estruturas celulares únicas. Estudar a fisiologia intestinal exige uma análise meticulosa do tecido. Este protocolo descreve a fixação e o processamento do tecido usando a técnica do rolo suíço, garantindo uma imunocoloração precisa por meio da preservação e orientação adequadas do tecido.

Protocolo otimizado para rolos suíços intestinais e coloração imunofluorescente de tecido embebido em parafina

Este estudo apresenta um método de imagem 3D usando tecidos intestinais de montagem total e microscopia multifóton para quantificar o muco secretado, permitindo uma análise volumétrica precisa e visualização da dinâmica do muco em resposta a estímulos como o cloreto de carbamoilcolina.

Quantificação tridimensional do muco intestinal usando imagens de tecido de montagem total

Aprenda uma técnica modificada do Swiss Roll para mapeamento espacial das camadas musculares gástricas em camundongos. Este método preserva a arquitetura tecidual e permite análise simultânea de todas as regiões do estômago com orientação espacial precisa.

Mapeamento Espacial Aprimorado das Camadas de Músculo Gástrico de Camundongos usando uma técnica modificada do Swiss Roll

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