Mapeamento Espacial Aprimorado das Camadas de Músculo Gástrico de Camundongos usando uma técnica modificada do Swiss Roll
November 25th, 2025
Esse protocolo descreve um método de imunocoloração do estômago inteiro modificado a partir da técnica "Swiss roll" originalmente desenvolvida para o intestino murino.
Nossa pesquisa foca em melhorar a forma como preparamos e analisamos o estômago leve para exames de imagem. Adaptamos a Técnica Swiss Roll, originalmente desenvolvida para o intestino murino, para que todas as principais regiões gástricas, incluindo o fundo de olho, o corpo e o antro, possam ser incorporadas juntas em uma única seção criogênica. Isso nos permite visualizar a estrutura do estômago e a composição celular lado a lado, mantendo uma orientação espacial precisa e alta qualidade de imagem.
O estômago é um órgão complexo com tecidos delicados. Pequenos erros podem danificar as células ou distorcer a disposição, o que torna a imagem de alta resolução e a coloração imunológica inconsistentes. Nossa técnica Swiss roll resolve isso mantendo todas as regiões, incluindo o duodeno e o esôfago, intactas em um único bloco criogênico, tornando os experimentos mais confiáveis e reproduzíveis.
Para começar, use tesoura para cortar ao longo do mesenterio ventral do duodeno e do estômago até o pino no corpus. Usando uma pipeta de transferência cheia de PBS, limpe qualquer alimento residual do lúmen gástrico. Estique-se suavemente a barriga aberta para obter uma orientação plana.
Prenda o papel de papel novamente plano após a fixação breve. Usando tesoura, apare a barriga ao longo do contorno tracejado para criar um formato uniforme adequado para rolar. Coloque o tecido gástrico aparado sobre papel filtrante umedecido com PBS.
Enrole o papel de papel em uma configuração de rolo suíço e prenda-o inserindo um palito pelo centro. Depois de rolar, insira uma agulha calibre 30 para garantir sua forma. Depois, dobre a agulha em um ângulo de 90 graus para estabilizar o estômago enrolado.
Fixe o tecido enrolado em paraformaldeído a 4% a quatro graus Celsius por seis horas. Depois, remova delicadamente a agulha estabilizadora. Incorpore o tecido em um composto de temperatura de corte ideal usando moldes de base descartáveis.
Depois, congele o mofo em gelo seco. Depois de totalmente congelado, armazene o mofo a menos 80 graus Celsius. O novo método permitiu a inclusão do fundo de olho, corpus, antro, uma porção do esôfago e duodeno em uma única seção murina do rolo suíço gástrico.
A coloração por hematoxilina e eosina do rolo suíço gástrico revelou uma arquitetura bem preservada no fundo do fundo, corpus, antro, esôfago e duodeno, com camadas claramente visíveis de mucosa, submucosa e muscular. A coloração imunofluorescente mostrou expressão de KIT e ANO1 em células intersticiais de Cajal e expressão de beta tubulina três em neurônios entéricos, confirmando a preservação celular no rolo suíço gástrico. A expressão de KIT também foi detectada em células paneth e goblet na mucosa gástrica, enquanto ANO1 foi altamente expressa em células epiteliais colunares fundicas.
A expressão da beta tubulina 3 foi observada em células secretoras gástricas, endócrinas e mucosas, além de neurônios entéricos. A coloração com cadeia pesada de miosina 11 confirmou a presença de células musculares lisas e miofibroblastos na mucosa gástrica, enquanto a coloração por E-cadherina mostrou células epiteliais e a coloração KIT novamente marcou células intersticiais de Cajal. A técnica suíça da estrada pode avançar na pesquisa sobre mudanças regionais específicas no tecido gástrico.
Diferentemente das abordagens tradicionais que incorporam a região separadamente, a Técnica Swiss Roll processa todas as regiões gástricas sob condições idênticas, economizando tempo e reagentes. Isso a torna uma plataforma prática e escalável para análise abrangente do tecido gástrico, tanto na saúde quanto na doença.
Visão Geral
Este protocolo descreve um método de imunomarcação de estômago inteiro modificado da técnica do "roll suíço" originalmente desenvolvido para o intestino murino. O método permite a visualização da estrutura gástrica e composição celular, mantendo a orientação espacial e qualidade da imagem.
Componentes-Chave do Estudo
Área da Ciência
- Neurociência
- Gastroenterologia
- Histologia
Fundamentos
- O estômago é um órgão complexo com tecidos delicados.
- Métodos tradicionais frequentemente levam a inconsistências em imagens e colorações.
- A Técnica do Roll Suíço permite a incorporação de múltiplas regiões gástricas juntas.
- Isso melhora a confiabilidade e reprodutibilidade dos experimentos.
Objetivo do Estudo
- Melhorar a preparação e análise de tecidos gástricos para imagem.
- Visualizar todas as principais regiões gástricas em uma única secção crio.
- Manter orientação espacial precisa durante a obtenção de imagens.
Métodos Utilizados
- Adaptação da Técnica do Roll Suíço para imunomarcação de estômago inteiro.
- Uso de tesouras e pipetas para preparação de tecidos.
- Incorporação de tecido em composto de temperatura de corte ideal.
- Coloração com hematoxilina e eosina para avaliação da arquitetura tecidual.
Principais Resultados
- Arquitetura bem preservada em várias regiões gástricas.
- Coloração imunofluorescente bem-sucedida de tipos celulares específicos.
- Expressão demonstrada de proteínas-chave em tecidos gástricos.
- Confirmação da presença de células musculares lisas e células epiteliais.
Conclusões
- A Técnica do Roll Suíço melhora a análise de tecido gástrico.
- Permite o processamento simultâneo de todas as regiões gástricas.
- Este método é prático e escalável para pesquisa em saúde e doença.
Perguntas Frequentes
Executive Industry Relevance
Consistent spatial mapping of gastric muscle layers is critical for high-confidence target validation and mechanistic de-risking in gastrointestinal drug discovery. The modified Swiss roll technique enables reproducible, side-by-side analysis of all major mouse gastric regions, supporting robust comparative studies and minimizing experimental variability. This scalable approach enhances predictive confidence for early discovery and translational research pipelines focused on gastric biology.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Enables comprehensive interrogation of region-specific cellular markers across the fundus, corpus, and antrum.
- Supports biological de-risking by preserving native tissue architecture for accurate pathway analysis.
- Facilitates functional target validation through high-quality immunofluorescence and histological readouts.
- Improves predictive confidence for prioritizing gastric targets in discovery portfolios.
Screening & Assay Development
- Provides standardized, reproducible tissue sections for downstream assay development and screening workflows.
- Ensures quantitative and qualitative consistency in immunostaining outputs across all gastric regions.
- Enables scalable preparation of validated biological samples for high-throughput analysis.
- Reduces reagent use and experimental time by processing all regions under identical conditions.
Translational & Preclinical Research
- Aligns spatial omics and biomarker studies with disease-relevant gastric regions for translational continuity.
- Supports risk-adjusted advancement decisions by minimizing tissue loss and experimental variability.
- Facilitates side-by-side comparison of physiological and pathological states in preclinical models.
- Enhances mechanistic de-risking for gastric disease research and therapeutic development.
Pipeline & Workflow Integration
This method integrates into the discovery continuum from early target validation through assay development and preclinical research, providing a reproducible platform for spatial and molecular analysis of gastric tissues.
- Discovery Biology: Supports hypothesis testing and pathway clarification by enabling region-specific marker analysis in native tissue context.
- Screening: Delivers assay-ready, reproducible sections for quantitative immunostaining and comparative studies.
- Analytics: Provides high-resolution, multiplexed readouts for robust statistical comparison of gastric regions.
- Translational Research: Maintains anatomical and molecular continuity from discovery through preclinical validation.
- Enterprise Reuse: Offers a scalable, standardized tissue preparation platform for diverse gastric research applications.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence and reduces mechanistic ambiguity in gastric target studies.
- Operational Value: Enhances standardization, reproducibility, and scalability of tissue preparation workflows.
- Strategic Value: Improves go/no-go decision quality and capital efficiency by minimizing experimental variability.
- Portfolio Impact: Enables risk-adjusted prioritization and advancement of gastric research programs.
Implementation Considerations
- Requires expertise in tissue handling, fixation, and cryosectioning for optimal results.
- Needs access to cryostat, immunofluorescence, and histological imaging infrastructure.
- Demands cross-team standardization of tissue orientation and staining protocols.
- Adaptable to various mouse models and compatible with spatial omics workflows.
- Dependent on careful handling to preserve delicate gastric architecture and minimize tissue loss.
