Name: Isolamento de Perícitos de Tecido Cortical de Camundongos Usando FACS para Sequenciamento de Células Únicas (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-01-30T14:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 50 s
Description: Aprenda a isolar perícitos do córtex cerebral de camundongos usando FACS para sequenciamento de células únicas. Este método otimizado garante alta viabilidade celular e qualidade de RNA para análise da heterogeneidade pericítica.

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<ol><li>Payne, L. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pericyte+microenvironment+during+vascular+development%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">The pericyte microenvironment during vascular development.</a> Microcirculation. 26 (8), e12554(2019).</li>
<li>Ma, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier-associated+pericytes+internalize+and+clear+aggregated+amyloid-%CE%B242+by+LRP1-dependent+apolipoprotein+E+isoform-specific+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Neurodegener%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier-associated pericytes internalize and clear aggregated amyloid-β42 by LRP1-dependent apolipoprotein E isoform-specific mechanism.</a> Mol Neurodegener. 13 (1), 57(2018).</li>
<li>Mäe, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+analysis+of+blood-brain+barrier+response+to+pericyte+loss%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Single-cell analysis of blood-brain barrier response to pericyte loss.</a> Circ Res. 128 (4), e46-e62 (2021).</li>
<li>Li, P., Fan, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pericyte+loss+in+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Pericyte loss in diseases.</a> Cells. 12 (15), 1931(2023).</li>
<li>Oliveira, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cultured+brain+pericytes+adopt+an+immature+phenotype+and+require+endothelial+cells+for+expression+of+canonical+markers+and+ECM+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Cultured brain pericytes adopt an immature phenotype and require endothelial cells for expression of canonical markers and ECM genes.</a> Front Cell Neurosci. 17, 1165887(2023).</li>
<li>Yao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Challenges+in+pericyte+research%3Apericyte-specific+and+subtype-specific+markers%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Stroke+Res%22%5BJournal%5D)">Challenges in pericyte research:pericyte-specific and subtype-specific markers.</a> Transl Stroke Res. 13 (6), 863-865 (2022).</li>
<li>Vanlandewijck, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+molecular+atlas+of+cell+types+and+zonation+in+the+brain+vasculature%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A molecular atlas of cell types and zonation in the brain vasculature.</a> Nature. 554 (7693), 475-480 (2018).</li>
<li>Alliot, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pericytes+and+periendothelial+cells+of+brain+parenchyma+vessels+co-express+aminopeptidase+N%2C+aminopeptidase+A%2C+and+nestin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Pericytes and periendothelial cells of brain parenchyma vessels co-express aminopeptidase N, aminopeptidase A, and nestin.</a> J Neurosci Res. 58 (3), 367-378 (1999).</li>
<li>Huang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation%2C+culture%2C+and+characterization+of+primary+endothelial+cells+and+pericytes+from+mouse+sciatic+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Isolation, culture, and characterization of primary endothelial cells and pericytes from mouse sciatic nerve.</a> J Neurosci Methods. 416, 110366(2025).</li>
<li>Armulik, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pericytes+regulate+the+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Pericytes regulate the blood-brain barrier.</a> Nature. 468 (7323), 557-561 (2010).</li>
<li>Crouch, E. E., Doetsch, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FACS+isolation+of+endothelial+cells+and+pericytes+from+mouse+brain+microregions%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">FACS isolation of endothelial cells and pericytes from mouse brain microregions.</a> Nat Protoc. 13 (4), 738-751 (2018).</li>
<li>Eichhorn, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+tissue+factor+and+platelet%2Fleukocyte+markers+on+extracellular+vesicles+reflect+platelet-leukocyte+interaction+in+severe+COVID-19%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Expression of tissue factor and platelet/leukocyte markers on extracellular vesicles reflect platelet-leukocyte interaction in severe COVID-19.</a> Int J Mol Sci. 24 (23), 16886(2023).</li>
<li>Smyth, L. C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Markers+for+human+brain+pericytes+and+smooth+muscle+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Chem+Neuroanat%22%5BJournal%5D)">Markers for human brain pericytes and smooth muscle cells.</a> J Chem Neuroanat. 92, 48-60 (2018).</li>
<li>Wu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epitranscriptomic+mechanisms+of+N6-methyladenosine+methylation+regulating+mammalian+hypertension+development+by+determined+spontaneously+hypertensive+rats+pericytes%5BTitle%5D)+AND+%22Epigenomics%22%5BJournal%5D)">Epitranscriptomic mechanisms of N6-methyladenosine methylation regulating mammalian hypertension development by determined spontaneously hypertensive rats pericytes.</a> Epigenomics. 11 (12), 1359-1370 (2019).</li>
<li>Mirzadeh, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+subventricular+zone+en-face%3Awholemount+staining+and+ependymal+flow%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">The subventricular zone en-face:wholemount staining and ependymal flow.</a> J. Vis. Exp. (39), e1938(2010).</li>
<li>Zappaterra, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+cerebrospinal+fluid+from+rodent+embryos+for+use+with+dissected+cerebral+cortical+explants%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation of cerebrospinal fluid from rodent embryos for use with dissected cerebral cortical explants.</a> J. Vis. Exp. (73), e50333(2013).</li>
<li>Zou, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single-cell+transcriptomic+atlas+of+human+skin+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">A single-cell transcriptomic atlas of human skin aging.</a> Dev Cell. 56 (3), 383-397.e8 (2021).</li>
<li>Bahl, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+deep+learning+to+quantify+neuronal+activation+from+single-cell+and+spatial+transcriptomic+data%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Using deep learning to quantify neuronal activation from single-cell and spatial transcriptomic data.</a> Nat Commun. 15 (1), 779(2024).</li>
<li>Klein, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Droplet+barcoding+for+single-cell+transcriptomics+applied+to+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Droplet barcoding for single-cell transcriptomics applied to embryonic stem cells.</a> Cell. 161 (5), 1187-1201 (2015).</li>
<li>Zheng, G. X. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Massively+parallel+digital+transcriptional+profiling+of+single+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Massively parallel digital transcriptional profiling of single cells.</a> Nat Commun. 8 (1), 14049(2017).</li>
<li>Song, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptomic+comparison+of+human+and+mouse+brain+microvessels%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Transcriptomic comparison of human and mouse brain microvessels.</a> Sci Rep. 10 (1), 12358(2020).</li>
<li>He, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+the+brain+mural+cell+transcriptome%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Analysis of the brain mural cell transcriptome.</a> Sci Rep. 6, 35108(2016).</li>
<li>Stebbins, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+pluripotent+stem+cell-derived+brain+pericyte-like+cells+induce+blood-brain+barrier+properties%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Adv%22%5BJournal%5D)">Human pluripotent stem cell-derived brain pericyte-like cells induce blood-brain barrier properties.</a> Sci Adv. 5 (3), eaau7375(2019).</li>
<li>Crouch, E. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regional+and+stage-specific+effects+of+prospectively+purified+vascular+cells+on+the+adult+V-SVZ+neural+stem+cell+lineage%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Regional and stage-specific effects of prospectively purified vascular cells on the adult V-SVZ neural stem cell lineage.</a> J Neurosci. 35 (11), 4528-4539 (2015).</li>
<li>Ruan, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Screening+and+identification+of+muscle+pericyte+selective+markers%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Screening and identification of muscle pericyte selective markers.</a> Sci Rep. 15 (1), 28874(2025).</li>
<li>Dias, D. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pericyte-derived+fibrotic+scarring+is+conserved+across+diverse+central+nervous+system+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Pericyte-derived fibrotic scarring is conserved across diverse central nervous system lesions.</a> Nat Commun. 12 (1), 5501(2021).</li>
<li>Thalgott, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-invasive+characterization+of+pericyte+dysfunction+in+mouse+brain+using+functional+ultrasound+localization+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biomed+Eng%22%5BJournal%5D)">Non-invasive characterization of pericyte dysfunction in mouse brain using functional ultrasound localization microscopy.</a> Nat Biomed Eng. , (2025).</li>
<li>Grant, R. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organizational+hierarchy+and+structural+diversity+of+microvascular+pericytes+in+adult+mouse+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Organizational hierarchy and structural diversity of microvascular pericytes in adult mouse cortex.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 39 (3), 411-425 (2019).</li>
<li>O'flanagan, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissociation+of+solid+tumor+tissues+with+cold+active+protease+for+single-cell+RNA-seq+minimizes+conserved+collagenase-associated+stress+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biol%22%5BJournal%5D)">Dissociation of solid tumor tissues with cold active protease for single-cell RNA-seq minimizes conserved collagenase-associated stress responses.</a> Genome Biol. 20 (1), 210(2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td><td>Gibicol</td><td>A5669701</td><td>Aliquotar e armazenar a -20&deg;C; pode ser armazenado a 4&deg;C por até 1 semana após o descongelamento</td></tr><tr><td>Phosphate Buffered Saline(10&times;PBS, pH 7,4)</td><td>Life Technologies</td><td>70011-044</td><td>Diluir antes do uso para lavagem celular</td></tr><tr><td>D-(+)-Glucose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7021-1KG</td><td>Para preparar buffer energético celular</td></tr><tr><td>Bovine Serum Albumin (BSA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A1933-25g</td><td>Protege as células e previne a adesão</td></tr><tr><td>Dulbecco's&nbsp; Phosphate Buffered Saline (DPBS,1&times;)</td><td>Gibco</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>Hanks' Balanced Salt Solution (HBSS,1&times;)</td><td>Life Technologies</td><td>14175-095</td><td>Para lavagem celular e ressuspensão</td></tr><tr><td>UltraPure DNase/RNase-Free Distilled Water</td><td>Life Technologies</td><td>10977-015</td><td>Para preparar sistemas de reação livres de nuclease</td></tr><tr><td>Collagenase/Dispase</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>11097113001-100mg</td><td>Para digestão de tecido e dissociação celular; aliquotar e armazenar a -20&deg;C</td></tr><tr><td>DNaseI(RNase-Free)</td><td>TIANGEN</td><td>RT411-1500U</td><td>Previne agregação de DNA; aliquotar e armazenar a -20&deg;C</td></tr><tr><td>Percoll</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1644-100ML</td><td>Para separação celular; armazenar a 4&deg;C</td></tr><tr><td>FITC Rat Anti-Mouse CD13</td><td>BD Biosciences</td><td>558744</td><td>Conjugado fluorescente; armazenar protegido da luz a 4&deg;C por até 1 mês</td></tr><tr><td>APC Rat Anti-Mouse CD31</td><td>BD Biosciences</td><td>551262</td><td>Armazenar protegido da luz a 4&deg;C por vários meses</td></tr><tr><td>PE Rat Anti-Mouse CD41</td><td>BD Biosciences</td><td>558040</td><td>Armazenar protegido da luz a 4&deg;C por vários meses</td></tr><tr><td>PE Rat Anti-Mouse CD45</td><td>BD Biosciences</td><td>553081</td><td>Armazenar protegido da luz a 4&deg;C por vários meses</td></tr><tr><td>FITC Rat IgG1, &kappa; Isotype Control</td><td>BD Biosciences</td><td>552916</td><td>Controle de fluorescência; armazenar protegido da luz a 4&deg;C</td></tr><tr><td>APC Rat IgG2a, &kappa; Isotype Control</td><td>BD Biosciences</td><td>553932</td><td>Armazenar protegido da luz a 4&deg;C por vários meses</td></tr><tr><td>PE Rat IgG2b, &kappa; Isotype Control</td><td>BD Biosciences</td><td>553989</td><td>Armazenar protegido da luz a 4&deg;C por vários meses</td></tr><tr><td>RNase AWAY Decontamination Reagent</td><td>Ambion</td><td>10328011</td><td>Para eliminar contaminação por RNase</td></tr><tr><td>Purified Rat Anti-Mouse CD16/CD32 (Mouse BD Fc Block)</td><td>BD Pharmingen</td><td>553141</td><td>Prevenir ligação de anticorpos não específicos</td></tr><tr><td>7-Aminoactinomycin D (7-AAD)</td><td>BD Pharmingen</td><td>559925</td><td>Para exclusão de células mortas.</td></tr><tr><td>2,2,2-Tribromoethanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T48402-25g</td><td>Para a preparação da Solução de Tribromoetanol 1,25% (p/v)</td></tr><tr><td>2-Methyl-2-butanol</td><td>Psaitong</td><td>M20008-500mL</td><td>Para a preparação da Solução de Tribromoetanol 1,25% (p/v)</td></tr><tr><td>C57BL/6 mouse</td><td>Jiangsu Huachuang Xinnuo Pharmaceutical Technology Co., Ltd.</td><td>SYXK (Su) 2020-0041</td><td></td></tr><tr><td>50 mL centrifuge tube</td><td>Corning</td><td>430291</td><td></td></tr><tr><td>15 mL centrifuge tube</td><td>Corning</td><td>430791</td><td></td></tr><tr><td>cell cluture dish 100mm&times;20mm</td><td>Corning</td><td>430167</td><td></td></tr><tr><td>Cell Ranger</td><td></td><td>3.1.0/4.0.0</td><td>Software de Análise de Dados de Sequenciamento de Célula Única</td></tr><tr><td>Loupe Cell Browser</td><td></td><td>4.1</td><td>Navegador de Células</td></tr><tr><td>STAR</td><td></td><td>2.5.1b</td><td>Alinhamento de RNA</td></tr><tr><td>irlbpy</td><td></td><td>-</td><td>Análise de Componentes Principais</td></tr><tr><td>tsne</td><td></td><td>0.15</td><td>Barnes-Hut t-SNE (t-Distributed Stochastic Neighbor Embedding) Analysis</td></tr><tr><td>k-means</td><td></td><td>0.17</td><td>K-Means Clustering</td></tr><tr><td>graph-based clustering</td><td></td><td>0.17</td><td>Clustering Baseado em Gráfico</td></tr><tr><td>FastQC</td><td></td><td>v0.11.2</td><td>Controle de Qualidade de Dados (QC)</td></tr></tbody></table>

isolamento de perícitos de tecido cortical de camundongos usando facs para sequenciamento de células Únicas

Isolation of Pericytes from Mouse Cortical Tissue Using FACS for Single-cell Sequencing

Isolamento de Perícitos de Tecido Cortical de Camundongos Usando FACS para Sequenciamento de Células Únicas

Pericytes, as a core component of the neurovascular unit, play a vital role in maintaining the integrity of the blood-brain barrier and regulating ...

isolation-pericytes-from-mouse-cortical-tissue-using-facs-for-single

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Bioquímica

Este vídeo demonstra um método para isolar pericitos cerebrais de um cérebro de camundongo. As células isoladas são cultivadas em meios específicos de pericitos para promover a proliferação de pericitos.

Isolando e cultivando pericitos cerebrais de camundongos

O comportamento dos fibroblastos está subjacente a um espectro de entidades clínicas, mas permanecem mal caracterizados, em grande parte devido à sua heterogeneidade inerente. A pesquisa tradicional de fibroblastos depende da manipulação in vitro, mascarando o comportamento dos fibroblastos in vivo. Descrevemos um protocolo baseado em FACS para o isolamento de fibroblastos de pele de camundongo que não requer cultura de células.

Isolamento de fibroblastos de murino Dérmica por FACS

tecido cardíaco humano abriga populações de células precursoras perivasculares multipotentes que podem ser adequados para a regeneração do miocárdio. A técnica aqui descrita permite o isolamento e purificação simultânea de duas populações de células estromais multipotentes associados com os vasos nativos de sangue, ie CD146 + CD34 - pericitos e células CD34 + CD146 - células adventícias, a partir do miocárdio humano.

Isolamento de perivascular Multipotentes populações de células precursoras a partir de tecido cardíaco humano

Este trabalho descreve um protocolo baseado em FACS que permite o isolamento fácil e simultâneo de pericitos tipo I e tipo II dos músculos esqueléticos.

Isolamento de Pericitos Tipo I e Tipo II de Músculos Esqueléticos de Rato

Nós otimizamos um protocolo para isolar e purificar pericitos cardíacos murinos para pesquisa básica e investigação de sua biologia e potencial terapêutico.

Isolamento e purificação de Pericytes cardíacos murinos

Nós fornecemos um protocolo para o isolamento da microglia de diferentes regiões dissecadas de um hemisfério cerebral de camundongo adulto, seguido de preparação de biblioteca semi-automatizada para sequenciamento profundo de RNA unicelular de transcrições completas. Este método ajudará a elucidar a heterogeneidade funcional da microglia na saúde e na doença.

Isolamento da Microglia específica da Região de um hemisfério cerebral de camundongo adulto para sequenciamento profundo de RNA unicelular

Apresentamos um protocolo para a extração de pericitos cerebrais murina. Baseado em uma extração pericyte orientada para enriquecimento livre de antibióticos, este protocolo é uma ferramenta valiosa para estudos in vitro que fornecem alta pureza e alto rendimento, diminuindo assim o número de animais experimentais usados.

Um método de alta saída para isolar pericites cerebrais do rato

A obtenção de uma população pura de fibroblastos é crucial para estudar seu papel na reparação de feridas e fibrose. Descrito aqui é um método detalhado para isolar fibroblastos e miofibroblastos de corações de camundongos ilesos e feridos seguido susceptência de sua pureza e funcionalidade por imunofluorescência, RTPCR, triagem celular assistida por fluorescência, e contração de gel de colágeno.

Isolamento e Caracterização de Fibroblastos Cardíacos Adultos e Miofibroblastos

Pericytes capilares cerebrais são atores essenciais na regulação das propriedades da barreira hemencefálica e do fluxo sanguíneo. Este protocolo descreve como pericytos capilares cerebrais podem ser isolados, cultivados, caracterizados em relação ao tipo celular e aplicados para investigações de sinalização intracelular de cálcio com sondas fluorescentes.

Cultura de Pericytes Capilares Cerebrais para Medições citosóicas de cálcio e estudos de imagem de cálcio

Apresentamos um método para isolar células e núcleos endoteliais do lúmen de artérias carótidas de camundongos expostas a condições de fluxo estáveis ou perturbadas para a realização de experimentos ômicos unicelulares.

Isolamento de células endoteliais do lúmen de artérias carótidas de camundongos para experimentos multi-ômicos unicelulares

Este protocolo descreve um método para o isolamento de células endoteliais da retina pós-natais murinas otimizado para o rendimento, pureza e viabilidade celular. Essas células são adequadas para abordagens de sequenciamento de próxima geração.

Isolamento de células endoteliais da retina murinas para sequenciamento de próxima geração

Aprenda a isolar perícitos do córtex cerebral de camundongos usando FACS para sequenciamento de células únicas. Este método otimizado garante alta viabilidade celular e qualidade de RNA para análise da heterogeneidade pericítica.

Isolamento de Perícitos de Tecido Cortical de Camundongos Usando FACS para Sequenciamento de Células Únicas

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