Name: Ensaio de Isolamento de Fibra Única para Avaliação do Comportamento da Miofibra Oxidativa (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-03-31T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 1 s
Description: Aprenda a isolar fibras musculares únicas intactas do músculo sóleo murino usando colagenase otimizada. Este método minimiza perdas de fibras e preserva viabilidade para imunomarcação e expansão de células satélite.

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<ol><li>Janssen, I., Heymsfield, S. B., Wang, Z. M., Ross, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skeletal+muscle+mass+and+distribution+in+468+men+and+women+aged+18%E2%80%9388+yr%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Skeletal muscle mass and distribution in 468 men and women aged 18–88 yr.</a> J Appl Physiol. 89 (1), 81-88 (2000).</li>
<li>Mauro, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Satellite+cell+of+skeletal+muscle+fibers%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biophys+Biochem+Cytol%22%5BJournal%5D)">Satellite cell of skeletal muscle fibers.</a> J Biophys Biochem Cytol. 9 (2), 493-495 (1961).</li>
<li>Zammit, P. S., Partridge, T. A., Yablonka-Reuveni, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+skeletal+muscle+satellite+cell%3A+The+stem+cell+that+came+in+from+the+cold%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">The skeletal muscle satellite cell: The stem cell that came in from the cold.</a> J Histochem Cytochem. 54 (11), 1177-1191 (2006).</li>
<li>Zammit, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pax7+and+myogenic+progression+in+skeletal+muscle+satellite+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Pax7 and myogenic progression in skeletal muscle satellite cells.</a> J Cell Sci. 119 (9), 1824-1832 (2006).</li>
<li>Seale, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pax7+is+required+for+the+specification+of+myogenic+satellite+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Pax7 is required for the specification of myogenic satellite cells.</a> Cell. 102 (6), 777-786 (2000).</li>
<li>Günther, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myf5-positive+satellite+cells+contribute+to+Pax7-dependent+long-term+maintenance+of+adult+muscle+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Myf5-positive satellite cells contribute to Pax7-dependent long-term maintenance of adult muscle stem cells.</a> Cell Stem Cell. 13 (5), 590-601 (2013).</li>
<li>Gnocchi, V. F., White, R. B., Ono, Y., Ellis, J. A., Zammit, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Further+characterisation+of+the+molecular+signature+of+quiescent+and+activated+mouse+muscle+satellite+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Further characterisation of the molecular signature of quiescent and activated mouse muscle satellite cells.</a> PLoS One. 4 (4), e5205(2009).</li>
<li>Halevy, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pattern+of+Pax7+expression+during+myogenesis+in+the+posthatch+chicken+establishes+a+model+for+satellite+cell+differentiation+and+renewal%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Pattern of Pax7 expression during myogenesis in the posthatch chicken establishes a model for satellite cell differentiation and renewal.</a> Dev Dyn. 231 (3), 489-502 (2004).</li>
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<li>Zammit, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((All+muscle+satellite+cells+are+equal%2C+but+are+some+more+equal+than+others%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">All muscle satellite cells are equal, but are some more equal than others.</a> J Cell Sci. 121 (18), 2975-2982 (2008).</li>
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<li>Ahmetov, I. I., Vinogradova, O. L., Williams, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+polymorphisms+and+fiber-type+composition+of+human+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Sport+Nutr+Exerc+Metab%22%5BJournal%5D)">Gene polymorphisms and fiber-type composition of human skeletal muscle.</a> Int J Sport Nutr Exerc Metab. 22 (4), 292-303 (2012).</li>
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<li>Fujita, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+lipid+metabolism+and+capillary+density+of+the+skeletal+muscle+following+low-intensity+exercise+training+in+a+rat+model+of+obesity+with+hyperinsulinemia%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Changes in lipid metabolism and capillary density of the skeletal muscle following low-intensity exercise training in a rat model of obesity with hyperinsulinemia.</a> PLoS One. 13 (5), e0196895(2018).</li>
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<li>Talbot, J., Maves, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skeletal+muscle+fiber+type%3A+Using+insights+from+muscle+developmental+biology+to+dissect+targets+for+susceptibility+and+resistance+to+muscle+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Wiley+Interdiscip+Rev+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Skeletal muscle fiber type: Using insights from muscle developmental biology to dissect targets for susceptibility and resistance to muscle disease.</a> Wiley Interdiscip Rev Dev Biol. 5 (4), 518-534 (2016).</li>
<li>Celegato, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parallel+protein+and+transcript+profiles+of+FSHD+patient+muscles+correlate+to+the+D4Z4+arrangement+and+reveal+a+common+impairment+of+slow+to+fast+fibre+differentiation+and+a+general+deregulation+of+MyoD-dependent+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics%22%5BJournal%5D)">Parallel protein and transcript profiles of FSHD patient muscles correlate to the D4Z4 arrangement and reveal a common impairment of slow to fast fibre differentiation and a general deregulation of MyoD-dependent genes.</a> Proteomics. 6 (19), 5303-5321 (2006).</li>
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<li>Pedemonte, M., Sandri, C., Schiaffino, S., Minetti, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+decrease+of+IIx+myosin+heavy+chain+transcripts+in+Duchenne+muscular+dystrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Early decrease of IIx myosin heavy chain transcripts in Duchenne muscular dystrophy.</a> Biochem Biophys Res Commun. 255 (2), 466-469 (1999).</li>
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<li>Blackburn, D. M., Lazure, F., Soleimani, V. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA+sequencing+of+single+myofibers+from+Mus+musculus%5BTitle%5D)+AND+%22Bio+Protoc%22%5BJournal%5D)">RNA sequencing of single myofibers from Mus musculus.</a> Bio Protoc. 10 (4), e3525(2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Accutase</td><td>Innovative Cell Technologies</td><td>AT104</td><td></td></tr><tr><td>Basic fibroblast growth factor</td><td>Peprotech</td><td>450-33</td><td></td></tr><tr><td>Bovine serum albumin</td><td>Sigma</td><td>A9418</td><td></td></tr><tr><td>Butorphanol tartrate</td><td>Meiji Yakuka Co., Ltd</td><td>711-12</td><td>Nome do produto: Vetorphale injeção</td></tr><tr><td>Chicken Embryo Extract</td><td>US Biological</td><td>C3999</td><td></td></tr><tr><td>Collagenase type I</td><td>Worthington</td><td>M9B2717</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9542</td><td></td></tr><tr><td>Fetal bovine serum</td><td>Gibco</td><td>10437-028</td><td></td></tr><tr><td>Glucose-free DMEM</td><td>Gibco</td><td>A14430-01</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX</td><td>Gibco</td><td>10569</td><td></td></tr><tr><td>High-glucose DMEM+GlutaMAX</td><td>Gibco</td><td>10569-010</td><td></td></tr><tr><td>Horse serum</td><td>Life technology</td><td>16050-130</td><td></td></tr><tr><td>Low-protein binding filter</td><td>Millipore</td><td>SLGVR33RB</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Corning</td><td>354230</td><td></td></tr><tr><td>Medetomidine hydrochloride</td><td>Kyoritsu Seiyaku Co., Ltd</td><td>8816</td><td>Nome do produto: Dorbene Injeção</td></tr><tr><td>Midazolam</td><td>Maruishi Pharmaceutical Co., Ltd</td><td>4987211762100</td><td>Nome do produto: Dormicum Injeção</td></tr><tr><td>Penicillin-streptomycin-amphotericin B suspension</td><td>Wako</td><td>161-23181</td><td></td></tr><tr><td>Ponceau S stain solution</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>24-3875-5</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA (0,25%), phenol red</td><td>Gibco</td><td>25200056</td><td></td></tr><tr><td>Equipamento</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Centrifuge tubes (25 mL)</td><td>IWAKI</td><td>2362-025</td><td></td></tr><tr><td>Fluorescence microscope</td><td>Keyence</td><td>BZ-X810</td><td></td></tr><tr><td>Pasteur pipettes</td><td>IWAKI</td><td>5 3/4 IK-PAS-5P</td><td></td></tr><tr><td>Stereomicroscope</td><td>Leica</td><td>M165C</td><td></td></tr><tr><td>Sterilin dishes (100-mm)</td><td>Thermo Scientific</td><td>3020-100</td><td>Referido como Petri dish no manuscrito</td></tr><tr><td>Anticorpos para imunomarcação</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Goat anti-mouse (H+L), Alexa Fluor 488</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-32723</td><td>1:400</td></tr><tr><td>Goat anti-rabbit (H+L), Alexa Fluor 594</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-11012</td><td>1:400</td></tr><tr><td>Mouse Anti-Myosin Heavy Chain</td><td>R&amp;D Systems</td><td>MAB4470</td><td>1:400</td></tr><tr><td>Mouse Anti-Pax7</td><td>DSHB</td><td>AB-528428</td><td>1:100</td></tr><tr><td>Rabbit Anti-MyoD</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-760</td><td>1:100</td></tr><tr><td>Anticorpos para imunoblotting</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>HRP-conjugated Anti-mouse IgG</td><td>Cytiva</td><td>NA931</td><td>1:1000/ peroxidase de rábano</td></tr><tr><td>HRP-conjugated Anti-Rabbit IgG</td><td>Cytiva</td><td>NA934</td><td>1:1000/ peroxidase de rábano</td></tr><tr><td>Mouse Anti-MyHC I</td><td>Sigma</td><td>M8421</td><td>1:1000/ Myosin Heavy Chain I</td></tr><tr><td>Mouse Anti-MyHC II</td><td>Sigma</td><td>M4276</td><td>1:1000/ Myosin Heavy Chain II</td></tr><tr><td>Mouse Anti-PGC-1&alpha;</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-517380</td><td>1:1000/ Pparg coactivator 1 alpha</td></tr><tr><td>Mouse Anti-&alpha;-tubulin</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>#3873</td><td>1:1000/ Alpha tubulin</td></tr><tr><td>Rabbit Anti-COXIV</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>#4850</td><td>1:1000/ Cytochrome c oxidase IV</td></tr><tr><td>Rabbit Anti-GAPDH</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>#2218</td><td>1:10000/ Glyceraldehyde-3-Phosphate Dehydrogenase</td></tr><tr><td>Rabbit Anti-GLUT4</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>#2213</td><td>1:1000/ Glucose Transporter 4</td></tr><tr><td>Rabbit Anti-&beta;-actin</td><td>Proteintech</td><td>20536-1-AP</td><td>1:2000/ Nonmuscle Beta-actin</td></tr></tbody></table>

ensaio de isolamento de fibra Única para avaliação do comportamento da miofibra oxidativa

Single Fiber Isolation Assay for the Assessment of Oxidative Myofiber Behavior

Nossa técnica demonstra que fibras isoladas dos músculos sóleo (SOL) e extensor do dedo longo (EDL) podem ser imunomarcadas de forma eficiente contra Pax7 (Figura 3B). Essas fibras isoladas podem ser mantidas em meio de cultura flutuante (composto por DMEM + GlutaMAX com 10% de soro de cavalo, 1% AB, 0,5% CEE) por 3 dias, seguido por imunomarcação (Figura 3B). Não é recomendado manter fibras flutuantes por mais de 4 dias. Sob as condições descritas de fibras flutuantes, as miofibras tendem a se agregar após esse período, comprometendo a análise subsequente de imunomarcagem.
A técnica apresentada pode ainda ser usada para imunoblotting em todo o programa miogênico (Figura 3C). De fato, mioblastos derivados de SOL e EDL foram placados em placas de 24 poços com aproximadamente 70% de confluência. As células foram mantidas no meio de crescimento por 1 dia (mioblastos) ou induzidas a se diferenciar por dois ou quatro dias (miotubos de formação precoce e diferenciados, respectivamente). Cinco μg de proteína foram carregados para análise de imunoblot.
A expressão do MyHC I foi quase especificamente expressa em fibras musculares derivadas do SOL, com expressão mínima nos miotubos e desprezível nos mioblastos (Figura 3C). MyHC II foi expresso tanto nas fibras musculares SOL quanto EDL. Essa expressão reflete o SOL, composto principalmente por tipos I e IIa, enquanto a EDL é composta principalmente por fibras IIx e IIb. Mioblastos não expressaram MyHC II, mas sua expressão aumentou progressivamente durante a diferenciação. As proteínas relacionadas à oxidação PGC-1α e COXIV demonstraram a maior expressão esperada em fibras derivadas de SOL. Além disso, uma expressão mais alta de GLUT4 foi detectada em fibras isoladas de SOL em comparação com fibras de EDL. Um problema que biólogos de músculos esqueléticos podem enfrentar é que proteínas de manutenção e controles de carga amplamente utilizados, como α-tubulina, β-actina, GAPDH e colorações de proteína total, incluindo Ponceau S, não permanecem estáveis em mioblastos, miotubos e fibras musculares isoladas, cada uma apresentando variabilidade distinta. A intensidade do sinal da α-tubulina e da β-actina foi maior nos miotubos, enquanto a coloração de Ponceau S foi relativamente fraca nos mioblastos. Em contraste, o GAPDH apresentou expressão mais forte nas fibras musculares da EDL. No entanto, dependendo do propósito experimental, uma dessas proteínas de manutenção pode ainda ser aplicável; alternativamente, fatores de normalização como a proteína de choque térmico 70 (HSP70) podem ser explorados.
<img alt="Figura 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/70637/70637fig1.jpg" data-altupdatedat="1784005267000" data-alt="Figure 1"> 
Figura 1. Dissecação do músculo sóleo. (A) Equipamentos necessários para dissecação. 1: microtesoura, 2: pinças finas, 3: tesouras dissecadoras, e 4: pinos de dissecação. (B) O tendão de PLA foi cortado dos feixes de tendões GAS e SOL (seta amarela). O tendão distal de PLA (seta branca) foi levantado com pinças. (C) Um pino de dissecação foi inserido no espaço entre o tendão proximal do SOL (seta vermelha) e o GAS (seta verde). (D) O SOL foi separado do GAS usando um pino de dissecação. (E) Os feixes de tendões GAS e SOL foram então cortados no lado do GAS. (F) O tendão proximal do SOL foi então cortado com microtesoura. (G) Feixes de tendões distais adicionais foram removidos. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/70637/70637fig1large.jpg" target="_blank">Por favor, clique aqui para ver uma versão ampliada desta figura.</a>
<img alt="Figura 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/70637/70637fig2.jpg" data-altupdatedat="1784005267000" data-alt="Figure 2"> 
Figura 2. Isolamento das fibras do sóleo. (A) Equipamentos necessários para isolamento. 1: pipetas de diâmetro estreito e 2: carabinas Pasteur de grande diâmetro. (B) Estereoscópio usado para isolamento. (C) O sóleo digerido por colagênese foi transferido para o DMEM com 1% AB. (D) As fibras do sóleo se dissociaram do músculo após as primeiras 10 sessões de enxágue. (E) Fibras simples transferidas para o segundo prato. (F) Imagem mostrando fibras limpas removidas de detritos e fibras encolhidas. (G) Fibras simples sem detritos transferidas para o terceiro prato. (H) Fibras simples intactas claramente visíveis. Barra de escala = 10 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/70637/70637fig2large.jpg" target="_blank">Por favor, clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figura 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/70637/70637fig3.jpg" data-altupdatedat="1784005267000" data-alt="Figure 3"> 
Figura 3. Expansão da cultura celular e análise de amostras derivadas de EDL e SOL. (R) Após 6 dias após o isolamento, as amostras cultivadas com meio de proliferação mostram uma cultura de mioblastos puros obtida a partir de fibras isoladas do sóleo. Barra de escala = 100 μm. (B) SOL e fibras únicas derivadas de EDL, imediatamente ou 3 dias após o isolamento, mostram células satélite imunomarcadas para Pax7 (verde). A ausência de MyoD (vermelho) confirma que as células satélite ainda não se comprometeram com a ativação miogênica. As fibras foram contra-tingidas com DAPI (azul). As células foram posteriormente observadas por meio de um microscópio de fluorescência. Barra de balança = 20 μm. (C) 5 μg de proteína foi usada para imunoblotting de mioblastos, miotubos e amostras derivadas de miofibras. Painéis de imunobloting mostram a expressão de MyHC I, MyHC II, PGC-1α, COX IV, GLUT4, α-tubulina, β-actina e GAPDH foram usados como alvos de limpeza/normalização. A coloração Ponceau S foi usada como controle total de carga proteica. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/70637/70637fig3large.jpg" target="_blank">Por favor, clique aqui para ver uma versão ampliada desta figura.</a>

Ensaio de Isolamento de Fibra Única para Avaliação do Comportamento da Miofibra Oxidativa

Skeletal muscle is composed of multinucleated myofibers whose integrity and function are essential for movement and overall health. In neuromuscular ...

single-fiber-isolation-assay-for-assessment-oxidative-myofiber

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Saponina permeabilizadas preparação de fibras em conjunto com a análise de fosforilação oxidativa fornece respirométrico de avaliação integrada da função mitocondrial. Respiração mitocondrial em estados fisiológicos e patológicos pode refletir várias influências regulamentares, incluindo as interações mitocondrial, morfologia e bioquímica.

Avaliação fosforilação oxidativa respirométrico em saponina-fibras cardíacas permeabilizadas

Este vídeo demonstra o isolamento de miofibras únicas do músculo extensor longo dos dedos murino (EDL) colhido. As miofibras isoladas podem ser cultivadas para estudar a atividade das células-tronco musculares associadas à miofibra.

Isolamento de miofibras: uma técnica para obter miofibras únicas do músculo extensor longo dos dedos (EDL) de camundongo colhido

Isolamento e cultivo de fibras musculares é o padrão...

Isolamento e Cultura de miofibras individuais e suas células satélites do músculo esquelético

Neste protocolo é descrito um método de cultivo in vitro e análise funcional para células-tronco musculares, que preserva a maioria de suas interações com seu nicho endógeno.

Ensaio de cultura de myofibra única para a avaliação da funcionalidade de células-tronco musculares adultas Ex Vivo

A capacidade de detectar com precisão componentes de junção neuromuscular é crucial na avaliação de modificações em sua arquitetura devido a processos patológicos ou de desenvolvimento. Aqui apresentamos uma descrição completa de um método simples para obter imagens de alta qualidade de junções neuromusculares de montagem inteira que podem ser usadas para realizar medições quantitativas.

Dissecção de fibras musculares esqueléticas únicas para análises imunofluorescentes e morfométricas de junções neuromusculares de monte inteiro

Aqui, descrevemos um método detalhado para o isolamento das mitocôndrias do músculo esquelético do camundongo e a análise subsequente da respiração pela Taxa de Consumo de Oxigênio (OCR) usando assins respirométricos à base de microplacas. Este gasoduto pode ser aplicado para estudar os efeitos de múltiplas intervenções ambientais ou genéticas no metabolismo mitocondrial.

Isolamento das Mitocôndrias do Músculo Esquelético do Rato para Ensaios Respirométricos

Os cavalos têm uma excepcional capacidade de exercício aeróbio, tornando o músculo esquelético equino um tecido importante tanto para o estudo da fisiologia do exercício equino quanto para a fisiologia mitocondrial de mamíferos. Este artigo descreve técnicas para a avaliação abrangente da função mitocondrial no músculo esquelético equino.

Fluor-respirometria de alta resolução do músculo esquelético equino

Aqui, apresentamos uma compilação de ensaios para medir diretamente a função mitocondrial em células de mamíferos, independentemente de sua capacidade de consumir oxigênio molecular.

Ensaios Independentes de Oxigênio para Medir a Função Mitocondrial em Mamíferos

Este protocolo demonstra o isolamento de fibra única do músculo esquelético humano liofilizado e a classificação do tipo de fibra de acordo com a isoforma da cadeia pesada da miosina (MHC) usando a técnica de dot blotting. Amostras de fibras MHC I e II identificadas podem então ser analisadas para diferenças específicas do tipo de fibra na expressão de proteínas usando western blotting.

Identificação do Tipo de Fibra do Músculo Esquelético Humano

Descrevemos um protocolo para obtenção de fibras enzimaticamente dissociadas de diferentes comprimentos e tipos de seis músculos de camundongos adultos: três deles já descritos (flexor curto dos dedos, extensor longo dos dedos, sóleo) e três deles dissociados com sucesso pela primeira vez (extensor longo do hálux, fibular longo, fibular dos dígitos).

Fibras musculares esqueléticas curtas, intermediárias e longas intactas obtidas por dissociação enzimática de seis músculos dos membros posteriores de camundongos: além do flexor curto dos dedos

Aqui, descrevemos um método abrangente para medir a fosforilação oxidativa mitocondrial em fibras musculares esqueléticas permeabilizadas frescas de músculos humanos ou de camundongos. Este método permite a quantificação em tempo real da respiração mitocondrial e a avaliação da preferência de combustível e flexibilidade metabólica, preservando as redes mitocondriais existentes e a integridade da membrana.

Medição da respiração mitocondrial em fibras musculares esqueléticas humanas e de camundongos por respirometria de alta resolução

Aprenda a isolar fibras musculares únicas intactas do músculo sóleo murino usando colagenase otimizada. Este método minimiza perdas de fibras e preserva viabilidade para imunomarcação e expansão de células satélite.

Ensaio de Isolamento de Fibra Única para Avaliação do Comportamento da Miofibra Oxidativa

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