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	<li>Murray, P. J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage+polarization.">Macrophage polarization.</a> Annu Rev Physiol. 79, 541-566 (2017).</li><li>Xue, J., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptome-based+network+analysis+reveals+a+spectrum+model+of+human+macrophage+activation.">Transcriptome-based network analysis reveals a spectrum model of human macrophage activation.</a> Immunity. 40 (2), 274-288 (2014).</li><li>Italiani, P., Boraschi, D. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+monocytes+to+M1/M2+macrophages:+phenotypical+vs.+functional+differentiation.">From monocytes to M1/M2 macrophages: phenotypical vs. functional differentiation.</a> Front Immunol. 5, 514 (2014).</li><li>Locati, M., Curtale, G., Mantovani, A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diversity,+mechanisms,+and+significance+of+macrophage+plasticity.">Diversity, mechanisms, and significance of macrophage plasticity.</a> Annu Rev Pathol. 15, 123-147 (2020).</li><li>Luo, M., Zhao, F., Cheng, H., Su, M., Wang, Y. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage+polarization:+an+important+role+in+inflammatory+diseases.">Macrophage polarization: an important role in inflammatory diseases.</a> Front Immunol. 15, 1352946 (2024).</li><li>Cossarizza, A., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+the+use+of+flow+cytometry+and+cell+sorting+in+immunological+studies+(third+edition).">Guidelines for the use of flow cytometry and cell sorting in immunological studies (third edition).</a> Eur J Immunol. 51 (12), 2708-3145 (2021).</li><li>Unuvar Purcu, D., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+stimulation+time+on+the+expression+of+human+macrophage+polarization+markers.">Effect of stimulation time on the expression of human macrophage polarization markers.</a> PLoS One. 17 (3), e0265196 (2022).</li><li>Icha, J., Weber, M., Waters, J. C., Norden, C. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phototoxicity+in+live+fluorescence+microscopy,+and+how+to+avoid+it.">Phototoxicity in live fluorescence microscopy, and how to avoid it.</a> BioEssays. 39 (8), 1700003 (2017).</li><li>Laissue, P. P., Alghamdi, R. A., Tomancak, P., Reynaud, E. G., Shroff, H. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+phototoxicity+in+live+fluorescence+imaging.">Assessing phototoxicity in live fluorescence imaging.</a> Nat Methods. 14 (7), 657-661 (2017).</li><li>Park, Y., Depeursinge, C., Popescu, G. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+phase+imaging+in+biomedicine.">Quantitative phase imaging in biomedicine.</a> Nat Photonics. 12, 578-589 (2018).</li><li>Dong, D., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Super-resolution+fluorescence-assisted+diffraction+computational+tomography+reveals+the+three-dimensional+landscape+of+the+cellular+organelle+interactome.">Super-resolution fluorescence-assisted diffraction computational tomography reveals the three-dimensional landscape of the cellular organelle interactome.</a> Light Sci Appl. 9, 11 (2020).</li><li>Kim, K., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+diffraction+tomography+techniques+for+the+study+of+cell+pathophysiology.">Optical diffraction tomography techniques for the study of cell pathophysiology.</a> J Biomed Photonics Eng. 2 (2), 020201 (2016).</li><li>Falk, T., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=U-Net:+deep+learning+for+cell+counting,+detection,+and+morphometry.">U-Net: deep learning for cell counting, detection, and morphometry.</a> Nat Methods. 16 (1), 67-70 (2019).</li><li>Jaqaman, K., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Robust+single-particle+tracking+in+live-cell+time-lapse+sequences.">Robust single-particle tracking in live-cell time-lapse sequences.</a> Nat Methods. 5, 695-702 (2008).</li></ol>

<table><tbody><tr><td>ODT imaging system</td><td>Pellucid Optics</td><td>MH-PanoView</td><td>Usado para imagem de células vivas sem rotulagem</td></tr><tr><td>Software de aquisição</td><td>Pellucid Optics </td><td>Lucida-Pano v2.1.0</td><td>Usado para aquisição de imagens</td></tr><tr><td>Software de análise</td><td>Pellucid Optics </td><td>Intellyseg v2.1.0</td><td>Usado para reconstrução, segmentação e rastreamento de imagens</td></tr><tr><td>RAW264.7</td><td>Wuhan Zishan Biotechnology </td><td>STCC20020P</td><td>Linha celular de macrófagos murinos usada para experimentos de polarização e imagem in vitro.</td></tr><tr><td>Baicalina (BAI)</td><td>Shanghai Yuanye </td><td>JB246114</td><td>Usado para pré-tratamento celular</td></tr><tr><td>Lipopolissacarídeo (LPS)</td><td>Solarbio</td><td>L8880</td><td>Usado para estimular macrófagos</td></tr><tr><td>Meio DMEM</td><td>Gibco</td><td>C11995500BT</td><td>Meio de cultura celular</td></tr><tr><td>Soro bovino fetal</td><td>Procell</td><td>164210</td><td>Suplemento para cultura celular</td></tr><tr><td>Penicilina&ndash;Estreptomicina (100x)</td><td>Procell</td><td>PB180120</td><td>Antibióticos para cultura celular</td></tr><tr><td>Prato de cultura de 60 mm</td><td>Corning</td><td>CLS430166</td><td>Usado para cultura celular</td></tr><tr><td>Prato de fundo de vidro de 35 mm</td><td>Cellvis</td><td>D35-10-1.5-N</td><td>Usado para imagem ODT</td></tr><tr><td>Microscópio invertido</td><td>OLYMPUS</td><td>CKX53</td><td>Usado para observação e monitoramento rotineiros de células durante a cultura.</td></tr><tr><td>Contador de células</td><td>RWD Life Science</td><td>C100</td><td>Usado para determinação da densidade celular</td></tr></tbody></table>

imagem em tempo real sem marcação e análise quantitativa da morfodinâmica de macrófagos usando tomografia por difração óptica

Real-Time Label-Free Imaging and Quantitative Analysis of Macrophage Morphodynamics Using Optical Diffraction Tomography

Imagem em tempo real sem marcação e análise quantitativa da morfodinâmica de macrófagos usando tomografia por difração óptica

This study establishes a label-free optical diffraction tomography (ODT)-based workflow for live-cell imaging and analysis to observe time-dependent ...

real-time-label-free-imaging-quantitative-analysis-macrophage

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Total reflexão interna de fluorescência microscopia (TIRF) é uma abordagem poderosa para observar as estruturas perto da superfície da célula em alto contraste e resolução temporal. Demonstramos como TIRF pode ser empregue para estudar a dinâmica de proteína no córtex de parede celular fechados células bacterianas e fúngicas.

Visualização de Cortex organização e dinâmica em microorganismos, utilizando microscopia de fluorescência Total Internal Reflection

Descrevemos o uso de um microscópio óptico padrão para realizar medições quantitativas de massa, volume e densidade celular por meio de uma combinação de imagens de contraste de campo claro e interferência diferencial.

Microscopia ótica quantitativa: Measurement of Cellular Biofísica Características com um microscópio óptico padrão

A distribuição espacial e a dinâmica temporal das proteínas e lipídios da membrana plasmática são um tema quente na biologia. Aqui, esse problema é abordado por uma análise de flutuação de imagem espaço-temporal que fornece conceitualmente as mesmas quantidades físicas de rastreamento de partícula única, mas usa pequenos rótulos moleculares e configurações de microscopia padrão.

De fast imagens de fluorescência com a Lei difusão molecular em membranas de células vivas em um microscópio comercial

Este protocolo descreve a implementação de um sistema de microscopia óptica de estiramento de tempo de detecção assimétrica para imagens de célula única em fluxo microfluídico ultra-rápido e suas aplicações em citometria de fluxo de imagem.

Citometria de Fluxo de Imagem Microfluídica por Microscopia Óptica de Tempo-estiramento com detecção assimétrica (ATOM)

Sondas de destino-específicos representam uma ferramenta inovadora para a análise de mecanismos moleculares, tais como a expressão da proteína em vários tipos de doença (por exemplo, inflamação, infecção e tumorigênese). Neste estudo, descrevemos uma avaliação tomográfica tridimensional quantitativa da infiltração de macrófagos intestinal em um modelo murino de colite usando tomografia computadorizada mediada por fluorescência de F4/80-específicos.

Tomografia computadorizada mediada por fluorescência para a detecção e quantificação de inflamação Intestinal murino macrófago-relacionados

Este protocolo descreve a fabricação de superfícies de vidro ótico-qualidade adsorvido com compostos contendo hidrocarbonetos de cadeia longa que podem ser usados para monitorar fusão macrófago de espécimes vivos e permite a microscopia de super-resolução de espécimes fixos .

Fabricação de superfícies de vidro de qualidade óptica para estudar a fusão do macrófago

Aqui descrevemos os métodos usando microscopia confocal de fiação disco de imagem única fagocíticas eventos por macrófagos peritoneais residente do rato. Os protocolos podem ser estendidos a outras células fagocíticas.

Time-Lapse imagem em 3D da fagocitose por macrófagos de rato

Descreveremos um protocolo para a identificação do rótulo-livre dos subtipos de linfócito usando a imagem latente da fase quantitativa e um algoritmo de aprendizado de máquina. Medições de índice de refração 3D tomograms de linfócitos apresentam 3D informações morfológicas e bioquímicas para células individuais, que é, então, analisadas com um algoritmo de aprendizado de máquina para identificação dos tipos de células.

Livre etiqueta de identificação dos subtipos de linfócito utilizando imagens tridimensionais fase quantitativa e aprendizagem de máquina

Microscopia óptica baseada em chip é uma nova abordagem à microscopia de fluorescência e oferece vantagens na relação custo-eficácia e taxa de transferência. Aqui, os protocolos de preparação e imagem de chips são mostrados para microscopia tirf e microscopia de super-resolução baseada em localização.

Fluorescência de reflexão interna total de alta taxa de transferência e microscopia de reconstrução óptica estocástica direta usando um chip fotônico

A análise de deslocamento quadrado médio (iMSD) derivada de imagem é aplicada a macropinossos para destacar sua natureza intrínseca em termos de propriedades estruturais e dinâmicas. Os macropinossomos são então comparados aos grânulos secretos de insulina (ISGs) como referência para estruturas subcelulares com propriedades estruturais/dinâmicas médias invariantes.

Sondagem de Propriedades Estruturais e Dinâmicas de Nanoestruturas Subcelulares de Tráfico por Espectroscopia de Flutuação Espiotemporal

Apresentamos um protocolo para a implementação de microscopia de reflexão de interferência e microscopia de reflexão interna-fluorescência para a imagem simultânea de microtúbulos dinâmicos e proteínas fluorescentes rotuladas como microtubulas.

Reflexão de Interferência Simultânea e Microscopia de Fluorescência De Reflexão Interna Total para Microtúbulos Dinâmicos de Imagem e Proteínas Associadas

Chengdu University of Traditional Chinese Medicine.  Este protocolo descreve um fluxo de trabalho baseado em tomografia por difração óptica sem marcadores para imagens em tempo real e análise quantitativa da morfodinâmica dos macrófagos. O método permite o acompanhamento contínuo da morfologia e migração de células individuais, fornecendo medições resolvidas no tempo da área projetada, perímetro e velocidade média de migração durante imagens de células vivas de longo praz...

Imagem em tempo real sem marcação e análise quantitativa da morfodinâmica de macrófagos usando tomografia por difração óptica

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