Name: Labeling retrógrada de células ganglionares da retina através da aplicação de Fluoro-Gold na superfície do colículo superior (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-06-17T17:19:00.000+00:00
Duration: 14 min 5 s
Description: Aprenda a rotulagem retrógrada de células ganglionares da retina usando Fluoro-Gold aplicado no colículo superior. Esta técnica permite visualizar vias neuronais e avaliar efeitos de drogas na sobrevivência celular.

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Os autores gostariam de agradecer o apoio do Programa Nacional de Glaucoma da Fundação Americana de Saúde Adjunto.

<ol><li> Anestesiar o rato por injeção intra-peritoneal de cetamina (80mg/kg) e xilazina (8mg/kg) (relação de volume de 2:1). Aplicar pomada lubrificante estéril olho para evitar o ressecamento das córneas durante a cirurgia. </li><li> Raspar os pêlos da cabeça (do olho ao nível do ouvido) e fixar a cabeça no palco cabeça por uma cabeça de fixação e defina seu incisivos na barra incisivo. </li><li> A área de operação desinfectados com solução de iodo povidona 10% seguido pelo álcool 70%. </li><li> Cortar a pele e os músculos para expor crânio e suturas (sagital, coronal e transversal suturas) (Figura 1). Aplicar analgésico, bupivicaine como um respingo para a área de incisão (não exceder 2 mg / kg). </li><li> Furar um buraco crânio (ø mm 2x2, 0,5 mm de ambas as suturas sagital e transversal) de cada lado da sutura sagital. Evitar a ruptura das meninges e do seio deitada debaixo das suturas. <img src="/files/ftp_upload/old/819_2008_6_18_3/ratSkull.png" alt="Marcas no crânio de ratos vivos." width="469" height="317" /> Figura 1. Marcas no crânio de ratos vivos. </li><li> Cortar as meninges por tesouras primavera, evitar rasgar. </li><li> Aspirar o conteúdo cerebral que se encontra sobre a superfície dorsal do colículo superior cuidadosamente pela bomba de vácuo e três pontos de verificação podem ser observadas: <ol><li> a cor do tecido cerebral muda de cinza para branco ao cinza </li><li> parar quando a aspiração do líquido cefalorraquidiano incolor sair </li><li> cuidadosamente ampliar o nível mais baixo de sucção horizontal para expor o colículo amarelada superiores abrangidos pela dura </li></ol></li><li> Aspirar o conteúdo do cérebro ao longo SC até quatro bordas de SC podem ser observados diretamente sob o microscópio. A porção do córtex cerebral removido deve ser o mínimo para evitar efeitos colaterais indesejáveis ​​(por exemplo, disfunção motora). Tenha cuidado para não tocar o seio. </li><li> Absorver o líquido no buraco com listra fina de algodão estéril para tornar a superfície do SC tão seca quanto possível. Em seguida, coloque uma camada fina de gelatina esponja pré-embebidas com 6% Fluoro-Gold na superfície de SC (FG é absorvido pelos terminais dos axônios de células ganglionares da retina bilateralmente e transportados retrogradamente à sua somas na retina). </li><li> Encha o buraco com gelfoam e fechar a ferida da pele com clips de sutura. </li><li> Os animais foram autorizados a se recuperar com luz incandescente para manter aquecido. Analgésico, a buprenorfina (100mcg/kg), é aplicada por via oral na água de beber durante 5 dias após a rotulagem SC. </li></ol>

<ol><li>Ahmed, A. K. M. F., Dong, K., Sugioka, K., Yamadori, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retrograde+double+labeling+of+retinal+ganglion+cells+in+the+newborn+and+adult+albino+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Protocols%22%5BJournal%5D)">Retrograde double labeling of retinal ganglion cells in the newborn and adult albino rat.</a> Neurosci. Protocols. 1, 1-11 (1996).</li>
<li>Chan, H. C., Chang, R. C. C., Ip, A. K. C., Chiu, K., Yuen, W. H., Zee, S. Y., So, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroprotective+effects+of+Lycium+barbarum+Lynn+on+protecting+retinal+ganglion+cells+in+an+ocular+hypertension+model+of+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">Neuroprotective effects of Lycium barbarum Lynn on protecting retinal ganglion cells in an ocular hypertension model of glaucoma.</a> Experimental Neurology. 203, 269-273 (2007).</li>
<li>Forrester, J., Peters, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nerve+fibers+in+the+optic+nerve+of+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Nerve fibers in the optic nerve of rat.</a> Nature. 214, 245-247 (1967).</li>
<li>Ji, J. Z., Elyaman, W., Yip, H. K., Lee, V. W. H., Yick, L. W., Hugon, J., So, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CNTF+promotes+survival+of+retinal+ganglion+cells+after+induction+of+ocular+hypertension+in+rats%3A+the+possible+involvement+of+STAT3+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">CNTF promotes survival of retinal ganglion cells after induction of ocular hypertension in rats: the possible involvement of STAT3 pathway.</a> European Journal of Neuroscience. 19, 265-272 (2004).</li>
<li>Li, R. S., Chen, B. Y., Tay, D. K., Chan, H. H. L., Pu, M. L., So, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Melanopsin-Expressing+Retinal+Ganglion+Cells+Are+More+Injury-Resistant+in+a+Chronic+Ocular+Hypertension+Model.+Investigative%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Melanopsin-Expressing Retinal Ganglion Cells Are More Injury-Resistant in a Chronic Ocular Hypertension Model. Investigative.</a> Ophthalmology & Visual Science. 47, 2951-2958 (2006).</li>
</ol>

<ol><li> Por que usar este método cirúrgico para a contagem de células ganglionares da retina? Em ratos cerca de 98% das células ganglionares da retina (RGC) são conhecidas por projeto para o colículo contralateral superior (SC). Aplicação de flúor em dourado sobre a superfície do SC pode rotular quase todos os RGCs, para que possamos concentrar-se neste neurônio mais vulneráveis ​​da retina em glaucoma. Compare com rotulagem retrógrado de RGC colocando FG no coto do nervo óptico seccionado por 2 dias, a interferência de sobrevivên...

labeling retrógrada de células ganglionares da retina através da aplicação de fluoro-gold na superfície do colículo superior

Retrograde Labeling of Retinal Ganglion Cells by Application of Fluoro-Gold on the Surface of Superior Colliculus

Contagem de células ganglionares da retina (RGC) é essencial para avaliar a degeneração da retina especialmente em glaucoma. Rotulagem RGC confiável é fundamental para avaliar os efeitos de qualquer tratamento. Em ratos, cerca de 98% do RGCs é conhecido por projeto para o colículo contralateral superior (SC) (Forrester e Peters, 1967). Aplicando fluoro-gold (FG) na superfície de SC pode rotular quase todos os RGCs, para que possamos concentrar-se neste neurônio mais vulneráveis ​​da retina em glaucoma. FG é ocupada pelos terminais dos axônios de células ganglionares da retina bilateralmente e transportados retrogradamente à sua somas na retina. Compare com rotulagem retrógrado de RGC colocando FG no coto do nervo óptico seccionado por 2 dias, a interferência de sobrevivência RGC é minimizado. Compare com coloração violeta cresil que as manchas RGCs, células amácrinas e endotélio dos vasos sanguíneos na camada de células ganglionares da retina, este método de marcação é mais específico para o RGC. Este vídeo descreve o método de rotulagem retrógrado de RGC aplicando FG sobre a superfície de SC. Os procedimentos cirúrgicos incluem a perfuração do crânio; aspiração do córtex para expor a SC e aplicação de esponja de gelatina sobre a superfície dorsal inteiro de SC são mostrados. Dicas úteis para evitar hemorragia intracraniana maciça e aspiração do SC foram dadas.

Este vídeo descreve o método de rotulagem retrógrado de RGC aplicando fluoro-gold (FG) na superfície do colículo superiores (SC). Técnica envolve a perfuração do crânio, aspiração do córtex, e aplicação de esponja de gelatina sobre a superfície dorsal de toda SC.

Labeling retrógrada de células ganglionares da retina através da aplicação de Fluoro-Gold na superfície do colículo superior

A contagem de células ganglionares da retina (CGR) é essencial para avaliar a degeneração retiniana, especialmente no glaucoma. A marcação confiável de CGR é fundamental para...

Olá, sou Tu do Laboratório GOSO na Universidade de Hong Kong. Hoje vou apresentar como rotular retrogradamente rato. Célula ganglionar da retina.As células ganglionares da retina serão retrogradamente marcadas pela aplicação de corante fluorescente na superfície do colículo superior, de modo que posteriormente possamos contar as células ganglionares da retina na preparação planar da retina para avaliar a morte celular ou o efeito do fármaco aplicado. Esta é uma foto que ilustra a via do nervo óptico da retina até o colículo superior. O corante fluorescente CLE pode ser transportado retrogradamente do colículo superior CLE através do trato óptico.Cruze o quiasma óptico através do nervo óptico até a retina no olho. Utilizamos microscópio cirúrgico para realizar a cirurgia. Use a bomba para aspirar o córtex cerebral sobre a superfície dorsal do estágio de cabeça CLE, a fim de manter o chapéu vermelho em posição.Ke e seno para fixar o ratinho para abertura da calota craniana e ponta de ciúme absorvível para aplicar o corante fluorescente FG sobre a superfície do clickless. Os instrumentos foram autoclavados antes da operação, incluindo pinças finas, tesoura de mola, agulha de vácuo, po

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Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Transecção do nervo óptico é um modelo amplamente utilizado de lesão do SNC adulto. Noventa por cento das células ganglionares da retina (RGCs) cujos axônios são completamente seccionado (axotomia) morrem dentro de 14 dias após a axotomia. Esse modelo se adequa facilmente a manipulações experimentais e altamente reprodutível.

Transecção do nervo óptico: Um Modelo de Apoptose Neuron Adultos no Sistema Nervoso Central

Transecção do nervo óptico é um modelo amplamente utilizado de lesão do SNC adulto. Este modelo é ideal para a realização de uma série de manipulações experimentais que visam a retina globalmente ou diretamente a população-alvo feridos neuronal de células ganglionares da retina.

Métodos para manipulações experimentais após a transecção do nervo óptico no sistema nervoso central de mamíferos

Este artigo fornece uma descrição de como dissecar e registro da preparação isolada da retina em mouse. Em particular, descrevemos como luz para gravar as respostas de uma população fluorescente etiquetado células ganglionares e, posteriormente, identificar e analisar a sua morfologia.

Uma preparação isolada da retina para gravar Resposta Luz geneticamente identificadas células ganglionares da retina

Transfecção de células de camundongo por Ganglionares da Retina In vivo Eletroporação

Transporte retrógrado de corante fluorescente rotula uma sub-população de neurónios baseado em projecção anatómica. Axônios rotulados pode ser alvo...

Labeling fluorescentes retrógrada Permite alvejado Extracelular Gravação Single-unidade dos neurônios identificados<em&gt; In vivo</em

Fonte: Zhang, J., et al. Análise Quantitativa de Alta Resolução de Imunoouro de Receptores de Membrana em Sinapses de Fita Retiniana. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo demonstra uma técnica de microscopia eletrônica para visualizar a localização do receptor de neurotransmissor nas sinapses da retina. As seções da retina contêm células ganglionares da retina que exibem receptores de neurotransmissores ligados à membrana e são marcadas com a subunidade B da toxina da cólera (CTB). Ao marcar os...

Imagens de alta resolução de receptores de neurotransmissores em sinapses retinianas

Fonte: Inal, M. A. et. al., Rastreamento retrógrado de Drosophila neurônios motores embrionários usando corantes fluorescentes lipofílicos. J. Vis. Exp. (2020)Este vídeo demonstra o método de rotulagem retrógrada de Drosophila neurônios motores usando corantes lipofílicos. O corante entra no axônio, viaja retrógrada e rotula os neurônios em verde, permitindo a visualização detalhada de sua morfologia e projeções sob um microscópio confocal.

Marcação retrógrada de neurônios motores de Drosophila usando corantes lipofílicos fluorescentes

Source: &lt;a style='text-decoration:none;' href='https://app.jove.com/v/55229/ single-cell-rna-seq-of-defined-subsets-of-retinal-ganglion-cells'&gt;Laboissonniere, et. al. RNA-seq de célula única de subconjuntos definidos de células ganglionares da retina. J. Vis. exp. (2017). Este vídeo demonstra uma técnica de rastreamento fluorescente para identificar subtipos de células ganglionares da retina (RGC) em uma retina de camundongo transgênico. O processo envolve proteger a retina isolada em uma...

Identificação de subtipos de células ganglionares da retina de camundongos por meio de rastreamento fluorescente

Introduzimos um método eficiente para rotular retrógrados as células ganglionares da retina (RGCs) em peixes-zebra adultos.

Marcação retrógrada de células ganglionares da retina em Zebrafish Adulto com corantes fluorescentes

O método de imunoouro pós-incorporação é uma das maneiras mais eficazes de fornecer análises de alta resolução da localização subcelular de moléculas específicas. Aqui descrevemos um protocolo para analisar quantitativamente os receptores de glutamato nas sinapses da fita retiniana.

High-Resolution Análise Quantitativa immunogold de Receptores de Membrana na retina fita Sinapses

Milhões de pessoas sofrem de doenças degenerativas da retina que resultam em cegueira irreversível. Um elemento comum de muitas dessas doenças é a perda de células ganglionares da retina (RGCs). Este protocolo detalhado descreve o isolamento de RGC murinos primários por seleção positiva e negativa com citometria de fluxo.

Isolamento de células de gânglio retiniano murino primário (RGCs) por citometria de fluxo

Aprenda a rotulagem retrógrada de células ganglionares da retina usando Fluoro-Gold aplicado no colículo superior. Esta técnica permite visualizar vias neuronais e avaliar efeitos de drogas na sobrevivência celular.

Labeling retrógrada de células ganglionares da retina através da aplicação de Fluoro-Gold na superfície do colículo superior

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