Name: Dubbele Hele Mount in situ hybridisatie van het vroege embryos Chick (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-10-27T00:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 42 s
Description: Leer dubbele kleur whole mount in situ hybridisatie voor genexpressie-analyse in kippenembryo's. Deze methode visualiseert twee genen tegelijkertijd met kleurreacties voor ontwikkelingsbiologisch onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit werk werd ondersteund door de Margaret M. Alkek Stichting RHF.

Deel 1: Het bevestigen van de embryo&#39;s <ol><li> Vul dissectie schaal met ijskoud DEPC-PBS. Te houden op het ijs. Open het ei door te tikken op de schaal met een tang en verwijder de schil stukken. </li><li> Verwijder de dikke albumine met een pincet. Tilt dooierzak met grof tang zodat embryo naar boven wijst. </li><li> Met behulp van een schaar, knip een vierkant van dooierzak rond het embryo. </li><li> Met behulp van lepel, verwijder embryo van de dooier en de plaats op ijskoud DEPC-PBS. </li><li> Onder de microscoop, verwijder membranen en dooier en transfer naar fixatie schotel. </li><li> Vastpinnen, verwijder DEPC-PBS. Vervangen met 4% PFA in DEPC-PBS en fix O / N bij 4 ° C. </li><li> Verwijderen fixeermiddel. Vervangen met ijskoud DEPC-PBS. Met behulp van een stomp uiteinde microcapillaire naald of een microdissectie mes, perforeren het zenuwstelsel en het hart holten, te vangen van sonde te voorkomen. </li><li> Was de 2x 10 minuten DEPC-PBS met 0,1% Tween-20 (PBT). Uitdrogen 10 minuten elk in 25%, 50%, 75% methanol in PBT. Twee keer uitdrogen embryo&#39;s in 100% methanol. Bewaren bij -20 ° C in methanol. </li></ol> Deel 2: prehybridisatie <ol><li> Hydrateren embryo&#39;s 10 minuten elk in 75%, 50% en 25% methanol in PBT. Was de 2x 10 minuten in de PBT. </li><li> Ondertussen bereiden ijskoud fixatief (4% paraformaldehyde in PBT). Vervangen door PBT met proteinase K oplossing (3 ml / flacon; [? 5 g / ml] finale in PBT). Zorg ervoor dat de gehele flacon wordt blootgesteld aan proteinase K oplossing door zacht glooiende de flacon, zie Problemen oplossen voor belichtingstijden. </li><li> Met behulp van RNase vrij Pasteur pipet verwijderen proteinase K en voeg fixatief (2 ml). Direct plaats op ijs precies 20 minuten. </li><li> Alle RT wast zijn uitgevoerd op nutator. Was de 2x 10 minuten in PBT, en 1x 10 minuten in PBT die 50% hybridisatiebuffer. </li><li> Was 1x in hybridisatiebuffer. Incubeer bij 65 ° C in 2 ml hybridisatiebuffer voor 4-5 uur. </li></ol> Deel 3: hybridiseren embryo&#39;s met sondes <ol><li> DIG en FITC gekoppeld sonde synthese wordt beschreven in Appendix. De sonde zal naar verwachting een sterk signaal te geven, moet worden synhesized met FITC-bevattende nucleotiden, de zwakkere sonde moet worden gesynthetiseerd met een met een DIG-bevattende nucleotiden. </li><li> Voorverwarmen probes in hybridisatiebuffer (500 ng / ml elk) met behulp van een 2 ml flacon. Onmiddellijk vervangen van de hybridisatiebuffer met de probe-oplossing. Laat de embryo&#39;s drogen. Incubeer 16 uur bij 65 ° C. </li><li> Vervang de sonde met hybridisatiebuffer, 2 wassen, 30 minuten elk bij 65 ° C. Was de 15 minuten in hybridisatiebuffer / MABT (1 / 1 v / v /) bij 65 ° C. </li></ol> Deel 4: DIG antilichaam incubatie en kleurreactie <ol><li> Was 2x20 MN in MABT. Was 1 uur in 2% BBR / MABT. Was 5 uur in 2% BBR/20% HISS / MABT (blokkerende buffer). Incubeer in 1:2000 DIG antilichaam verdund in het blokkeren van buffer, O / N bij 4 ° C op nutator. </li><li> Was 3x 10 minuten elk in MABT, en 3x een uur elk in MABT. </li><li> Was de 2x 20 minuten in NTMT. Voeg 200ul NBT / BCIP ondergrond tot 10 ml NTMT. Onmiddellijk verwijderen NTMT van de flacon en vervang met 1-2 ml NBT / BCIP buffer. Plaats in het donker. Monitor kleur reactie na 20 minuten, en op 20 minuten tussenpozen. </li><li> Volgende kleur reactie (moeten verschijnen blauw), wassen in PBS gedurende 10 minuten, vastpinnen op fixatie schaal gevuld met PBS, en vervang oplossing met 4% PFA in PBS. Fix O / N bij 4 ° C. </li><li> Transfer naar nieuwe scintillatieflesje. Was in PBST (PBS met 1% Tween-20) 2x10 minuten. Was in MABT 2x 10 minuten. </li><li> Incubeer in MABT 30 minuten op 63 ° C. </li></ol> Deel 5: FITC antilichaam incubatie en kleurreactie <ol><li> Was de 2x 10 minuten in MABT, 1 uur in 2% BBR / MABT, 5 uur in het blokkeren van buffer </li><li> Incubeer in alkalische fosfatase-gekoppelde anti-FITC-antilichaam (1:500) O / N bij 4 ° C. </li><li> Was 3x 10 minuten elk in MABT, en 3x een uur elk in MABT. </li><li> Was in 2x 20 minuten in TBS pH 8,45 met 0,1% Tween-20 (TBST). </li><li> Bereid Vector Red werkende oplossing (5 ml) in TBST met behulp van reagentia 1,2 en 3 die in kit. Onmiddellijk verwijderen TBST van de flacon en te vervangen door Vector Red buffer. Plaats in het donker. Monitor kleur reactie na 40 minuten, en op 30 mn tussenpozen. </li><li> Volgende kleur reactie (moeten verschijnen rood), transfer embryo&#39;s PBS. </li></ol> Deel 6: Bevestiging en verwerking <ol><li> Transfer naar fixatie schaaltje met PBS, en vast te stellen 4% PFA voor 20 minuten op RT of O / N bij 4 ° C. </li><li> Wassen in PBS, 2x 10 minuten. Te verwerken voor fotografie, transfer naar 20% glycerol in PBS (dit maakt de embryo&#39;s doorzichtig). Voor het maken van een kamer, knip 2 strips van PVC-tape, superponeren ze op dia. Knip een plein in het centrum met behulp van een mes. Verwijder het plein met behulp van pincet. </li><li> Te verwerken voor de wax snijden, transfer terug naar PBS, wassen 2x 10 minuten, dehydrateren in gegradeerde serie van methanol (25%, 50%, 75% en 100% in PBS, op 10 minuten elk). </li><li> Vervangen door propanol, 3mn. Vervangen door 1,2,3,4-tetrahydronaftaleen, 20 minuten gevolgd door Histoclear (2x 1 uur). Vervangen met histoclear / was 1 / 1 (v / v) 60 ° C gedurende 1 uur. Vervangen met was een procesvoor histologie. </li></ol> Deel 7: Oplossingen Hybridisatiebuffer, bewaren bij -20 ° C in Falcon, 50 ml: 25 ml formamide, 3,25 ml (20xSSC), 0,5 ml (0,5 M EDTA), 1 ml (10% Tween-20), 2,5 ml (1% SDS) ; 125 ul (20mg/ml tRNA). 100ul (50 mg / ml heparine) MABT, voor te bereiden 100mm maleïnezuur, pH op 7,5 met NaOH pellets. Voeg 150mm NaCl en 0,1% Tween-20. NTMT (gemaakt vlak voor gebruik), 50 ml: 1 ml (5M NaCl), 2,5 ml (2M Tris-HCl pH9.5), 1,25 ml (2M MgCl 2), 5 ml (10% Tween-20). TBST: 0,1 M Tris-HCl, 0,15 M NaCl, pH 8,45, 0,1% Tween-20. Deel 8: het oplossen van problemen <table border="1"><tbody><tr><th> Probleem </th><th> Veroorzaken </th><th> Remedie </th></tr><tr><td valign="top"> Embryo is opgerold </td><td valign="top"> Onvoldoende uitdroging / rehydratie </td><td valign="top"> Onderhouden 10 mn intervallen tijdens de opeenvolgende uitdroging / rehydratie stappen </td></tr><tr><td valign="top"> Er is geen probe-signaal </td><td valign="top"> Probe wordt afgebroken RNase verontreiniging in flacon </td><td valign="top"> Run probe op 1% agarosegel Zorg ervoor dat de gehele flacon wordt blootgesteld om proteïnase K-oplossing in stap 2 </td></tr><tr><td valign="top"> Sonde is labels holten van het hart een neurale buis </td><td valign="top"> Sonde wordt gevangen </td><td valign="top"> In stap 2, ervoor zorgen dat alle holtes zijn geperforeerd met microdissectie mes of microcapillaire </td></tr><tr><td valign="top"> Embryo uiteengevallen na hybridisatie (stap 3) </td><td valign="top"> Proteinase K stap naar links te lang Hybridisatie temperatuur is te hoog </td><td valign="top"> Proteinase K mag niet langer zijn dan 1mn worden gelaten (fase 3 + en 4), 2 minuten (fase 5 tot 7), 3 minuten (fase 8-10), 4 mn (stadium 11-13) Niet hybridiseren bij T o hogere dan 65 o C </td></tr></tbody></table> Deel 9: representatieve resultaten Vertegenwoordiger van embryo&#39;s worden hieronder weergegeven: (A) Embryo (fase HH7) is voorzien van een DIG-Sox sonde (blauw) en een FITC-delta-1 sonde (rood). (B) Embryo (fase HH8) is voorzien van een DIG-PAX6 sonde (blauw) en een FITC-Shh probe (rood). Nf, neurale vouwen, ANP, anterior neurale plaat, psm, presomitic mesoderm, n, notochord, nt, neurale buis). Probe giften van de laboratoria van Drs. C. Tabin, M. Goulding, D. Henrique, en J. Briscoe. <img src="/files/ftp_upload/old/904_2008_10_20_1/904_Figure-01.png" alt="" width="303" height="300" />

<ol><li>Streit, A., Berliner, A. J., Papanayotou, C., Sirulnik, A., Stern, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Initiation+of+neural+induction+by+FGF+signaling+before+gastrulation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Initiation of neural induction by FGF signaling before gastrulation.</a> Nature. 406, 74-78 (2000).</li>
<li>Rodríguez Esteban, C., Capdevila, J., Economides, A. N., Pascual, J., Ortiz, A., Izpisúa Belmonte, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+novel+Cer-like+protein+Caronte+mediates+the+establishment+of+embryonic+left-right+asymmetry%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The novel Cer-like protein Caronte mediates the establishment of embryonic left-right asymmetry.</a> Nature. 401, 243-251 (1999).</li>
<li>Psychoyos, D., Stern, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Restoration+of+the+organizer+after+radical+ablation+of+Hensen%27s+node+and+the+anterior+primitive+streak+in+the+chick+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Restoration of the organizer after radical ablation of Hensen's node and the anterior primitive streak in the chick embryo.</a> Development. 122, 3263-3273 (1996).</li>
<li>Kawakami, M., Nakanishi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+an+endogenous+PKA+inhibitor%2C+PKIalpha%2C+in+organizing+left-right+axis+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The role of an endogenous PKA inhibitor, PKIalpha, in organizing left-right axis formation.</a> Development. 128, 2509-2515 (2001).</li>
<li>Basch, M. L., Bronner-Fraser, M., Garcia-Castro, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specification+of+the+neural+crest+occurs+during+gastrulation+and+requires+Pax7%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Specification of the neural crest occurs during gastrulation and requires Pax7.</a> Nature. 441, 218-222 (2006).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te melden.

De twee-kleuren ganse berg in situ hybridisatie methode wordt gebruikt om zowel de ruimtelijke en temporele patronen van genexpressie te bepalen, met behulp van een of twee genen van belang. Toepassingen zijn onder andere de beoordeling van genexpressie patronen van nieuwe genen (bijvoorbeeld 1,2, evenals veranderingen in genexpressie na belediging (embryonale manipulaties 3, 4 kralen, en elektroporatie van RNA-of DNA-constructen 5).

<table><tbody><tr><td>Eieren</td><td>Dier</td><td>Charles River Laboratories</td><td>Premium Fertile</td><td></td></tr><tr><td>Stereomicroscoop</td><td>Microscoop</td><td>Leica Microsystems</td><td>MZ9.5</td><td></td></tr><tr><td>Marsh automatische incubator</td><td>Instrument</td><td>Lyon</td><td>RX</td><td></td></tr><tr><td>Hybridisatie-incubator</td><td>Instrument</td><td>Hybaid</td><td>Micro-4</td><td></td></tr><tr><td>Adams Nutator orbitale mixer</td><td>Instrument</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-062</td><td></td></tr><tr><td>Gebogen pincet (1)</td><td>Instrument</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>72991-4C</td><td></td></tr><tr><td>Fijne schaar</td><td>Instrument</td><td>Fine Science Tools</td><td>14161-10</td><td></td></tr><tr><td>Lepel</td><td>Instrument</td><td>Fine Science Tools</td><td>10370-18</td><td></td></tr><tr><td>Pasteur capillaire pipet</td><td></td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>70950-12</td><td></td></tr><tr><td>Microcapillaire buis</td><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1049-1PAK</td><td>Uittrekken met een verticale micropipetten-puller; stomp uiteinde maken met een fijn pincet</td></tr><tr><td>Microdissectiemes</td><td></td><td>Fine Science Tools</td><td>10056-12</td><td>Gebruiken om holtes te doorprikken voorafgaand aan de in situ hybridisatie</td></tr><tr><td>Minuten-pinnen 0,2 mm diam</td><td></td><td>Fine Science Tools</td><td>26002-20</td><td>Pinnen bij elkaar houden met een magnetische roerder;</td></tr><tr><td>Sylgard 184 siliconen elastomeer uithardingsmiddel en basis</td><td>Reagens</td><td>Dow Corning</td><td>0001986475</td><td>Meng 1 deel uithardingsmiddel met 9 delen basis; laat overnight uitharden bij 37 °C</td></tr><tr><td>Diethylpyrocarbonaat (depc)</td><td>Reagens</td><td>Acros Organics</td><td>10025025</td><td>Voeg 1 ml depc toe aan 1 l PBS; schudden; autoclaveren</td></tr><tr><td>16% PFA</td><td>Reagens</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>15710</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Reagens</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1379-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Proteïnase K</td><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P2308-5MG</td><td>Voorraadoplossing van 10 mg/ml in depc-H₂O in aliquots van 10 µl. Bewaren bij -20 °C.</td></tr><tr><td>Formamide, gedeïoniseerd</td><td>Reagens</td><td>Ambion</td><td>9342</td><td></td></tr><tr><td>Gist tRNA-25 mg</td><td>Reagens</td><td>Invitrogen</td><td>15401-011</td><td>Voorraadoplossing van 20 mg/ml in depc-H₂O in aliquots van 125 µl. Bewaren bij -20 °C</td></tr><tr><td>Heparine natriumzout</td><td>Reagens</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H4784-250MG</td><td>Voorraadoplossing van 50 mg/ml in depc-H₂O in aliquots van 100 µl. Bewaren bij -20 °C.</td></tr><tr><td>SSC x20 pH 5,5</td><td>Reagens</td><td>Fisher Scientific</td><td>PR-V4261</td><td></td></tr><tr><td>EDTA (0,5 M)</td><td>PR-V4231</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SDS</td><td>Reagens</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP166-100</td><td></td></tr><tr><td>Maleïnezuur</td><td>Reagens</td><td>Fluka</td><td>63189</td><td></td></tr><tr><td>B&amp;#8211;hringer Blocking Reagent</td><td>Reagens</td><td>Roche Group</td><td>11096176001</td><td>Gebruiken in een concentratie van 2% in MABT. Om te maken: 20 min verwarmen met MABT bij 60 °C. Kan als voorraadoplossing worden gemaakt en bewaard in aliquots van 1-5 ml bij 20 °C.</td></tr><tr><td>Hitte-geïnactiveerd schapenserum</td><td>Reagens</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>013-000-121</td><td>Oplossen in 10 ml H₂O; 30 min verwarmen bij 55 °C. Aliquot van 1 ml, -20 °C.</td></tr><tr><td>Anti-Digoxigenine-AP, Fab-fragmenten</td><td>Reagens</td><td>Roche Group</td><td>11093274910</td><td></td></tr><tr><td>NBT/BCIP voorraadoplossing</td><td>Reagens</td><td>Roche Group</td><td>11681451001</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Fluoresceïne-AP, Fab-fragmenten</td><td>Reagens</td><td>Roche Group</td><td>11426338910</td><td></td></tr><tr><td>2 M Tris</td><td>BP1759-500</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vector Red Alkalische Fosfatase Substraat Kit</td><td>Reagens</td><td>Vector Laboratories</td><td>SK-5100</td><td></td></tr><tr><td>1,2,3,4-tetrahydronaftaleen</td><td>Reagens</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>429325-100ML</td><td>Onder de zuigkast</td></tr></tbody></table>

dubbele hele mount in situ hybridisatie van het vroege embryo&#39;s chick

Double Whole Mount in situ Hybridization of Early Chick Embryos

Het kuiken embryo is een waardevol instrument in de studie van de vroege embryonale ontwikkeling. De transparantie, toegankelijkheid en het gemak van manipulatie, maken het een ideaal hulpmiddel voor het bestuderen van genexpressie in de hersenen, neurale buis, somiet en hart primordia vorming. Deze video toont de verschillende stappen in 2 kleuren ganse berg in situ hybridisatie, Ten eerste is de embryo wordt ontleed door het ei en gefixeerd in paraformaldehyde. Ten tweede, is het embryo verwerkt voor prehybridisatie. Het embryo wordt vervolgens gehybridiseerd met twee verschillende probes, gekoppeld aan een DIG, en een gekoppeld aan FITC. Na &#39;s nachts hybridisatie, is het embryo geïncubeerd met DIG gekoppeld antilichaam. Kleur reactie voor DIG substraat wordt uitgevoerd, en de regio van belang lijkt blauw. Het embryo wordt vervolgens geïncubeerd met FITC gekoppeld antilichaam. Het embryo wordt verwerkt voor de kleurreactie met FITC, en de regio van belang lijkt rood. Tot slot wordt het embryo vast en verwerkt voor phtograph en snijden. Een gids is het oplossen van problemen ook gepresenteerd.

Deze video toont twee-kleuren ganse berg in situ hybridisatie, een methode waarmee de ruimtelijke en temporele expressie patroon van twee verschillende genen kunnen worden gevisualiseerd in jonge kippenembryo&#39;s. Deze methode werd oorspronkelijk geïntroduceerd door David Wilkinson, Domingos Henrique, Phil Ingham en David Ish-Horowicz.

Dubbele Hele Mount in situ hybridisatie van het vroege embryo&#39;s Chick

Het kiजkenembryo is een waardevol instrument bij de studie van de vroege embryonale ontwikkeling. De transparantie, toegankelijkheid en het gemak van manipulatie maken het een ...

Deze procedure begint met fixatie, methanolbehandeling en behandeling met proteïnase K van de embryo's, gevolgd door een incubatie van een nacht met probe één diggen in or dig and probe. Twee fluoresceïne-isothiocyanaat of ZI embryo's worden geïncubeerd met dig-antilichamen, gevolgd door een kleurreactie met dig-alkalische fosfatase. De activiteit wordt geïnactiveerd en de embryo's worden geïncubeerd.Met FSE wordt de antilichaamkleurreactie uitgevoerd met Zi en de embryo's worden gefixeerd. Hallo, ik ben Delphine uit het laboratorium van Rick Finnel aan het Center for Environmental and Genomic Medicine aan de Texas A&amp;M University in Houston. Vandaag laten we u de procedure zien voor het uitvoeren van een tweekleurige in situ hybridisatie in het kiजembryo.We gebruiken deze procedure in het laboratorium om de effecten van antiepileptische geneesmiddelen op gastrische en neurale genen te analyseren. Laten we beginnen. Om in situ hybridisatie uit te voeren op kiजemembryo's, open dan eerst een ei door met een pincet tegen de schaal te tikken en stukjes van de schaal te verwijderen. Verwijder het dikke albumine met een pincet en kantel de dooierzak met een grove pincet, zodat het embryo

double-whole-mount-in-situ-hybridization-of-early-chick-embryos

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Deze video toont nieuwe cultuur, een methode waarbij kippenembryo's zich buiten het ei gekweekt tot 24 uur. Deze methode stelt je in staat om te studeren vroege ontwikkeling (primitieve streep tot 14 som.), Een periode die overeenkomt met E7-9 in de muis. Toepassingen van deze techniek zijn onder elektroporatie, in situ hybridisatie en immunohistochemie.

Methode voor Cultuur van Early kippenembryo&#39;s ex vivo (Nieuwe Cultuur)

Deze video toont ganse berg immunohistochemie, een methode waarmee de ruimtelijke en temporele expressiepatroon van een antigeen kan worden gevisualiseerd in jonge kippenembryo's. Deze methode werd oorspronkelijk geïntroduceerd door Jane Dodd en Tom Jessell.

Methode voor Whole Mount antilichaam kleuring in Chick

Met behulp van Whole Mount In situ Hybridisatie aan Moleculaire Biologie en organismale Link

Hele Mount<em&gt; In situ</em&gt; Hybridisatie van E8.5 aan E11.5 muis embryo&#39;s

Dit artikel beschrijft het oppervlak etikettering en...

Tracking Morfogenetische Tissue vervormingen in de vroege Chick Embryo

Een benadering voor het analyseren van migratie en de uiteindelijke lot van aviaire neurale lijst cellen in kwartel-chick chimere embryo's wordt beschreven. Deze methode is een eenvoudige en directe techniek voor het opsporen van neurale lijst cellen tijdens migratie en differentiatie die anders moeilijk te onderscheiden binnen een ongemanipuleerde kippenembryo.

Analyse van de neurale lijst migratie en differentiatie door Cross-soorten transplantatie

De zebravis, een kleine tropische vissen, is uitgegroeid tot een populair model voor het bestuderen van gen-functie tijdens gewervelde ontwikkeling en ziekte. De ruimtelijke en temporele expressie van de doelwitgenen worden...

Hoge resolutie Hele Mount<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisatie in zebravis embryo&#39;s om genexpressie en functie te bestuderen

Het Xenopus laevis-embryo blijft uiterst nuttig in de studie van vroege ontwikkeling vanwege zijn grote omvang en gemakkelijke manipulatie.   Er wordt een vereenvoudigd protocol voor volledige montage in situ hybridisatie gegeven dat kan worden gebruikt bij de identificatie van specifieke organen in dit modelsysteem.

Inzicht in de vroege organogenese Met behulp van een vereenvoudigd<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisatie Protocol in<em&gt; Xenopus</em

Hier presenteren we een nieuwe techniek om kuikenembryo's ex ovo te kweken voor time-lapse beeldvorming met behulp van doorgelaten licht en fluorescentiemicroscopie. De ondergedompelde filterpapiersandwich is een variant van de bekende filterpapierdragertechniek1 die het mogelijk maakt om kuikenembryo's volledig ondergedompeld in een vloeibaar kweekmedium te kweken.

Een Ondergedompeld Filter Paper Sandwich voor de lange termijn Ex Ovo Time-lapse beeldvorming van Early kippenembryo's

Dit artikel beschrijft een weefseltransplantatietechniek die is ontworpen om de signalerings- en patrooneigenschappen van basale voorhersenen tijdens craniofaciale ontwikkeling te testen.

Het creëren van aviaire voorhersenen chimaera's om de gezichtsontwikkeling te beoordelen

Leer dubbele kleur whole mount in situ hybridisatie voor genexpressie-analyse in kippenembryo's. Deze methode visualiseert twee genen tegelijkertijd met kleurreacties voor ontwikkelingsbiologisch onderzoek.

Dubbele Hele Mount in situ hybridisatie van het vroege embryo's Chick

Meer video's verkennen