Name: A técnica de coleta de líquido cefalorraquidiano Serial da Cisterna Magna em rato (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-11-10T00:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 8 s
Description: Aprenda a técnica refinada de coleta serial de líquido cefalorraquidiano da cisterna magna em camundongos transgênicos. Este método permite monitorar biomarcadores de Alzheimer longitudinalmente.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Nosso trabalho é apoiado pelo NIH concede NS048447 e KD AG017216to. Li Liu gostaria de agradecer ao Dr. Heikki Tanila (Universidade de Kuopio, Kuopio, na Finlândia), por sua supervisão e apoio durante o desenvolvimento do protocolo original.

Puxando o tubo de vidro capilar <ol><li> O tubo de vidro capilar é comprado de Instrumento Sutter Inc (vidro borosilicato, B100-75-10). </li><li> Puxe a tubos capilares em um Sutter P-87 Flaming micropipeta extrator, com o índice de calor fixado em 300 eo índice de pressão fixado em 330. </li><li> Apare a ponta do tubo capilar de vidro com uma tesoura, de modo que a ponta cônica tem um diâmetro interno de cerca de 0,5 mm. </li></ol> Cisterna magna técnica de punção de LCR Amostras de LCR são retirados da cisterna magna (Figura 1) usando um método que foi publicado anteriormente 1. <img src="/files/ftp_upload/old/960_2008_10_13_2/960_Figure-01.png" alt="Diagrama de anatomia cerebral: cerebelo, cisterna magna, córtex, rótulos do tronco cerebral." width="432" height="184" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figura 1"> Figura 1 1. Os ratos são anestesiados pela quetamina (100mg/kg) e (10mg/kg) xilazina por via intraperitoneal, administrada. Durante o tempo de indução da anestesia, os ratos são mantidos em um 37 º C incubadora. 2. A pele do pescoço é raspada, eo mouse é então colocado de bruços no instrumento estereotáxico com o contato direto de uma almofada de aquecimento. Uma sonda de temperatura retal é inserido no reto de modo que o calor produzido pela almofada de aquecimento é ajustada em resposta às mudanças de temperatura do corpo. A cabeça é presa com os adaptadores de cabeça. O sítio cirúrgico é limpo com iodopovidona 10%, seguido pelo etanol 7% 0 (repetir 3 vezes), e uma incisão sagital da pele é composta inferior ao occipital. 3. Sob o microscópio de dissecção, o tecido subcutâneo e os músculos (m. biventer cervicis e m. rectus capitis dorsalis major) são separados por dissecção romba com uma pinça. Um par de microretractors é usada para manter os músculos separados. 4. O mouse está previsto para que a cabeça forma um ângulo de quase 135 o com o corpo. 5. Sob o microscópio de dissecação, a dura-máter da cisterna magna aparece como um triângulo brilhante e clara reverter através do qual o bulbo e um grande vaso sanguíneo (artéria spinalis dorsalis), eo espaço CSF ​​são visíveis (Figura 2). <img src="/files/ftp_upload/old/960_2008_10_13_3/960_Figure-02.png" alt="Demonstração da anatomia cirúrgica; procedimento de dissecção; exposição tecidual; fins educacionais." width="304" height="307" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figura 2"> Figura 2 6. A dura-máter é seco com papel absorvente com cotonete estéril. Penetrar no tubo capilar no Citerna magna através da dura-máter, lateral ao spinalis dorsalis artéria (Figura 2). Após uma mudança notável na resistência à inserção do tubo capilar, o líquor flui para dentro do tubo capilar. 7. Remova cuidadosamente o tubo capilar, e conectá-lo a uma seringa de 3 ml por meio de um tubo de polietileno que tem um diâmetro interno de 1 mm. Injetar o CSF ​​em um 0,5 ml pré-marcada tubo eppendorf, e congelar imediatamente o tubo em gelo seco e depois transferi-lo para um freezer -80 C °. 8. Após a amostragem CSF, os músculos são re-alinhados, ea pele é suturada (4-0, Ethicon, Johnson &amp; Johnson). Cerca de 1 ml de NaCl 0,9% é administrado por via subcutânea para evitar a desidratação. O mouse é mantido na incubadora para manter a temperatura corporal até que ele se recupera, o peso do mouse é monitorado um dia e uma semana após a cirurgia. Resultados e Discussão Nós descrevemos um protocolo altamente confiável para a amostragem de série do CSF ​​de ratos sem contaminação plasma detectável. 1. Todo o procedimento geralmente leva de 10 min por mouse (incluindo anestesia). O volume de LCR obtido é dependente da linhagens de camundongos. No PS / APP dupla camundongos Tg usamos 2, o volume médio é de cerca de 5 mL (3-7 mL), enquanto o P301L (JNPL3) ratos 3 dão um rendimento de cerca de 10 ml mL-15. Para a amostragem de série, um máximo de 7-8 mL podem ser tomadas com segurança a cada vez em um intervalo de 2-3 meses. 2. Durante a cirurgia, é importante a posição da cabeça e do corpo do rato de modo adequado no quadro estereotáxico para que a dura-máter da cisterna magna podem ser expostos de forma suficiente. Evitar cuidadosamente os vasos sanguíneos ao penetrar a dura-máter com o tubo capilar para evitar a contaminação das proteínas plasmáticas, que podem ser monitorados na amostra CSF por immunoblotting para ApoB 4. 3. Minimizar o dano tecidual durante cada cirurgia é importante, pois conglutinação tecido pode aumentar a dificuldade de sangramento predisponentes para a amostragem seguinte. 4. A temperatura do corpo precisa ser bem mantido durante a cirurgia porque a hipotermia causada pela anestesia podem afetar significativamente os níveis de tau fosforilada no cérebro muito rapidamente 5. 5. O Ab ELISA protocolo e anticorpos que usamos foram descritos em detalhe no Refolo et al. 6. Dois mL de LCR dos ratos PS / APP dará resultados satisfatórios quando diluído 1:50-1:60. Para o ELISA tau, 4-5 mL de P301L CSF (JNPL3) ratos serão suficientes para odetecção de tau total, ou tau fósforo ylated em treonina 231 (Os kits são comprados de Bio-Source). 6. Esta técnica pode ser aplicada a outros modelos de mouse de doenças neurológicas, para o qual um pequeno volume de LCR é satisfatória para os ensaios desejados.

<ol><li>Liu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+observation+on+CSF+Abeta42+levels+in+young+to+middle-aged+amyloid+precursor+protein%2Fpresenilin-1+doubly+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">Longitudinal observation on CSF Abeta42 levels in young to middle-aged amyloid precursor protein/presenilin-1 doubly transgenic mice.</a> Neurobiol Dis. 17, 516- (2004).</li>
<li>Holcomb, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accelerated+Alzheimer-type+phenotype+in+transgenic+mice+carrying+both+mutant+amyloid+precursor+protein+and+presenilin+1+transgenes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Accelerated Alzheimer-type phenotype in transgenic mice carrying both mutant amyloid precursor protein and presenilin 1 transgenes.</a> Nat Med. 4, 97(1998).</li>
<li>Lewis, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurofibrillary+tangles%2C+amyotrophy+and+progressive+motor+disturbance+in+mice+expressing+mutant+%28P301L%29+tau+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Neurofibrillary tangles, amyotrophy and progressive motor disturbance in mice expressing mutant (P301L) tau protein.</a> Nat Genet. 25, 402- (2000).</li>
<li>DeMattos, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plaque-associated+disruption+of+CSF+and+plasma+amyloid-beta+%28Abeta%29+equilibrium+in+a+mouse+model+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Plaque-associated disruption of CSF and plasma amyloid-beta (Abeta) equilibrium in a mouse model of Alzheimer's disease.</a> J Neurochem. 81, 229(2002).</li>
<li>Planel, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anesthesia+leads+to+tau+hyperphosphorylation+through+inhibition+of+phosphatase+activity+by+hypothermia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Anesthesia leads to tau hyperphosphorylation through inhibition of phosphatase activity by hypothermia.</a> J Neurosci. 27, 3090(2007).</li>
<li>Refolo, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cholesterol-lowering+drug+reduces+beta-amyloid+pathology+in+a+transgenic+mouse+model+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">A cholesterol-lowering drug reduces beta-amyloid pathology in a transgenic mouse model of Alzheimer's disease.</a> Neurobiol Dis. 8, 890(2001).</li>
</ol>

Nós descrevemos um protocolo altamente confiável para a amostragem de série do CSF ​​de ratos sem contaminação plasma detectável. 1. Todo o procedimento geralmente leva de 10 min por mouse (incluindo anestesia). O volume de LCR obtido é dependente da linhagens de camundongos. No PS / APP dupla camundongos Tg nós used2, o volume médio é de cerca de 5 mL (3-7 mL), enquanto o P301L (JNPL3) ratos 3 dão um rendimento de cerca de 10 ml-15 mL. Para a amostragem de série, um máximo de 7-8 mL podem ser tomadas com segurança a cada vez em um ...

a técnica de coleta de líquido cefalorraquidiano serial da cisterna magna em rato

A Technique for Serial Collection of Cerebrospinal Fluid from the Cisterna Magna in Mouse 

Doença de Alzheimer (AD) é uma doença neurodegenerativa progressiva que é patologicamente caracterizada pela deposição extracelular de β-amilóide peptídeo (Aâ) e acúmulo de proteína tau intraneuronais hiperfosforilada. Porque líquido cefalorraquidiano (LCR) está em contato direto com o espaço extracelular do cérebro, que proporciona um reflexo das mudanças bioquímicas no cérebro em resposta a processos patológicos. CSF de pacientes com DA mostra uma diminuição na forma de 42 aminoácidos de Aâ (Aβ42), e aumenta em tau tau total e hiperfosforilada, embora os mecanismos responsáveis ​​por essas alterações ainda não são totalmente compreendidos. Modelos transgênicos (Tg) do mouse do AD uma excelente oportunidade para investigar como e por que níveis Aâ ou tau na mudança CSF como a doença progride. Aqui, nós demonstramos uma refinada técnica de punção da cisterna magna para a CSF de amostragem a partir do mouse. Esta técnica de amostragem extremamente suave permite que as amostras de série CSF a serem obtidos com o mouse mesmo em intervalos de 2-3 meses, que minimiza bastante o efeito de confusão entre mouse-variabilidade nos níveis Aâ ou tau, tornando possível detectar alterações sutis ao longo do tempo. Em combinação com Aâ ELISA e tau, esta técnica será útil para estudos destinados a investigar a relação entre os níveis de CSF Aβ42 e tau, e seu metabolismo no cérebro em modelos de ratos AD. Estudos em camundongos Tg poderia fornecer validação importante quanto ao potencial da CSF Aâ ou níveis de tau para serem utilizados como marcadores biológicos para a progressão da doença, monitorização e para monitorar o efeito de intervenções terapêuticas. Como os ratos podem ser sacrificados e os cérebros podem ser examinados por alterações bioquímicas ou histológicas, os mecanismos subjacentes à alterações do LCR pode ser melhor avaliada. Estes dados são susceptíveis de ser informativo para a interpretação de alterações do LCR humano AD.

Modelos transgênicos (Tg) do mouse do AD uma excelente oportunidade para investigar como e por que níveis Aâ ou tau na mudança CSF como a doença progride em pacientes humanos. Aqui, nós demonstramos uma refinada técnica de punção da cisterna magna para amostragem CSF serial do mouse.

A técnica de coleta de líquido cefalorraquidiano Serial da Cisterna Magna em rato

A doença de Alzheimer (DA) é uma doença neurodegenerativa progressiva que é patologicamente caracterizada pela deposição extracelular de &#946;-amiloide ...

O procedimento começa com a anestesia do camundongo e o preparo do local cirúrgico. Em seguida, o camundongo é posicionado em decúbito ventral no aparelho estereotáxico. Uma incisão sagital da pele é feita abaixo do osso occipital e os tecidos subcutâneos e músculos do pescoço são separados pela linha média por dissecação romba.Em seguida, a parte posterior do corpo é posicionada de modo que o corpo forme um ângulo de 135 graus com a cabeça fixa, a dura-máter do forame magno é penetrada com a micropipeta de vidro e o LCR será coletado. Após a coleta do LCR, os músculos são reposicionados e a pele é suturada; cerca de um mililitro de solução salina 0,9% NaCl é injetado por via subcutânea para prevenir desidratação, e o camundongo é mantido aquecido até sua recuperação. Olá, meu nome é Liu, do laboratório da Dra. Karen Duff no The Top Institute da Universidade Columbia.Hoje vou mostrar como coletar o líquido céfalo-raquidiano do sistema magno do camundongo. Com esta técnica, podemos coletar amostras seriadas de LCR até três vezes do mesmo camundongo, com intervalos de dois a três meses. Em nosso laboratório, utilizamos esta técnica para determinar os níveis de beta amiloide ou tau no

a-technique-for-serial-collection-cerebrospinal-fluid-from-cisterna

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Fonte: Joshi, K., et al. Abordagem cirúrgica estereotáxica para microinjetar o tronco encefálico caudal e a medula espinhal cervical superior através da cisterna magna em camundongos. J. Vis. Exp. (2022)Este vídeo demonstra a abordagem estereotáxica da cisterna magna para entrega direcionada ao tronco encefálico e à medula espinhal superior. Ao acessar a cisterna magna cheia de líquido cefalorraquidiano, essa abordagem permite injeções precisas em áreas de difícil acesso usando métodos...

Abordagem da Cisterna Magna Estereotáxica para Entrega Terapêutica em Modelo de Camundongo

Fonte: Zamboni, M., et al., Indução de modificação de células leptomeníngeas via injeção intracisternal. J. Vis. Exp. (2020)Este vídeo demonstra o procedimento de administração de um medicamento indutor na cisterna magna de um camundongo anestesiado. A injeção induz seletivamente a expressão de marcadores fluorescentes em células da superfície cerebral acessíveis via líquido cefalorraquidiano, confirmado por imagens de fluorescência.

Entrega de medicamentos direcionados em um modelo de camundongo via injeção de cisterna magna

Fonte: Xavier, A. L. R., et al. Implantação de cânula na cisterna magna de roedores. J. Vis. Exp. (2018)Este vídeo demonstra o procedimento para implantar uma cânula na cisterna magna de um camundongo anestesiado. A técnica envolve guiar uma cânula montada em agulha através da dura-máter até a cisterna magna triangular invertida e prendê-la para entrega direcionada no líquido cefalorraquidiano.

Implantação de cânula na cisterna magna em um modelo de camundongo

Neste vídeo, descrevemos o procedimento para entregar células tumorais derivadas de humanos na cisterna magna do cérebro de um camundongo. O modelo de camundongo ortotópico pode ser usado para estudar a disseminação metastática do câncer para as meninges cranianas.

Injeção Cirúrgica de Cisterna Magna: Um Método para Administração de Células Tumorais Diretamente no Sistema Nervoso Central do Modelo Murino

Fonte: Sweeney, A. M., et al. Imagem in vivo do transporte de líquido cefalorraquidiano através do crânio intacto do camundongo usando macroscopia de fluorescência. J. Vis. Exp. (2019)Este vídeo demonstra o processo de visualização do fluxo do líquido cefalorraquidiano (LCR) no cérebro de um camundongo usando imagens de fluorescência. Um traçador fluorescente é injetado na cisterna magna (MC), permitindo que seu movimento com o LCR seja rastreado através dos espaços subaracnóideo e perivascular.

Imagens in vivo do transporte de líquido cefalorraquidiano em um cérebro de camundongo usando macroscopia de fluorescência

Este protocolo descreve uma técnica melhorada para a coleção abundante de líquido cerebrospinal (CSF), sem contaminação de sangue. Com a maior coleção de amostra e pureza, mais análises podem ser executadas usando o CSF para aprofundar nossa compreensão das doenças que afetam o cérebro e a medula espinhal.

Um método melhorado para coleta de líquido cefalorraquidiano de ratos anestesiados

Aqui descrevemos um protocolo para realizar a cateterização da cisterna magna (CMc), uma forma minimamente invasiva para entregar traçadores, substratos e moléculas sinalizadoras no fluido cerebrospinal (CSF). Combinado com diferentes modalidades de imagem, CMc permite sistema de glymphatic e avaliação de dinâmica do CSF, bem como a entrega de todo o cérebro de vários compostos.

Cânula de implantação para a Cisterna Magna de roedores

A imagem latente ótica de Transcranial permite a imagem latente do largo-campo do transporte do líquido cerebrospinal no córtice de ratos vivos através de um crânio intacto.

In vivo Imaging do transporte de fluido cefalorraquidiano através do crânio do rato intacto usando fluorescência macroscopia

Níveis elevados de proteína do fluido espinhal podem ser o resultado da difusão da proteína plasmática através de uma barreira hemato-cerebral alterada ou síntese intratérica. Um protocolo de teste otimizado é apresentado neste artigo que ajuda a discriminar ambos os casos e fornece medições quantitativas de proteínas sintetizadas intrathecally.

Medição quantitativa de proteínas sintetizadas intrathecally em camundongos

A cirurgia estereotaxa para atingir locais cerebrais em camundongos geralmente envolve acesso através dos ossos do crânio e é guiada por marcos do crânio. Aqui descrevemos uma abordagem estereotaxa alternativa para atingir o tronco cerebral caudal e a medula espinhal cervical superior através da cisterna magna que se baseia na visualização direta de marcos do tronco cerebral.

Abordagem Cirúrgica Estereotaxic para Microinpor o Tronco Cerebral Caudal e Medula Espinhal Cervical Superior através da Cisterna Magna em Camundongos

Aqui, é apresentado um protocolo para avaliar os vasos linfáticos meníngeos (MLVs) de camundongos, que desempenham um papel importante em múltiplas doenças neurológicas. O objetivo desse protocolo é fornecer um método integrado que permita tanto a avaliação funcional da drenagem dos traçadores quanto a caracterização morfológica detalhada da rede de MLVs dorsais.

Protocolo Integrado para Avaliação de Linfáticos Meníngeos: Injeção de Cisterna Magna, Imagem de Linfonodos, Dissecção Meníngea e Coloração em Montagem Inteira

Aprenda a técnica refinada de coleta serial de líquido cefalorraquidiano da cisterna magna em camundongos transgênicos. Este método permite monitorar biomarcadores de Alzheimer longitudinalmente.

A técnica de coleta de líquido cefalorraquidiano Serial da Cisterna Magna em rato

Explorar mais vídeos