Деление клеток

КонцепцииПодготовка преподавателяПротокол студента
0 просмотров05:44 мин
Print Procedure Steps
Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Наблюдение за циклом клеток в корневом кончике
    • Гипотезы: Экспериментальная гипотеза заключается в том, что в срезах кончиков корней, которые были обработаны нокодазолом, химическим веществом, препятствующим полимеризации микротрубок, все клетки будут остановлены на одной и той же стадии клеточного цикла, и что в необработанных срезах кончиков лука будут визуализированы все различные стадии клеточного цикла. Нулевая гипотеза заключается в том, что между двумя группами не будет различий в митозе и что будут визуализированы разные стадии клеточного цикла.
    • Для подготовки к этому эксперименту вы будете использовать луковицу, которую поместили в воду на несколько дней, пока не начнут прорастать новые белые кончики корней. Лезвием бритвы отрежьте кусок длиной 1 см от конца одного из кончиков корня.
    • Поместите ломтик лука в микроцентрифужную пробирку с маркировкой "N" для состояния нокодазола.
    • Затем отрежьте второй кусок корня лука размером 1 см и поместите его в микроцентрифужную пробирку с маркировкой "C" для контрольного состояния.
    • Добавьте 2 μL из 5 мг/мл нокодазола в 1 мл воды в микроцентрифужной пробирке с маркировкой N и 1 мл воды только в пробирку с маркировкой C.
    • Оставьте пробирки с кончиками корней для инкубации на 12 часов и протрите рабочее место 70% этанолом.
    • Когда инкубация завершена, установите тепловой блок на 60 ºC.
    • Промойте обработанные нокодазолом кончики водой, а затем аспирируйте жидкость.
    • Повторите эту стирку еще два раза, всего три стирки.
    • Наполните обе пробирки 1 мл одной нормальной соляной кислоты. Инкубируйте пробирки в термоблоке при температуре 60 ºC в течение 12–15 минут, затем выбросьте кислоту в отработанную колбу.
    • Теперь добавьте 1 мл дистиллированной воды в пробирки по крайней мере три раза, чтобы промыть образцы.
    • Теперь добавьте один микролитр красителя DAPI к 10 мл фосфатно-солевого буфера (PBS).
    • Затем поместите 50 μL этого разбавленного красителя DAPI в каждую пробирку и оставьте их при комнатной температуре для инкубации в течение 12 минут.
    • После этого выполните три промывки дистиллированной водой, как в шаге 10.
    • Пометьте одно предметное стекло микроскопа как "Контроль", а другое как "Нокодазол".
    • Перенесите окрашенные корни на соответствующие предметные стекла микроскопа и добавьте каплю воды на предметное стекло и каплю нокодазола на предметное стекло.
    • Используйте лезвие бритвы, чтобы удалить незапачканные части каждого кончика корня и наложите стеклянную крышку на каждый образец.
    • Осторожно надавите на каждый лист обложки кончиком пальца в перчатке, а затем оставьте слайды на 10 минут.
    • Наконец, просмотрите слайды под объективом 40X флуоресцентного микроскопа и сделайте снимки препаратов клеток верхушки корня.
  2. Понимание потери контроля над клеточным циклом <кнопка class="expand">Expand
    • ПРИМЕЧАНИЕ: Прежде чем клетки смогут пройти через все стадии клеточного цикла, они должны пройти через несколько контрольных точек. Эти контрольные точки регулируются циклиновыми и циклин-зависимыми киназными белками, или CDK. Если циклины и CDK определят, что предыдущие клеточные события не были адекватно завершены, они остановят клетки на этом этапе и предотвратят их пролиферацию. В раковых клетках один или несколько из этих молекулярных ограничений для регуляции клеточного деления теряются, и это позволяет поврежденным клеткам выйти из-под контроля пролиферации. Эти аномальные клетки развиваются в опухоли, которые представляют собой массы неконтролируемых пролиферирующих клеток, нарушающих нормальные функции организма. Обратите внимание, как перед делением эта раковая клетка очень сильно округляется и преломляет свет под световым микроскопом. Это связано с тем, что не все раковые клетки успешно делятся на дочерние клетки после каждого раунда митоза. Это означает, что они часто содержат избыток органелл и ДНК, и это увеличение клеточного содержания означает, что они будут преломлять свет более интенсивно, чем это делают нормальные клетки.
  3. Результаты
    • Изучите свои собранные изображения и запишите в Таблицу 1 различные клеточные структуры и стадии, которые можно было бы идентифицировать в ломтике луковицы, обработанном нокодазолом. Нажмите здесь, чтобы скачать таблицу 1
    • Если есть клетки, претерпевающие митоз, обратите внимание, какие стадии деления клеток вы видите.
    • Запишите процент клеток на каждой стадии митоза в таблице 1.
    • Далее изучите изображения необработанного ломтика луковицы и запишите, какие клеточные структуры вы можете идентифицировать.
    • Если есть какие-либо клетки, проходящие митоз, подумайте, какие стадии деления клеток вы видите, и запишите проценты клеток на каждой стадии митоза в таблице 1.

Browse More Videos

CDK