Гипотезы: Экспериментальная гипотеза заключается в том, что в срезах кончиков корней, которые были обработаны нокодазолом, химическим веществом, препятствующим полимеризации микротрубок, все клетки будут остановлены на одной и той же стадии клеточного цикла, и что в необработанных срезах кончиков лука будут визуализированы все различные стадии клеточного цикла. Нулевая гипотеза заключается в том, что между двумя группами не будет различий в митозе и что будут визуализированы разные стадии клеточного цикла.
Для подготовки к этому эксперименту вы будете использовать луковицу, которую поместили в воду на несколько дней, пока не начнут прорастать новые белые кончики корней. Лезвием бритвы отрежьте кусок длиной 1 см от конца одного из кончиков корня.
Поместите ломтик лука в микроцентрифужную пробирку с маркировкой "N" для состояния нокодазола.
Затем отрежьте второй кусок корня лука размером 1 см и поместите его в микроцентрифужную пробирку с маркировкой "C" для контрольного состояния.
Добавьте 2 μL из 5 мг/мл нокодазола в 1 мл воды в микроцентрифужной пробирке с маркировкой N и 1 мл воды только в пробирку с маркировкой C.
Оставьте пробирки с кончиками корней для инкубации на 12 часов и протрите рабочее место 70% этанолом.
Когда инкубация завершена, установите тепловой блок на 60 ºC.
Промойте обработанные нокодазолом кончики водой, а затем аспирируйте жидкость.
Повторите эту стирку еще два раза, всего три стирки.
Наполните обе пробирки 1 мл одной нормальной соляной кислоты. Инкубируйте пробирки в термоблоке при температуре 60 ºC в течение 12–15 минут, затем выбросьте кислоту в отработанную колбу.
Теперь добавьте 1 мл дистиллированной воды в пробирки по крайней мере три раза, чтобы промыть образцы.
Теперь добавьте один микролитр красителя DAPI к 10 мл фосфатно-солевого буфера (PBS).
Затем поместите 50 μL этого разбавленного красителя DAPI в каждую пробирку и оставьте их при комнатной температуре для инкубации в течение 12 минут.
После этого выполните три промывки дистиллированной водой, как в шаге 10.
Пометьте одно предметное стекло микроскопа как "Контроль", а другое как "Нокодазол".
Перенесите окрашенные корни на соответствующие предметные стекла микроскопа и добавьте каплю воды на предметное стекло и каплю нокодазола на предметное стекло.
Используйте лезвие бритвы, чтобы удалить незапачканные части каждого кончика корня и наложите стеклянную крышку на каждый образец.
Осторожно надавите на каждый лист обложки кончиком пальца в перчатке, а затем оставьте слайды на 10 минут.
Наконец, просмотрите слайды под объективом 40X флуоресцентного микроскопа и сделайте снимки препаратов клеток верхушки корня.
