Мутагенез in vitro

ученые могут деактивировать или нокаутировать"ген у животных, как правило, мышей, чтобы узнать больше о функции гена, обычно путём замены целевым вектором, специально сконструированной частью ДНК. Целевой вектор имеет последовательности, которые являются гомологичными, идентичными последовательностям до и после гена. Обычно в нем есть также положительный маркер выбора, такой как ген устойчивости к неомицину, NeoR, в середине, и отрицательный маркер выбора, подобно гену для тимидин-киназы, ТК, на одном конце.

При вводе в эмбриональный ствол клетки, он заменяет ген через гомологичную рекомбинацию, которая происходит естественным образом между участками ДНК с аналогичными последовательностями. Клетки, где ген был правильно заменён, будет содержать положительный маркер, но не отрицательный, чтобы их можно было идентифицировать в культуре. Затем эти клетки вставляются в эмбрион мыши и имплантируются в матку самки.

Получившаяся мышь имеет комбинацию обычных клеток и клеток с выбитым геном на одной хромосоме. Затем этих мышей разводят, чтобы создать так называемые нокаут-мышей, которые гомозиготны по нокауту во всех клетках.