Выделение ДНК

ДНК необходимо выделять из клеток и разрезать в точных местах для многих применений, таких как технология рекомбинантной ДНК.

Хотя для разных типов клеток используются разные типы методов экстракции ДНК, есть три стандартных этапа: лизис клеток, удаление белка и восстановление ДНК.

Внутри эукариотических клеток ДНК упакована в ядро. Таким образом, как клеточная мембрана, так и ядерная мембрана должны быть разорваны, чтобы изолировать ДНК.

Этот этап может быть выполнен механическим путем путем разрушения клеток путем шлифовки или ультразвуковой обработки, или химическим путем с использованием моющих средств и ферментов для растворения частей клеточной мембраны.

После того, как содержимое клеток высвобождается, мусор отделяется от растворимых компонентов с помощью центрифугирования. Восстановленная надосадочная жидкость содержит нуклеиновые кислоты и водорастворимые белки.

Для удаления белков в надосадочную жидкость добавляют ферменты, такие как протеиназа К, пептидаза или лизоцим, чтобы разорвать пептидные связи.

ДНК извлекается из надосадочной жидкости путем осаждения путем добавления спирта и соли, такой как ацетат натрия.

Выделенный осадок растворяют в воде или буфере.