Принципы колоночной хроматографии

Колоночная хроматография — это биохимический метод, используемый для разделения соединений на основе их физических и химических свойств.

Он состоит из двух основных компонентов — твердой неподвижной фазы или матрицы и жидкой подвижной фазы или растворителя.

В матричную колонку загружается образец, например, белковая смесь. Затем растворитель используется для переноса образца через колонну.

Внутри колонки матрица действует как молекулярная сетка, фильтрующая белки в зависимости от их размера или взаимодействия с матрицей. Более крупные белки, как правило, перемещаются быстрее, чем более мелкие, что приводит к разделению по размеру.

Кроме того, белки в образце могут взаимодействовать с матрицей. Слабые взаимодействия позволяют белкам быстро проходить, в то время как сильные взаимодействия удерживают белки внутри колонки.

Постепенное изменение pH или ионной силы растворителя изменяет взаимодействие белков с матрицей и помогает элюировать белки в отдельные фракции.