Флуоресцентная микроскопия полного внутреннего отражения

Флуоресцентная микроскопия с полным внутренним отражением, или TIRF, избирательно визуализирует флуоресцентные молекулы в образце вблизи твердой поверхности с более высоким показателем преломления, такой как стеклянное покровное стекло.

Возбуждающий лазерный луч попадает на покровное стекло под критическим углом, что приводит к полному внутреннему отражению луча.

Отраженный свет не попадает в образец, но создает узкое электромагнитное поле или затухающую волну, которая освещает флуорофоры только в пределах от 100 до 200 нанометров от поверхности клетки.

Поскольку затухающая волна быстро затухает по мере продвижения дальше в образец, большинство фоновых флуорофоров не возбуждаются. Таким образом, полученные изображения нескольких помеченных флуорофорами белков вблизи твердой поверхности получаются четкими и четкими.

TIRF обычно используется для визуализации живых клеток, например, для изучения движения моторных белков, таких как кинезин, по микротрубочкам, прикрепленным к покровному стеклу.