Флуоресцентная микроскопия сверхвысокого разрешения

Обычная флуоресцентная микроскопия может разрешать структуры только на расстоянии более 200 нм. Это связано с тем, что под микроскопом дифракция света заставляет флуоресцентные молекулы выглядеть как размытые пятна, а не как острые точки. В результате, когда объекты находятся очень близко друг к другу, их изображения накладываются друг на друга.

Поэтому ученые разработали методы сверхвысокого разрешения, которые обеспечивают лучшее разрешение для изображения даже небольших субклеточных структур. Эти методы преодолевают дифракционные пределы, используя определенные световые паттерны для возбуждения флуорофоров в образце.

Например, в микроскопии структурированного освещения используется полосатый рисунок, который затем вращается для получения нескольких изображений. Изображения объединяются, создавая интерференционную картину, которая обрабатывается с помощью вычислений для создания окончательного изображения.

С помощью микроскопии с вынужденным истощением эмиссии создается узор с помощью двух лазеров. Первичный лазер возбуждает образец, в то время как луч в форме пончика подавляет флуоресценцию вокруг него, заставляя флуоресцентную точку казаться меньше.

Другие методы позволяют избежать наложения сигналов за счет использования флуоресцентных датчиков, которые можно включать и выключать. Для каждого изображения активируется только несколько зондов, что сводит к минимуму перекрытие сигнала и позволяет локализовать одну флуоресцентную молекулу.

Многие из этих изображений могут быть объединены в одно составное изображение с высоким разрешением.