11.1
Хроматографические методы: терминология
Хроматография — это аналитический метод, широко используемый в таких областях, как химия, биология, экология и фармацевтика, для разделения компоненто…
Хроматография разделяет и идентифицирует компоненты путем их распределения между неподвижной фазой, которая обычно упакована в поддерживающий материал или прикреплена к нему, и подвижной фазой, которая движется вдоль или через неподвижную фазу.
Когда присутствует более одного компонента, образуются полосы, которые могут быть количественно определены на хроматограмме с помощью детектора.
Реакция детектора на такие параметры, как концентрация растворенного вещества, построенная в зависимости от времени элюирования или объема, дает серию пиков, называемых хроматограммой.
Время, прошедшее от впрыска смеси до пиковой реакции детектора на аналит, является временем удержания аналита, а объем подвижной фазы, необходимый для элюирования аналита, является его объемом удержания.
Ширина у основания хроматографического пика, или ширина полосы пропускания, измеряется на базовой линии между касательными к точкам перегиба по бокам пика.
Еще одним важным понятием является разрешение пиков, измеряющее расстояние между двумя соседними пиками по отношению к ширине их пиков у основания.
Кроме того, коэффициент удержания, или коэффициент емкости, измеряет распределение аналита между стационарной и подвижной фазами.
View the full transcript and gain access to JoVE Core videos
Q1: What are the stationary phase and mobile phase in chromatography?
The stationary phase is a fixed material packed in or attached to a supporting structure, while the mobile phase moves along or through it, carrying solutes. As the mobile phase travels, it interacts differently with each mixture component, causing their separation based on distinct interactions with both phases.
Q2: How is retention time different from retention volume?
Retention time is the duration elapsed from sample injection until the detector responds to an analyte peak, while retention volume is the volume of mobile phase required to elute that analyte. Retention time is calculated by dividing retention volume by the mobile phase flow rate.
Q3: What does a chromatogram show and how is it produced?
A chromatogram is a series of peaks produced when detector response to solute concentration is plotted against elution time or volume. The detector generates a signal as separated components pass through, creating distinct peaks that represent individual analytes in the mixture.
Q4: What is the retention factor and why does it matter?
The retention factor, also called the capacity factor, measures how an analyte distributes between the stationary and mobile phases. It quantifies the ratio of time the analyte spends in the stationary phase compared to the mobile phase, helping characterize separation behavior and analyte interactions.
Q5: How is peak resolution measured in chromatography?
Peak resolution measures the separation of two adjacent peaks relative to their baseline widths, reflecting how well mixture components are distinguished from one another. Higher resolution indicates better separation between peaks in the chromatogram, which is critical for accurate analyte identification and quantification.
Q6: What is bandwidth and how is it measured?
Bandwidth, or peak width, is the width of a chromatographic peak measured at its baseline between tangent lines drawn to the inflection points on both sides of the peak. This measurement is essential for calculating peak resolution and assessing separation quality.
Q7: What is void time and void volume in chromatography?
Void time is the duration required for unretained solutes to elute from the chromatography system, while void volume is the corresponding amount of mobile phase needed for this elution. These parameters establish the baseline for calculating retention times and volumes of retained analytes.