Этот протокол свидетельствует о том, как выполнить иммуногистохимии на расчлененный личинки дрозофилы.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Дрозофилы личинок NMJ Immunohistochemistry
В этой статье
Краткое содержание
Протокол
Перед тем как начать
- Подготовьте следующие решения: PBT (0,1% Triton X100 в 1X PBS), PBTB (0,2% BSA в PBT) и PBTN (2% в PBTB NGS).
- Рассеките дрозофилы личинок. Пожалуйста, смотрите дрозофилы личинок NMJ Dissection.
Иммуногистохимия
- Перемещение личинок 1,5 мл пробирку PBT. Вымойте личинки дважды за 15 минут в PBT. Примечание: для стирки, места 1,5 мл трубки на nutator смесителя. Удалите жидкость с pippetor и заменить его свежей жидкостью.
- Удалить PBT. Стирать в PBTB два раза в течение 30 минут.
- Удалить PBTB. Стирать в PBTN два раза в течение 15 минут. ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Иммуногистохимии (IHC) имеет жизненно важное значение для изучения NMJ биологии, поскольку она позволяет визуализировать NMJ. Это достигается с помощью антител, которые распознают нейронной мембраны (например, HRP), presynapse (например, CSP, SYT), и / или postsynapse (например, DLG). Сигнальных молекул, структурных белков, или новых белков интерес может также быть окрашены. Затем, гены могут быть мутировал или missexpressed и IHC может обнаружить возмущение синаптической структуре и / или нейронных сигналов.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Стереомикроскоп “Stemi” 2000 | Carl Zeiss, Inc. | 495101-9804-000 | |
| Источник света KL 1500 LCD | Carl Zeiss, Inc. | 000000-1063-181 | |
| Пинцет Dumont SS | Fine Science Tools | 11200-33 | |
| Пинцет Dumont №5 | Fine Science Tools | 11252-20 | |
| Нутаторный миксер Adams™ | BD Biosciences | 421105 | |
| Прецизионный нож №1 | X-Acto | 3201 | |
| Лезвия №16 | X-Acto | 216 | |
| Реагент ProLong Gold Antifade | Invitrogen | 36930 |
Ссылки
- Jan, L. Y., Jan, Y. N. Properties of the larval neuromuscular junction in Drosophila Melanogaster. J. Physiol. 262, 189-214 (1976).
- Johansen, J., Halpern, M. E., Johansen, K. M., Keshishian, H. Stereotypic morphology of glutamatergic synapses on ident....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
