В этом видео показано, как на этикетке и визуализировать один синаптических пузырьков экзоцитоза и торговлей золотыми рыбками биполярных клеток сетчатки использованием полного внутреннего отражения флуоресценции (TIRF) микроскопии.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Изображений экзоцитоза в клетки сетчатки Биполярный с Микроскопия TIRF
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Полное внутреннее отражение флуоресценции (TIRF) микроскопия является метод, который позволяет изучать события, происходящие на клеточную мембрану, селективного изображений флуоресцентных молекул, которые находятся ближе всего к высоким показателем преломления вещества, такие как стекло
Протокол
Часть 1: Разбор и изоляции Биполярный сотовый
- Подготовка решений, перечисленных в таблице 2; рН звонков "(внешний) решения должны быть скорректированы до 7,4 с NaOH и рН внутреннего решения должны быть скорректированы до 7,2 с CsOH. Защита внутреннего решения от света с алюминиевой фольгой и хранить его при температуре 4 ° С до использования;
- Темно-адаптировать золотая рыбка, по крайней мере за 30 минут до вскрытия;
- Хотя животное темно-адаптируется, готовить 5 мл гиалуронидазы (тип гиалуронидазы V, 1100 ед / мл в странах с низким Ca 2 + Рингера; Sigma, Сент-Луис, Миссури) и 10 мл L-цистеина (0,5 мг / мл в странах с низким Ca ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Преимущества объективного типа микроскопии TIRF в том, что 1) он обеспечивает отличные оптические секционирования, ограничивая возбуждающего света к узкой области в фокальной плоскости объектива, тем самым минимизируя вне фокусировать свет, 2), поскольку световые капли экспоненциально с расстоянием , движение в вертикальном направлении можно контролировать как изменение интенсивности флуоресценции, 3) эффективного сбора света через высокой числовой апертуре объектива 1,5.
Основным недостатком метода является то, оно огран.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Благодарности
Эта работа была поддержана NIH Грант EY 14990.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Ссылки
- Axelrod, D. Total internal reflection fluorescence microscopy in cell biology. Traffic. 2, 764-774 (2001).
- Zenisek, D., Steyer, J. A., Almers, W. Transport, capture and exocytosis of single synaptic vesicles at active zones. Nature. 406, 849-854 (2000).<....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
