Аортального кольца Пробирной

Summary

Ангиогенез, прорастание кровеносных сосудов из уже существующих сосудистой сети, связано как с естественными и патологических процессов. Здесь мы показываем, аортального кольца анализа, который позволяет ангиогенных усилителей и ингибиторов быть непосредственно добавлен аортального кольца в культуре. Проросшие и neovessel результат может быть определена путем проверки аортального кольца в течение 6-12 дней.

Abstract

Ангиогенез, прорастание кровеносных сосудов от существующего сосудистой связано как с естественными и патологических процессов. Различные тесты ангиогенеза включать изучение отдельных эндотелиальных клеток в культуре условий (1). Анализ аортального кольца ангиогенеза модель, которая основана на органе культуры. В данном анализе ангиогенных судов растут из сегмента аорты (с изменениями от (2)). Короче говоря, мышь грудной аорты иссекается, жирового слоя и адвентиции удаляются, и кольца примерно на 1 мм в длину готовы. Индивидуальные кольца, то встроенных в мелких твердых купол подвале матрицы экстракт (BME), литые внутри отдельных скважинах 48-луночного планшета. Ангиогенных факторов и ингибиторов ангиогенеза может быть непосредственно добавлен в кольца и смешанных со-культуры аортального кольца и другие типы клеток могут быть использованы для изучения паракринной ангиогенных эффектов. Проращивание наблюдают инспекции в соответствии с стереомикроскопа в течение 6-12 дней. Из-за большого изменения вызваны нарушениями в сегментах аорты, экспериментирование в 6-усложняет настоятельно рекомендуется. Neovessel продукт контролируется в течение всего эксперимента и отображаемого с использованием фазовых микроскопии и супернатанты собирают для измерения соответствующих ангиогенных и анти-ангиогенных факторов, гибель клеток маркеры и нитритов.

Protocol

За день до эксперимента:

1. Разрешить BME (уменьшение фактора роста, Cultrex, Trevigen) таять на льду или при температуре 4 ° С; После оттаивания держать на льду, чтобы предотвратить повторное затвердевание.

День эксперимент:

1. Мыши (6-7 недель) должны быть под наркозом, и кровь из.
2. Удаление грудной аорты в чашку Петри заполнены холодной стерильной PBS.
3. Выполните механическую очистку от окружающей жировой ткани. Обратите внимание, во избежание высыхания аорты в любое время.
4. Использование хирургического лезвия, ломтик аорты равномерно в 1 кольца мм. Срез должен быть однородным и чистым. ....

Discussion

Аортального кольца анализ является полезным инструментом на пути к оценке ангиогенеза, а также анти-ангиогенных факторов. Судов, которые растут из аортального кольца набирать гладкомышечных клеток и перицитов общаться с эндотелиальной трубки клетка, а это означает, что они похожи на анатомически neovessels в естественных условиях. Кроме того, кольца аорты мыши анализа держит преимущество широкий спектр трансгенных инструментов, доступных для данного вида. Тем не менее, Есть несколько недостатков аорты анализа к.......