В этом видео-работе предлагается метод выделения и очистки Drosophila Периферические нейроны с помощью быстрого магнитного бусинка помощь стратегию сортировки клеток. РНК получена из изолированных клеток могут быть легко использованы для последующих применений, включая микрочипов анализа.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Выделение и очистка Drosophila Периферийные Нейроны магнитными бисера Сортировка
В этой статье
Краткое содержание
Протокол
Общие замечания по Магнитные бисера Сортировка дрозофилы нейроны периферийных (Всего Сроки завершения протокола: 2,5-3 часа)
Стандартные процедуры лабораторию для поддержания чистой, свободной РНКазы среды должны соблюдаться во все времена для предотвращения деградации РНК.
Когда кутикулы дрозофилы личиночной изрезана и помещен в буфер клеточной диссоциации, периферические нейроны являются одним из последних клетки отделяются от кутикулы. Мы использовали это свойство и предназначен этот протокол для удаления большей части неспецифические клетки кутикулы, таких как мышцы и жир до изоляции да н....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Протокол, представленные здесь, оптимизированная для выделения и очистки периферических нейронов, которые придерживаются сильно, чтобы внутренняя поверхность дрозофилы третьего возраста личиночной кутикулы с помощью магнитного бусинка стратегии сортировки клеток. Хотя мы использовали этот протокол специально выделить дрозофил да нейронов, применение этого протокола в отрыве от других типов клеток, которые придерживаются кутикулы в личиночной или куколки стадиях развития (например, эпителия, мышц, других периферийных ней.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Благодарности
Мы благодарим доктора. Yuh-Нунг Ян и Уэс Grueber за предоставление летать запасы, используемые в данном исследовании. Авторы признают, Томас Ф. и Кейт Миллер Джеффресс Мемориального Фонда за поддержку этого исследования (РСК) и Управления Университета Джорджа Мейсона благочинного (EPRI).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
Оборудование
- (10) неодимовые магниты блока (K & J Magnetics, Inc, Кат. # B444B), в качестве альтернативы DynaMag ™ -2 (Invitrogen, Кат. # 123-21D), могут быть использованы.
- Kontes стеклоткани шлифовальная, 2 мл работоспособность, с большим пестиком просвет (кат. # 885300-0002)
- Сотовые фильтры, например, MACS Предварительное разделение фильтр (Miltenyi Biotec, Кат. # 130-041-407)
- 35 мм чашках Петри покрытые Sylgard (Dow Corning Corporation, Кат. # 3097358-1004)
- Пройдя инструменты: две пары Дюмон № 5 щипцы (Fine инструменты Наука, Cat # 11251-20.)
- Vannas весной микро-рассечение ножницами (Fine инструменты Наука, Кат. # 15000-08)
- Пипетки (Р-1000, Р-100, Р-10) со сменными наконечниками
- Стандартный гемоцитометра рассчитывать клеток и оценки чистоты
- Пастера пипетки с огнем полированные советы стандартного диаметра, сократился до ~ 50% от стандартного диаметра и сужается до ~ 25% от стандартного диаметра для растирания
- Столешница микро-центрифуга (1-16,000 (х) г)
- Вихревой
- Флуоресцентные стерео-микроскопа (Leica MZ16FA была использована в данном протоколе)
Ссылки
- Corty, M. M., Matthews, B. J., Grueber, W. B. Molecules and mechanisms of dendrite development in Drosophila. Development. 136, 1049-1061 (2009).
- Parrish, J. Z., Emoto, K., Kim,, Jan, Y. N. Mechanisms that regulate establishment, maintenance, and remodeling o....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
