$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Часть 1: Подготовка рабочего поля
- Операционной поле дезинфицируют 75% изопропилового спирта.
- Убедитесь, что грелку включен и при правильной температуре. Рекомендуется система Гаймар оборотной воды насос, подключенный к терапии площадку, которая поддерживается на уровне 37 ° C ± 1 ° C. Важно, чтобы поддерживать нормальную температуру тела во время операции, чтобы избежать быстрого уменьшения частоты сердечных сокращений.
- Хирургические инструменты стерилизуются в горячий шарик стерилизатор до операции. Для этой процедуры вам понадобятся следующие хирургические инструменты: тупой стороной ножниц, конечно изогнутых щипцов X 2, штраф 45 ° угловой пинцет X 2, угловые ножницы весной, груди втягивающим и иглодержателя.
- Хлопок аппликаторы должны быть под рукой в случае кровотечения.
Часть 2: Подготовка и интубации мышей
- Мыши под наркозом в индукции камера с 2% изофлуран смешать с 0,5 -1,0 л / мин 100% O 2.
- Приборы для стрижки и используются для бритья меха от шеи до середины уровня груди.
- Мышь находится в лежачем положении на вершине грелку для поддержания температуры тела.
- Резинка находится над передней животного с зубами, чтобы продлить шеи. Использование изогнутых щипцов в одной руке, язык мягко манипулировать в сторону. С другой стороны, интубация трахеи выполняется с помощью PE 90 трубок. Эндотрахеальной трубки затем подключается к Гарвардского объемно-циклическое грызунов вентилятор езда на велосипеде на 125-150 вдохов / мин и дыхательный объем 0,1-0.3ml. Во время хирургической процедуры, анестезия поддерживается на уровне 1,5-2% изофлуран с 0,5 - 1,0 л / мин 100% O 2. Правильный уровень анестезии проверяется путем давления на кровати мышью ногтя (носок-пинча рефлекс).
- Хирургическое поле дезинфицируют бетадин решение затем 70% спирта. Эта процедура повторяется три раза.
- Для предотвращения загрязнения операционного поля во время операции, стерильные драпировка находится над мышью, оставляя только операционного поля подвергаются.
- Набор стерильных перчаток используется для каждой отдельной мыши.
Часть 3: Лигирование Поперечная аорты
- Частичное торакотомии на второй ребра проводится под хирургический микроскоп и грудины отказался от использования груди втягивающего устройства.
- Изобразительное наконечник 45 ° угловой щипцов используются, чтобы мягко отдельных вилочковой железы и жировой ткани от дуги аорты.
- После выявления поперечных аорты, небольшой кусочек шелка 6,0 шва помещается между безымянным и левой сонной артерии (рис. 1).
- Две свободные узлы связаны вокруг поперечной аорты и небольшой кусочек 27 ½ калибр тупой иглой, расположенный параллельно поперечной аорты. Первый узел быстро связали с иглой, а затем второй и иглы оперативно удалены, чтобы выход сужение 0,4 мм в диаметре. У мышей мнимого контроля, вся процедура идентичны, за исключением перевязки аорты.
- Втягивающим груди удаляют, а отток вентилятор щипал от 2 секунды для повторного раздувать легкие.
- Грудная клетка закрыт с помощью 6,0 проленовой шва с прервано швом узор.
- Кожа закрыт с помощью 6,0 проленовой шва с непрерывным швом узор.
Часть 4: послеоперационной реабилитации
- Для послеоперационного обезболивания, мыши вводили бупренорфин (0,1 мг / кг) внутрибрюшинно. Если Есть признаки обезвоживания после операции, стерильного физиологического раствора дается внутрибрюшинно.
- Анестезия постепенно снижен до выключенном положении и эндотрахеальной трубки удаляются, когда признаки спонтанного дыхания происходит.
- Мышь перемещается в положении лежа и позволил восстановить на грелку.
Часть 5: Подтверждение успешного Лигирование Поперечная аорты
- Через неделю после TAC, мышь снова под наркозом, чтобы определить степень давления перегрузки индуцированных перевязки поперечных аорты. Как описано выше, анестезия поддерживается на уровне 1,5-2% изофлуран с 0,5 - 1,0 л / мин 100% O 2 и температура тела поддерживается на уровне 37 ° C ± 1 ° C.
- 20 МГц доплеровский зонд находится на левой и правой стороны шеи на угол 45 ° для обнаружения скорости потока. Компьютерные доплеровского сигнальный процессор (Инд инструменты, Хьюстон, Техас) был использован для отображения и хранения доплеровский сигналов. 5
- В зависимости от степени давления перегрузки, необходимые для экспериментального протокола, только мыши с правой сонной (RC) / левой сонной (LC) поток соотношение в пределах определенного диапазона включены для дальнейшего анализа. Например, умеренная степень давления приводит к перегрузке Отношение 5-8, в то время как жесткие сужение в результате чего тяжелые перегрузки давления приводит тО. А. Отношение 8-10 (рис. 5.3а). Животных Шама (работает, но не лигируют), однако, ожидается, что отношение ~ 1 (рис. 5.3B).
6: Представитель Результаты
Типичных хирургических выживаемость после TAC в мышей дикого типа составляет около 80-90%. Успешное хирургическое лигирование поперечной аорты приведет к доплеровской скорости потока соотношение между правой и левой сонной артерии (RC / LC) в 5-10 (рис. 1). По сравнению с ложнооперированных мышей (рис. 2А), мышей с давлением перегрузки, как ожидается, разработка гипертрофии сердца в течение 1-2 недель, и сердечной дилатации через 6-8 недели, в зависимости от герметичности сужение (рис. 2В). Смертность в течение первого месяца после TAC, как правило, низкое (<20%) в мышей дикого типа, хотя генетически модифицированных мышей могут проявлять различные показатели выживаемости. 6,7
Рисунок 1. Подтверждение Поперечная Лигирование аорты использованием доплеровского измерения скорости. Представителю доплеровской скорости сигналов право (RC) и левой сонной (LC) артерий 6 дней после TAC. Эти записи демонстрируют успешное перевязки с RC / LC потоком отношение ~ 6.8. Пожалуйста, нажмите здесь , чтобы видеть большую версию рисунке 1.
Рисунок 2. Представитель Всего изображений сердца После TAC. . Шам управлением диких сердцем тип мыши. B. Дикие сердцем мыши тип 16 недель после TAC. Каждая строка = 1 мм.
