Пластиковые разделы сохранить истинный морфологии ткани в тонких срезов тканей, которые могут быть immunostained с люминесцентными вторичными антителами, что делает этот метод более полезным, чем парафин или замороженных срезов для многих типов тканей. Метод окрашивания, пластик вложение и секционирования показано в этом видео.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Пластиковые вложения и секционирования Xenopus laevis Эмбрионы
В этой статье
Краткое содержание
Протокол
Фиксация
- Передача целых зародышей или расчлененный эксплантов в MEMFA или 3,7% FA + PBS в небольшой пузырек сцинтилляционных стекла (Fisher кошка # 03-339-25B). Инкубируйте флакон на nutator при комнатной температуре, только в течение 2 часов, и не более того. Не оставляйте эмбриона в Англии более чем на 2 часа. Более инкубации в ФА сделает эмбриональной ткани труднее и в результате плохого проникновения антител в процессе обнаружения.
- Аспирируйте большинство из Англии и добавить фиксатором Дента до верхней части флакона (~ 4,5 мл). Аккуратно переверните флакон на несколько раз мыть эмбрионов в Дента, обмен с другим 4,....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
Первичные антитела против антигена или ваш эпитопа теги: Сделайте соответствующие разведения в PBT. Биотин-сопряженных вторичными антителами: различные поставщики продают биотин-конъюгированных антител.
Перепечатки и разрешения
