Магнитная система модуляции биодатчиков используется для быстрого, чутко и просто обнаруживать биологические анализы, такие как молекулы ДНК и белков.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Быстрое однородных Обнаружение биологических экспериментов с использованием магнитных система биодатчиков модуляции
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Модуляции магнитного биодатчиков системы (ММБ) [1,2] быстро и равномерно обнаружено биологических мишеней при низких концентрациях без мытья или стадии разделения. Когда IL-8 целевых присутствовал, "sandwich' основе анализа прилагается магнитных шариков с IL-8 захвата антитела к стрептавидин связаны флуоресцентного белка с помощью IL-8 цели и биотинилированного IL-8 антител. Магнитного бисер маневрировал в колебательное движение, применяя переменного градиента магнитного поля с помощью двух электромагнитных полюсов. Флуоресцентные белки, которые прилагаются к магнитных шариков конденсируются в области обнаружения и их движение в и из ортогональных лазерный луч производит периодические флуоресцентный сигнал, демодулированный использованием синхронного детектирования. Магнитная система биодатчиков модуляции ранее был использован для выявления кодирующих последовательностей из неструктурных Ибараки вирусного белка 3 (NS3) комплементарной ДНК (кДНК) [2]. Методы, которые демонстрируются в этой работе для внешних манипуляций и конденсации частиц могут быть использованы для других применений, например, поставка магнитно-связанных наркотиков
Протокол
ИЛ-8 анализа:
- Реакционной смеси включены следующие четыре компонента в 100 мкл конечного объема буфера в соответствующих концентрациях. 10 мкл магнитных шариков с захватом антител при 100 бусин / мкл конечных концентрациях, 2 мкл биотинилированного IL-8 антител на 1 nano-gram/μl конечной концентрации, 1 мкл стрептавидин флуоресцентного белка при 20 nano-gram/μl конечной концентрации, и 1 мкл IL-8 цель на 0,48 pico-gram/μl. Компоненты добавляются один за другим буфером и затем встряхивают в течение 30 минут.
- Контрольной реакции готовят так же, без IL-8 цели.
- Реакции позже помещен без каких-либо разделения или стиральную шаг в кювет и про....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Таким образом, мы показали, что система MMB может быть использован для обнаружения присутствия IL-8 целевой при низких концентрациях (0,5 пико грамм предел обнаружения Bio-Plex Precision Pro анализах цитокинов [3,4]). Способность системы не ограничивается IL-8 и может быть использован для обнаружения других белков. Преимущества системы MMB являются способность обнаруживать цель быстро и без каких-либо отделения или промывки. Таким образом, это облегчает процесс обнаружения и позволяет системе, которые будут использовать.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Благодарности
Эта работа была частично поддержана Ishaya Горовиц фонд.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Набор Bio-Plex Pro для определения человеческого цитокина IL-8 | Bio-Rad | 171-B5008M | |
| Рекомбинантная мишень IL-8 человека | Thermo Fisher Scientific, Inc. | R202625 | |
| Биотинилированные моноклональные мышиные антитела к IL-8 человека G265-8 | BD Biosciences | 554718 | |
| Флуоресцентный белок, конъюгированный со стрептавидином | Bio-Rad | Streptavidin PE |
Ссылки
- Danielli, A., Arie, A., Porat, N., Ehrlich, M. Detection of fluorescent-labeled probes at sub-picomolar concentrations by magnetic modulation. Optics Express. 16, 19253-19259 (2008).
- Danielli, A., Porat, N., Arie, A., Ehrlich, M.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
