Ключ к пониманию морфогенетических процессов, которые формируют раннего эмбриона является способность ячеек изображения с высоким разрешением. Мы описываем здесь технику для маркировки отдельных клеток или небольших скоплений клеток в целом эмбрионов данио с мембраной ориентированных зеленый флуоресцентный белок.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Маркировка и работы с изображениями Ячейки в задний мозг данио рерио
В этой статье
Уведомление об исправлении
Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice
Краткое содержание
Аннотация
Ключ к пониманию морфогенетических процессов, которые формируют раннего эмбриона позвоночных является способность ячеек изображения с высоким разрешением. В данио эмбрионов, введение плазмиды результаты ДНК в мозаике выражение, что позволяет визуализировать отдельные клетки или небольшие скопления клеток
Протокол
1.Microinjection
- Развести плазмиды, кодирующей мембраны ориентированных зеленый флуоресцентный белок (mGFP, любезно Ричард Харланд) до концентрации 40 нг / мл. ДНК подготовленных линеаризации плазмиды (mGFP/PCS2 +, любезно Ричард Харланд) очищают, используя Prep Qiagen Maxi Kit. Добавление фенола красного (разбавленного 1 / 10 общего объема), чтобы решение является предпочтительным для визуализации решения. Хранить раствор ДНК на льду.
- Под стереомикроскопа, калибровки инъекционной иглой (90 мм стеклянных капилляров из Narishinge Научно; № по NA-GD-1), совместив иглу на окончила слайдов и аккуратным постукиванием часть иглы, где диаметром 1 мкм, и....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
В заключение маркировки методов, описанных здесь, позволяют одном анализе ячейки морфогенетических процессов в данио эмбриона. Основной акцент этого протокола является по методам визуализации меченых клеток в нервной трубки использованием mGFP под контролем вездесущий промоутер. Для дополнительных приложений этого переходного читателям анализ выражения следует обратиться к недавней работе Andersen и соавт. 3.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Нет конфликта интересов объявлены.
Благодарности
Эта работа была поддержана NIH грант присужден R. Брюстер (1R01GM085290-01A1).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
Решения
- Хэнка Лот № 1: 8,0 г NaCl, 0,4 г хлорида калия в 100 мл дд H 2 O
- Хэнка Лот № 2: 0,358 г Na 2 HPO 4 безводный, 0,60 г KH 2 PO 4 в 100 мл DDH 2 O
- Хэнка Лот № 4: 0,72 г CaCl 2 в 50 мл DDH 2 O
- Хэнка Лот № 5: 1,23 г MgSO 4 x7H 2 O в 50 мл дд H 2 O
- 1 X фосфатного буфера: 0,8% NaCl, 0,02% KCl, 0,02 M PO4, рН 7,3
- Блокировка Решение: 2% нормальной козьей сывороткой, 1% бычьего сывороточного альбумина (БСА), 1% dimethysulfoxide (ДМСО)
Ссылки
- Nüsslein-Volhard, C., Dahm, R. Zebrafish Practical approach series. , Oxford University press. (2002).
- Hong, E., Brewster, R. N-cadherin is required for the polarized cell behaviors that drive neurulation in the zebrafish. Development. 133, 3895-3905 (2006).
- Andersen, E., Asuri, N., Clay, M., Halloran, M.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
Исправление
Formal Correction: Erratum: Labeling and Imaging Cells in the Zebrafish Hindbrain
Posted by JoVE Editors on 9/16/2010. Citeable Link.
A correction was made to Labeling and Imaging Cells in the Zebrafish Hindbrain. There was an error in the authors affiliations. The authors have been corrected to:
Pradeepa Jayachandran1, Elim Hong2, Rachel Brewster1
1Department of Biological Sciences, University of Maryland, Baltimore County
2Center for Neuroscience, Children's National Medical Center
instead of:
Pradeepa Jayachandran1, Elim Hong2, Rachel Brewster2
1Center for Neuroscience, Children's National Medical Center
2Department of Biological Sciences, University of Maryland Baltimore County
