Первичные культуры нейронов из мозга дрозофилы поздней стадии куколки

Summary

Это видео демонстрирует подготовки первичных нейронов культур из мозга дрозофилы поздней стадии куколки. Просмотров живых культур показывают результат аксонов и отображения уровня кальция использованием Фура-2.

Abstract

В этом видео, мы демонстрируем подготовки первичных нейронов культур из мозга дрозофилы поздней стадии куколки. Процедура начинается с удаления из мозга животных на 70-78 часов после пупария образования. Изолированные мозги показываются после краткой инкубации в папаин последовало несколько моет в бессывороточной ростовой среды. Процесс механической диссоциации каждой мозга в 5 мкл капли СМИ на покровное иллюстрируется. Аксонов и дендритов после митотического нейроны sheered с рядом сома в период раздробленности, но нейроны начинают восстанавливать процессы в течение нескольких часов обшивки. Изображения показывают живые культуры на 2 дня. Нейроны продолжить разработку процессов в течение первой недели в культуре. Конкретные нейронные популяции могут быть идентифицированы в культуре использованием GAL4 линии ездить ткани конкретное выражение флуоресцентные маркеры, такие как GFP и RFP. Всего записей ячейки продемонстрировали культурные нейроны формируют функциональные, спонтанно активных холинергической и ГАМК-синапсы. Короткий сегмент видео иллюстрирует динамику кальция в нейроны культурный использованием Фура-2 в качестве красителя показатель кальция для контроля спонтанной переходных кальция и никотина вызвала ответы кальция в блюдо культурный нейронов. Эти куколки культур мозга полезной модели системы, в которой генетические и фармакологические средства могут быть использованы для определения внутренних и внешних факторов, которые влияют на формирование и функции центральных синапсов.

Protocol

Подготовка до дня культивирования:

1. Сделать стерильной рассекает решение.
2. Сделать стерильной DMEM и храните в 10 мл аликвот при 4 ° С в течение 2 недель.
3. Сделать стерильной DDM2 добавки и заморозить в 50 или 100 мкл аликвоты в течение 1 месяца.
4. Сделать ConA / ламинин.
5. Пальто покровные.
   Дополнительно: Сделать стерильной CNBM и хранить замороженными до 4 месяцев.

В день культивирования

I. Подготовка раствора фермента (ES) в ламинарном потоке капот

1. Положите 5 мл рассекает решение (DS) в 15 мл центрифужную пробирку.
2. Взвесить 0,8 мг L-....

Discussion

Нейроны найденным на мозг эмбриональных / послеродовой грызуны могут быть выращены в первичной культуре клеток, где они распространяются невриты и форма функциональной синаптических связей. Методы подготовки этих культур, хорошо известны и учится в грызунах нейронных культур сыграли решающую роль в идентификации генов и экологических факторов, участвующих в регуляции формирование синапса и функция (банкир и Гослин, 1991). Хотя насекомых нейронов из различных видов также может быть выращен в культуре, только нейроны насекомых показано, форми.......

Materials