Тест на лазание по мухам: метод проверки общей локомоции у Drosophila melanogaster

Аннотация

Источник: Gevedon, O., et al. Прямой генетический скрининг in vivo для идентификации новых нейропротекторных генов у Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (2019).

Это видео описывает простой метод количественной оценки передвижения мух и показывает выполненный тест на лазание по мухе. Тест на лазание мух - это общий тест двигательной функции, который основан на отрицательной реакции геотаксиса.

Протокол

Этот протокол является выдержкой из Gevedon et al., In Vivo Forward Genetic Screens to Identify Novel Neuroprotective Genes in Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp.(2019).

1. Анализ скалолазания (Адаптировано из Ali et al., J. Vis. Exp. (2011))

1. Проверьте анализ на скалолазание. В этом исследовании был протестирован анализ восхождения на основе ранее описанной методологии Ali et al., с использованием мух Elav^C155>UAS-Tau^R406W (с более низкой скоростью прохождения восхождения) и мух Elav^C155>UAS-GFP (контроль) и Elav^C155>UAS-mCherry (контроль).
2. Переверните мух в камеру для тестирования, по одной линии за раз (не используйте анестезию CO₂) и дайте им восстановиться в течение 5 минут. Если тестирование проводится в разные дни, проводите анализ в одно и то же время суток. В этом исследовании все тесты на скалолазание проводились во второй половине дня для контроля циркадного влияния на локомоцию.
   ПРИМЕЧАНИЕ Избегайте воздействия прямых солнечных лучей на мух при тестировании; Это помешает их способности подниматься.
3. С силой постучите камерой (помеченной стороной вниз) по коврику для мыши, помещенному на твердую поверхность 3 раза, чтобы все мухи начали анализ со дна. Наблюдайте за передвижением мух в течение 10 с.
4. Запишите количество мух, которые достигают или пересекают линию 5 см за это время, а также общее количество протестированных мух. Повторите протокол, подождая 1 минуту между каждым испытанием, чтобы сделать не менее 3 повторений в каждой строке.
   ПРИМЕЧАНИЕ В настоящем исследовании каждый флакон содержал от 2 до 19 мух для первоначального скрининга (самцы мух) и от 6 до 21 мухи для анализа дефицита мутантных мутантных веществ у перекрещенных женских линий.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
VWR® Frosophila Vial; Узкий	VWR	75813-160
Лента для лабораторных этикеток общего назначения VWR®	ВВР	89097-912
Стандартный коврик для мыши
Стереоскоп	Мотик		Модель СМЗ-168
Инкубатор дрозофилы	ВВР	89510-750
R программный пакет