Drosophila melanogaster (плодовая мушка)

Из-за своего большого размера и относительно простой организации, клетки-медсестры дрозофилы идеально подходят для исследований визуализации живых клеток. В этом видео описывается метод микроинъекции для доставки экзогенных соединений в клетки, а в представленном протоколе демонстрируется процедура с помощью флуоресцентных олигонуклеотидных зондов, называемых молекулярными маяками (MB), используемых для визуализации эндогенных транскриптов мРНК.

Эмбрион дрозофилы окружен защитными внешними мембранами. Чтобы получить доступ к эмбриону, часто удаляют хорион – самую внешнюю из оболочек. В этом видео описан часто используемый метод дехорионации с использованием гипохлорита натрия. В примере протокола показана процедура с использованием стерильных методов, необходимых для выращивания животных аксеническими или гнотобиотическими препаратами.

Иммуноокрашивание ооцитов дрозофилы на поздней стадии может оказаться сложной задачей из-за окружающих ооцитов мембран. В этом видео описан высокопроизводительный метод получения ооцитов, их фиксации и удаления мембран для иммуноокрашивания. Представленный протокол демонстрирует эти методы с использованием ооцитов на поздних стадиях, используемых для визуализации различных стадий мейоза.

Это видео описывает метод механического удаления мембран хориона и вителлина из ранее зафиксированных зрелых ооцитов дрозофилы. В представленном протоколе показана подробная демонстрация процедуры получения ооцитов, совместимых с флуоресцентными методами гибридизации in situ.

В этом видео описывается, как выполнять микроинъекции, которые доставляют реагенты в живые эмбрионы дрозофилы. Исследователи могут использовать этот метод для введения экзогенных соединений, таких как нуклеиновые кислоты и белки, на ранних стадиях развития эмбриона. Представленный протокол демонстрирует, как настроить и выполнить процедуру инъекции любого растворимого реагента — в данном случае флуоресцентного белка для экспериментов с визуализацией в реальном времени.

Source:Siddarth Gunnala1, Nafisa M. Jadavji2,3,41Department of Biomedical Sciences, Midwestern University, Glendale, AZ, USA2Division of Integrative and Molecular Physiology, Department of Biomedical Sciences, Southern University of Illinois, Carbondale, IL, USA3Department of Child Health, College of Medicine Phoenix, University of Arizona, Phoenix, AZ, USA4Department of Neuroscience, Carleton University, Ottawa, ON, CanadaThis video demonstrates hypoxia-induced climbing behavior in Drosophila...

Это видео показывает метод проверки гипоксии у личинок дрозофилы путем оценки их способностей к закапыванию и туннелированию. Используя этот метод, исследователи могут отличить личинок, испытывающих кислородное голодание, от личинок с дефицитом развития. В примере протокола показана настройка для этого анализа.

При окрашивании имагинальных дисков дрозофилы, часто выполняется грубое вскрытие, где диски обнажаются, но остаются прикрепленными к телу. После окрашивания интересующие диски изолируются и монтируются. В примере протокола показана процедура рассечения и монтажа имагинального диска крыла.

Нервно-мышечное соединение дрозофилы (NMJ) используется в качестве модели для изучения морфологии и функции синапсов. В этом видео описываются важные характеристики, которые исследователи количественно оценивают для характеристики NMJ. В примере протокола показано программное обеспечение, способное выполнять количественную оценку в автоматическом режиме.

Это видео описывает двухфотонную лазерную абляцию аксонов у личинки Drosophila melanogaster и пример протокола для индуцирования травмы и визуализации места повреждения.

Это видео описывает, как подготовить филе личинок, используемых для визуализации нейронов сенсорной дендритной арборизации (da) и связанных с ними эпидермальных клеток. Представленный протокол подробно показывает, как удалить мышечную ткань со стенки тела с сохранением морфологии клеток, что улучшает иммуноокрашивание и визуализацию скрытых в противном случае данейронов и эпидермальных клеток.

Гемолимфа дрозофилы служит как кровью, так и интерстициальной жидкостью, циркулируя по всему телу на стадии личинки и взрослой особи. В этом видео описан протокол сбора личиночной гемолимфы с целью количественного определения циркулирующих клеток.

Личинки дрозофилы светочувствительны и реагируют на изменения окружающего света. В этом видео описывается анализ, который проверяет их способность избегать света, называемый анализом световых пятен. Представленный протокол демонстрирует, как настроить анализ с помощью синего светодиода, а также показывает, как записывать поведение животного в ответ на встречу со светом.

Это видео описывает кольцевую железу дрозофилы, сложную эндокринную структуру, важную для биосинтеза и секреции экдистероидов и других гормонов. Представленный протокол демонстрирует его вскрытие, фиксацию и иммуноокрашивание.

Личинки дрозофил имеют специальные сенсорные нейроны - ноцицепторы, чья реакция на потенциально вредные тепловые стимулы вызывает аверсивное или так называемое "ноцифенсивное" поведение у животного. В этом видео описывается метод оценки теплового ноцицепции путем записи поведения личинок в ответ на локальное нанесение теплового зонда на кутикулу. Поэтому этот метод называется локальным тепловым зондовым анализом.

Плодовые мушки дрозофилы могут различать небольшие изменения температуры и поэтому выбирают среду с благоприятными тепловыми условиями. В этом видео описывается поведенческий анализ, который проверяет температурные предпочтения личинок дрозофилы по линейному тепловому градиенту.

Это видео описывает лимфатическую железу дрозофилы — основной участок кроветворения у личинки мухи — и показывает пример протокола препарирования и монтирования органа для иммуногистохимии и флуоресцентной визуализации.

В этой статье описывается метод удаления куколки насекомого, сохраняя при этом внутреннюю куколку нетронутой и, следовательно, пригодной для дальнейшего исследования. В примере протокола показана процедура с Drosophila guttifera; однако этот метод применим и к другим видам дрозофил.

В этом видео описывается, как препарировать и изолировать глазо-мозговой комплекс у куколок дрозофилы. Представленный протокол демонстрирует процедуру, позволяющую получить высококачественную ткань, совместимую, например, с иммуноокрашиванием, а также с другими экспериментами по экспрессии генов.

Летательные мышцы дрозофилы используются в качестве модельной системы для развития мышц и физиологии. В этом видео описывается летная мускулатура взрослых особей и освещается протокол препарирования развивающихся непрямых летательных мышц, которые подходят для секвенирования РНК из куколок.

Это видео описывает классический анализ обусловливания, который проверяет обучение и память у дрозофилы, называемый обусловливанием ухаживания. Анализ основан на снижении ухаживания самцов после переживания отвержения со стороны невосприимчивой спаренной самки. В примере протокола показана настройка процедуры, которая может быть использована для оценки кратковременной и долговременной памяти.

Это видео описывает простой метод количественной оценки передвижения мух и показывает выполненный тест на лазание по мухе. Тест на лазание мух - это общий тест двигательной функции, который основан на отрицательной реакции геотаксиса.

Это видео описывает вскрытие добавочных желез у самцов мух и показывает пример, в котором изолированная железа будет диссоциирована на одну клеточную суспензию.

Это видео описывает общую анатомию яичников дрозофилы и показывает метод препарирования яичников для живой или фиксированной визуализации.

В этой статье описывается вскрытие передних мальпигиевых канальцев (МТ) у самки мухи дрозофилы и пример протокола от Rossano et al. (2017), в котором МТ подготовлены для визуализации в реальном времени в перфузионной камере.

Это видео описывает островной анализ, поведенческий метод, используемый для изучения локомоции дрозофилы. Протокол отбора проб включает в себя настройку для анализа, совместимую с полуавтоматическим анализом изображений.

Ученые используют протокол продолжительности жизни дрозофилы для измерения того, как различные условия эксперимента влияют на продолжительность жизни мух, и генерируют кривые выживаемости в процессе для количественной оценки экспериментальных результатов. Протокол отбора образцов включает в себя анализ, применяемый для изучения влияния на продолжительность жизни воздействия различных концентраций химических веществ-разрушителей эндокринной системы, или EDC, таких как 17-α-этинилэстрадиол (EE2).

Это видео описывает анализ кормления плодовых мушек, в котором используется окрашенная пища для мониторинга кормления и влияния добавленных соединений на пищевую активность. В примере протокола проверяется воздействие нескольких химических веществ, разрушающих эндокринную систему (EDC).

Это видео описывает метод монтажа неповрежденных мозгов взрослых мух под горку моста и показывает протокол, выполненный на иммуноокрашенных мозгах для флуоресцентной микроскопии.

Это видео описывает метод скрининга для идентификации трансгенных мух дрозофилы, чей геном был изменен с помощью CRISPR-Cas9. CRISPR-Cas9 — это мощный инструмент редактирования генома, который произвел революцию в том, как ученые могут манипулировать геномом организма. В примере протокола мы увидим, как идентифицировать мутантов, сгенерированных CRISPR, в которых вставка трансактивационной последовательности заменяет первый экзон гена без ветвей (bnl), создавая таким образом ген-специфичную для...

Сканирующая электронная микроскопия (СЭМ) — это мощный инструмент для визуализации, в первую очередь, поверхностных особенностей биологического образца. Однако надлежащая подготовка образцов имеет решающее значение для получения качественных изображений. В этом видео основное внимание уделяется этапам обезвоживания и сушки при подготовке неповрежденной взрослой дрозофилы к СЭМ.

В этом видео описывается, как встроить головы дрозофил в парафин методом ошейника, методом, который подготавливает головы мух к серийному разделению. Парафиновые срезы используются для гистологических исследований анатомии головного мозга и для оценки нейродегенерации. Представленный протокол демонстрирует, как можно обработать несколько мух за один препарат, тем самым повышая эффективность использования времени и сводя к минимуму экспериментальные артефакты.

Это видео описывает, как выполнить инъекцию живых взрослых мух, и включает пример протокола, в котором меченые частицы и трипановый синий вводятся в брюшную полость мухи для анализа фагоцитоза.

Это видео описывает анализ вкусовых предпочтений, поведенческий метод, используемый для измерения привлекательности или избегания цветных растворов, которые имеют другой вкус, путем оценки окраски живота мухи после приема предпочитаемого вещества. Представленный протокол демонстрирует процедуру, используемую для измерения предпочтения мух в отношении растворов различной концентрации сахарозы.

В этом видео описывается анализ CApillary FEeder, или CAFE, поведенческий метод, который измеряет потребление пищи и предпочтения необузданных плодовых мушек. Представленный протокол показывает, как выполнить анализ с минимальным испарением из заполненных жидкостью капилляров, используемых для доставки пищи, и отслеживать ее потребление.

Это видео описывает, как препарировать и изолировать мозг взрослой дрозофилы - процедура, необходимая для визуализации органа, который в противном случае закрыт кутикулой, глазом и тканями трахеи. В примере протокола показана подробная демонстрация высококачественных препаратов, которые могут быть использованы для иммуноокрашивания и методов визуализации в нейробиологии дрозофилы.

Микробиота дрозофилы влияет на развитие, иммунитет и физиологию животного. В этом видео описывается метод количественной оценки бактерий у мух путем определения колониеобразующих единиц из препаратов всего организма. Представленный протокол демонстрирует эту технику на мухах, выращенных в гнотобиотических условиях с использованием четырех видов бактерий.

Это видео описывает метод препарирования, фиксации и установки ноги взрослой дрозофилы с сохранением ее нейромускулатуры нетронутой для визуализационного анализа.

Это видео описывает, как отслеживать свободно гуляющих мух, чтобы оценить их общую способность к передвижению. Представленный протокол демонстрирует настройку анализа и анализ данных с помощью программного обеспечения для видеослежения.

В этом видео описывается один из методов создания аспиратора от мухи, который можно использовать для переноса насекомых между вольерами без анестезии. Аспиратор в приведенном в примере протоколе был подготовлен для эксперимента по количественной оценке индивидуального поведения...

Это видео описывает визуализацию кальция in vivo в нейронах дрозофилы с использованием GCaMP. В ролике с протоколом показано, как регистрировать изменения флуоресценции GCaMP от нейронов грибовидного тела во время эксперимента по обонятельному обусловливанию.

Плодовые мушки имеют сложную обонятельную систему, могут различать сотни запахов и использовать свое обоняние для принятия поведенческих решений. В этом видео описывается четырехсторонний ольфактометрический анализ, метод изучения обонятельных поведенческих реакций у мух. В ролике с протоколом показано, как работать с тестовыми мухами и какие шаги являются критическими при проведении анализа.

Агрессия - это врожденное поведение, и предыдущий боевой опыт влияет на стратегию боя и исход последующих состязаний у мух. В этом видео описывается анализ, используемый для изучения агрессивного поведения дрозофилы. В примере протокола показан анализ, проводимый в условиях, исключающих контакт с мухами и, следовательно, снижающий стресс для животных, который в противном случае повлиял бы на производительность испытуемых.

В этом видео описывается метод проверки обонятельного исследовательского поведения плодовой мушки, называемый Y-образным лабиринтом. В представленном ролике с протоколом показано, как настроить и провести анализ.

В этом видео описывается система мониторинга активности дрозофилы (DAM), используемая для отслеживания двигательной активности. Исследователи используют данные об активности, собранные с помощью DAM, для изучения циркадных ритмов у плодовых мушек. В ролике с протоколом показано, как загружать мух в устройство и записывать данные об активности для циркадных экспериментов.

Оптогенетика позволяет использовать свет для манипулирования нейронами, которые генетически спроектированы для экспрессии специфических опсинов - светочувствительных белков, световая активация которых вызывает изменение состояния нейрона. Здесь мы оптогенетически подходим к дрозофиле с использованием опсина Channelrhodopsin2. Пример протокола включает в себя набор оптогенетических анализов для изучения нейронных схем, стоящих за поведением мухи при побеге.

В этом видео мы рассказываем о вскрытии кишечника взрослой дрозофилы и сборе средних кишек, пригодных для диссоциации одиночных клеток и FACS с целью выделения кишечных стволовых клеток.

Это видео описывает взрослое сердце мухи, иначе называемое дорсальным сосудом дрозофилы. Представленный протокол демонстрирует процедуру вскрытия для подготовки живого сердца.

Самки дрозофил выбирают между субстратами и выбирают места, привлекательные для откладывания яиц. В этом видео описывается поведенческий анализ, который проверяет принятие решений, называемый анализом предпочтений в отношении яйцекладки. Представленный клип демонстрирует процедуру с специально разработанной установкой, которая позволяет исследователям не только тестировать поведение многих самок одновременно, но и совместима с видеозаписью и оптогенетическими установками.