Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Скрининг геномных модификаций: метод идентификации мутантов, сгенерированных CRISPR, у дрозофил

3K просмотров

⸱

30 апреля 2023 г.

В этой статье

Аннотация

Источник: Du, L., et al. Эффективная стратегия генерации тканеспецифичных бинарных транскрипционных систем у дрозофил путем редактирования генома. J. Vis. Exp. (2018).

Это видео описывает метод скрининга для идентификации трансгенных мух дрозофилы, чей геном был изменен с помощью CRISPR-Cas9. CRISPR-Cas9 — это мощный инструмент редактирования генома, который произвел революцию в том, как ученые могут манипулировать геномом организма. В примере протокола мы увидим, как идентифицировать мутантов, сгенерированных CRISPR, в которых вставка трансактивационной последовательности заменяет первый экзон гена без ветвей (bnl), создавая таким образом ген-специфичную для bnl драйверную линию, bnl-LexA.

Протокол

Этот протокол представляет собой выдержку из Du et al., An Efficient Strategy for Generate Tissue-specific Binary Transcription Systems in Drosophila by Genome Editing, J. Vis. Exp. (2018).

1. Генетика мух и скрининг (Рисунок 1 и Рисунок 2)

  1. Когда введенные эмбрионы вырастут во взрослых особей, скрещивайте каждую отдельную муху G0 с балансирными мушками. Выберите подходящий балансир для хромосомы, содержащей целевой аллель.
  2. Обезболите потомство F1 от каждого скрещивания G0 на подушечке CO2 и случайным образом выберите 10-20 самцов под стереомикроскопом. Скрещиваем их по о....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

figure-results-1
Рисунок 1: Обзор рабочего процесса редактирования генома, опосредованного CRISPR/Cas9, для создания бинарной системы транскрипции. Указывается примерная продолжительность времени, необходимая для каждого этапа. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Трис-HClСигма ОлдричТ3253молекулярная биология
ЭдтаСигма ОлдричЕ1161молекулярная биология
NaClСигма ОлдричС7653молекулярная биология
Ультрачистая вода, не содержащая ДНКазы/РНКазыThermoFisher Scientific10977-023молекулярная биология
ГрунтовкиIDT-ДНКПЦР
Протеиназа КThermoFisher Scientific25530049молекулярная биология
2x PCR PreMix, с красителем (красный)СидлабMB067-EQ2Rмолекулярная биология
MKRS/TB6BЛаборатория КорнбергаНахлыстовая леска
Станция CO2Дженеси Сайентиал59-122УКУТолкание мух
СтереомикроскопОлимпСЗ-61Толкание мух
Пестики для гомогенизации в микротрубкахФишер-СайентификТел.: 03-421-217выделение геномной ДНК
(Английский)

Больше статей

CRISPR-Cas9скрининг Drosophilaгеномная модификацияПЦР-скринингэкстракция ДНКлинии с балансерными хромосомамискрещивание F1личинки F2протеиназа Kверификация HDR