Дрозофила in vivo Визуализация кальция: метод функциональной визуализации активности нейронов

Аннотация

Источник: Hancock, C. E., et al. In vivo оптическая кальциевая визуализация синаптической пластичности, вызванной обучением, у Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (2019).

Это видео описывает визуализацию кальция in vivo в нейронах дрозофилы с использованием GCaMP. В ролике с протоколом показано, как регистрировать изменения флуоресценции GCaMP от нейронов грибовидного тела во время эксперимента по обонятельному обусловливанию.

Протокол

Этот протокол является выдержкой из работы Hancock et al., In Vivo Optical Calcium Imaging of Learning-Induced Synaptic Plasticity in Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp.(2019).

1. Визуализация кальция in vivo

1. Используйте многофотонный микроскоп, оснащенный инфракрасным лазером и водно-иммерсионным объективом (см. Таблицу материалов), установленный на виброизолированном столе. Для визуализации кальциевых индикаторов на основе GFP настройте лазер на длину волны возбуждения 920 нм и установите полосовой фильтр GFP.
2. С помощью ручки грубой регулировки по оси Z просканируйте ось ....

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
1-октен-3-ол	Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, США	О5284	Химическое вещество, используемое в качестве одоранта
3-октанол	Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, США	218405	Химическое вещество, используемое в качестве одоранта
4-метилциклогексанол	Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, США	153095	Химическое вещество, используемое в качестве одоранта
Полосовой фильтр для EGFP (525/50 нм)	Carl Zeiss Microscopy GmbH, Йена, Германия
нефтепродукт	Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, США	М8410	Используется в качестве разбавителя для одорантов
Лазер Ti-Sapphire Chameleon Vision 2 с синхронизацией мод	Coherent Inc., Санта-Клара, Калифорния, США		Настраиваемый инфракрасный фемтосекундный лазер
Многофотонный микроскоп LSM 7MP оснащен детекторами BiG	Carl Zeiss Microscopy GmbH, Йена, Германия		Многофотонный микроскоп, несколько компаний предлагают аналогичные устройства.
Объектив для погружения в воду Plan-Apochromat 20x (NA = 1.0)	Carl Zeiss Microscopy GmbH, Йена, Германия	421452-9900-000	Объектив W "Plan-Apochromat" 20x/1.0 DIC M27 70mm
Программное обеспечение Visual Basics of Applicatons (VBA) для получения триггера от устройства подачи запаха и устройство подачи электрошока (источник питания) для взаимодействия с программным обеспечением ZEN от Zeiss, которое управляет микроскопом	Написан на заказ и доступен по запросу	н.а.	н.а.