$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Следующий протокол представляет собой выдержку из Kudumala et al, Swimming Induced Paralysis to Evaluate Dopamine Signaling in Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp.(2019).
SWIP
ПРИМЕЧАНИЕ: Мы описываем ручной метод оценки SWIP у червей дикого типа, обработанных AMPH. Мы также кратко обсудим отслеживание червей и дальнейший анализ кинетики червей с помощью автоматизированного трекера червей и программного обеспечения для слежения, которые ранее были описаны Hardaway et al.
- Ручной метод проверки на SWIP
- Аликвота 40 мкл 200 мОсм/л раствора сахарозы с 0,5 мМ АМФ или без него в стеклянную точечную пластину. Под стереоскопом наберите 8-10 червей поздней стадии L4 с помощью ресницы или платинового медиатора и погрузите медиатор в пластину с раствором до тех пор, пока черви не отойдут от медиатора и не заплынут в раствор. Запишите количество червей, выбранных в лунку, запустите таймер, наблюдайте и записывайте количество червей, проявляющих SWIP на каждой минутной отметке.
- Скопируйте исходные данные в таблицу и рассчитайте процент парализованных червей, разделив количество парализованных червей в каждую минуту на общее количество червей, протестированных в ходе анализа, и умножьте на 100. Скопируйте процентные значения в любое графическое и статистическое программное обеспечение и отобразите данные с процентными значениями по оси Y и временем по оси X, используя формат графика XY.
- Проведите двусторонний ANOVA с последующим апостериорным анализом (например, пост-тест Бонферрони) для проверки статистической значимости среди контрольной группы, групп AMPH и времени лечения.
- Автоматизированный анализ SWIP
- Выполняйте автоматический анализ одного червя за раз. Протокол для настройки камеры, программное обеспечение для отслеживания червей и сценарий для запуска анализа программного обеспечения для слежения подробно описаны в работе Hardaway et al.
- Вкратце, поместите один гермафродит поздней стадии L4 в стеклянную пятнистую пластину с помощью медиатора, как описано в ручном методе в разделе 1.1.2. Записывайте видео плавания одного червя за раз и используйте программное обеспечение для отслеживания червей для расчета частоты изгибов тела.
- Следуйте сценарию, входящему в комплект поставки программного обеспечения для слежения, чтобы получить информацию о частоте измельчения червей и создать тепловые карты на основе данных об измельчении червей.