Здесь мы вводим анализ для измерения SWIP, поведенческий фенотип C. elegans, который происходит во время энергичного движения, как плавание. В примерном протоколе рассматриваются как ручные, так и автоматизированные подходы к анализу.
протокол
Следующий протокол является выдержка из Kudumala и др.,Плавание индуцированного паралича для оценки допаминасигнализации в Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp. (2019). SWIP ПРИМЕЧАНИЕ: Мы описываем ручной метод оценки SWIP у червей дикого типа, обработанных AMPH. Мы также кратко обсудить отслеживание червей и дальнейший анализ червя кинетики с помощью автоматизированного трекера червя и отслеживания программного обеспечения, которые ранее были описаны Hardaway и др. Ручной метод для тестирования для SWIP Aliquot 40 л раствора сахарозы 200 mOsm/L либо с 0,5 мММ AMPH, либо без него в стеклянную тарелку. Под стереоскопом, выбрать 8-10 конце-L4 этапе червей с ресницами или платины забрать и погрузить забрать в пластине, содержащей раствор, пока черви сойти забрать и плавать в раствор. Обратите внимание на количество червей, выбранных в колодец, запустите таймер, наблюдайте и записывьте количество червей, выставляют SWIP на каждой минуте знака. Скопируйте необработанные данные в электронную таблицу и вычислите процент червей, парализованных, разделив количество червей, парализованных каждую минуту, на общее количество червей, протестированных на протяжении всего анализа, и умножьте на 100. Копировать процентные значения в любое графинг и статистическое программное обеспечение и построения данных с процентными значениями на оси Y и времени на оси X с помощью формата графика XY. Выполните двухгодовый ANOVA с последующим пост-специальным анализом (например, Bonferroni post-test) для проверки статистической значимости между контрольом, группами AMPH и временем лечения. Автоматизированный анализ SWIP Выполняя автоматизированный анализ на одном черве за один раз. Протокол для настройки камеры, программного обеспечения трекера червя и скрипт для запуска анализа программного обеспечения отслеживания подробно описаны в Hardaway et al. Короче говоря, поместите один поздний гермафродит стадии L4 в стеклянную пластину пятна с использованием ресниц забрать, как описано в ручном методе в разделе 1.1.2. Запись плавания видео одного червя в то время и использовать программное обеспечение червя трекер для расчета частоты изгибов тела. Следуйте сценарию, предоставленного с программным обеспечением отслеживания для получения частоты обмолота червя и для создания тепловых карт из данных обмолота червя.
Swimming-Induced Paralysis (SWIP) Assay: A Method to Quantify Dopamine-Mediated Locomotion in C. elegans. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20137, doi: (2023).