$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Lee and Kang, Измерение влияния химических веществ на рост и размножение Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp. (2017).
1. Анализ кладки яиц C. elegans
- Инкубировать синхронизированные по возрасту яйца на планшете NGM, содержащем ДМСО или этопозид, в течение 64 ч (до первого рождения) до стадии молодняка при температуре 20 °C.
ПРИМЕЧАНИЕ: Использование червей из экспериментов по измерению роста является необязательным. Измерение роста и анализ яйцекладки удобно проводить вместе.
- Перенесите 5 взрослых червей в новые планшеты NGM без химикатов (условие 1, химическая обработка в течение определенного периода времени, от яиц до стадии молодых особей) или новую тарелку NGM, содержащую ту же химическую предварительную обработку (условие 2, непрерывное воздействие химических веществ в течение всего экспериментального периода), а затем инкубируйте их в течение 24 ч.<бр/>
ПРИМЕЧАНИЕ: Рекомендуется делать повторы с использованием 3-5 планшетов NGM для каждой процедуры; Эти репликации могут быть использованы для статистического анализа.
- Переложите на новую пластину NGM, как описано выше, и подсчитайте количество яиц каждый день. Посчитайте червей, которые отползли, умерли и вылупились изнутри.
- Повторяйте эти действия до тех пор, пока черви не перестанут откладывать яйца, обычно через 5 дней.
- Рассчитайте количество яиц, отложенных на одного червя с каждой пластины, и суммируйте эти значения каждый день в течение 5 дней, чтобы определить общее количество отложенных яиц.
ПРИМЕЧАНИЕ: Исключите из расчета количество червей, которые отползли и вылупились изнутри.