Анализ яйцекладки: метод количественной оценки яйцекладки C. elegans

Аннотация

Источник: Ли, С. Й. и Канг, К. Измерение влияния химических веществ на рост и размножение Caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp. (2017).

C. elegans при откладывании яиц может предоставить важную информацию в исследованиях развития, репродуктивной и анатомической деятельности. Это видео знакомит с важными этапами анализа яйцекладки и показывает эксперимент с образцом эксперимента, в котором лекарство проверяется на репродуктивную токсичность.

Протокол

Lee and Kang, Измерение влияния химических веществ на рост и размножение Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp. (2017).

1. Анализ кладки яиц C. elegans

1. Инкубировать синхронизированные по возрасту яйца на планшете NGM, содержащем ДМСО или этопозид, в течение 64 ч (до первого рождения) до стадии молодняка при температуре 20 °C.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Использование червей из экспериментов по измерению роста является необязательным. Измерение роста и анализ яйцекладки удобно проводить вместе.
2. Перенесите 5 взрослых червей в новые планшеты NGM без химикатов (условие 1, химическая обработка в течение определенного периода времени, от яиц до стадии молодых особей) или новую тарелку NGM, содержащую ту же химическую предварительную обработку (условие 2, непрерывное воздействие химических веществ в течение всего экспериментального периода), а затем инкубируйте их в течение 24 ч.<бр/> ПРИМЕЧАНИЕ: Рекомендуется делать повторы с использованием 3-5 планшетов NGM для каждой процедуры; Эти репликации могут быть использованы для статистического анализа.
3. Переложите на новую пластину NGM, как описано выше, и подсчитайте количество яиц каждый день. Посчитайте червей, которые отползли, умерли и вылупились изнутри.
4. Повторяйте эти действия до тех пор, пока черви не перестанут откладывать яйца, обычно через 5 дней.
5. Рассчитайте количество яиц, отложенных на одного червя с каждой пластины, и суммируйте эти значения каждый день в течение 5 дней, чтобы определить общее количество отложенных яиц.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Исключите из расчета количество червей, которые отползли и вылупились изнутри.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Caenorhabditis elegans N2	Центр генетики Caenorhabditis (CGC)		Wild type
Диметилсульфоксид	Sigma, США	Д2650
Escherichia coli OP50	Центр генетики ценорхабдита (CGC)
Этопозид	Sigma, США	Е1383
35 × 10 мм чашка Петри	SPL Life Sciences, Южная Корея	10035
Стереомикроскоп	Nikon, Япония	SMZ800N