Новый анализ для дайвинга в аквариуме: метод изучения врожденных реакций на стресс у рыбок данио

Аннотация

Источник: Chin J.S.R., et al. Поведенческие подходы к изучению врожденного стресса у рыбок данио. J. Vis. Exp. (2019)

В статье описывается поведенческий метод оценки стресса у рыбок данио. В ответ на стресс рыбки данио, как правило, плавают на дне аквариума до тех пор, пока стресс не будет снят. В протоколе образца описан поэтапный метод проведения анализа.

Протокол

1. Новая испытательная установка танка

1. Подготовьте стакан объемом 250 мл, предварительно заполненный водой для рыбной системы, и не менее двух резервуаров для хранения.
2. Утром в день испытания переведите не менее 10 тестовых взрослых рыбок данио, которые будут использоваться в каждом экспериментальном состоянии (контрольная группа и экспериментальные взрослые особи) из помещения для содержания рыб в аквариум, переведите их в комнату для поведения и дайте им акклиматизироваться в течение как минимум одного часа><. заметка: Перед экспериментом следует провести анализ мощности, но в наших руках n = 10 обычно достаточно для определения статистической значимости. При этом емкость для хранения должна содержать не более пяти особей на литр воды. Достаточно одной часовой акклиматизации, так как было доказано, что взрослые рыбки данио привыкают в течение 30 минут к новому аквариуму. Кроме того, на поведенческие ритмы влияют циркадные процессы, и поэтому экспериментальные повторы, сделанные в разные дни, должны выполняться в одни и те же часы. Обычно мы проводим все эксперименты с 11:00 утра до 6:00 вечера.
3. Маркируйте аквариумы таким образом, чтобы состояние или генотип животных были слепы для экспериментатора.
   заметка: Эксперименты могут быть легко скрыты от экспериментатора, если маркировать резервуары с помощью буквенной или цифровой системы (например, один резервуар имеет маркировку «А», другой «В» и т. д.). Сторона, не участвующая в экспериментах, маркирует резервуары такой системой и маскирует личности экспериментатора до тех пор, пока не будет завершен постанализ.
4. С помощью сетки аккуратно поместите одного взрослого человека в предварительно наполненный стакан из шага 1.1. Дайте взрослой рыбе акклиматизироваться в стакане в течение 10 минут.
   заметка: Запишите пол взрослого человека, так как после анализа может быть важно найти различия, специфичные для пола.
5. После акклиматизации в стакане введите рыб в новый аквариум (подробности о настройке ниже), осторожно вылив воду и взрослую особь из стакана.
   заметка: Шаги, описанные в этом разделе, описывают настройку нового резервуарного анализа. Диаграмма конечного продукта представлена на рисунке 1В.
   1. Поставьте бак для романа в центр стола.
   2. Расположите инфракрасные лампы за баком и поместите белый акриловый лист или экран диффузора между баком и светодиодным источником света.
   3. Расположите рассеиватель так, чтобы он максимально распространял свет, идущий от светодиодов, а интенсивности света хватало для освещения нового бака. Чем ближе доска к источнику света, тем ярче будет свет, но тем меньше он будет рассеиваться. Напротив, размещение платы рассеивателя вдали от источника света снизит интенсивность света, но лучше распределит свет.
   4. Заполните примерно три четверти нового аквариума водой для рыбной системы.
      заметка: Системная вода генерируется путем обратного осмоса водопроводной воды с последующим дозированием таким образом, чтобы проводимость составляла 900 ± 100 мкС, чтобы pH был нейтральным (7,2), а температура составляла 27 ± 1 °C.
   5. Прикрепите камеру к подставке для камеры и подключите камеру к компьютеру. Откройте программное обеспечение для сбора видео и настройте камеру так, чтобы она была обращена к передней части аквариума, чтобы убедиться, что новый аквариум виден целиком, и что на видео нет затемненных областей. Отрегулируйте аквариум и инфракрасные источники света таким образом, чтобы при наблюдении через камеру было достаточное и равномерное освещение по всему аквариуму.
      заметка: Прежде чем приступать к экспериментам, часто бывает полезно провести пробный прогон, в ходе которого снимается видео рыбы и выполняется отслеживание. Это гарантирует, что установка достаточна для экспериментирования с поведением.
6. После того, как взрослый человек будет помещен в новый аквариум, включите камерную запись и отойдите от установки, чтобы предотвратить дополнительные неудобства для рыб.
7. После того, как запись будет завершена, извлеките особь из нового резервуара и поместите в новый резервуар для хранения.
   заметка: Для предотвращения повторного тестирования на одних и тех же людях следует использовать резервуар для хранения, отличный от того, который показан на шаге 1.2.

Результаты

Рисунок 1. Схема устройства нового бака.(A) Размеры нового трапециевидного бака объемом 1,8 л, видимые со стороны записывающей стороны бака. (B) Схема установки, включая расположение инфракрасных источников света, камеры и барьеров, используемых для минимизации вмешательства человека.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
фотоаппарат			Мы используем USB-камеру Point Grey Grasshopper3 с объективом от Edmund Optics.
Инфракрасный фильтр	Эдмунд Оптикс
Программа сбора видео			Используйте такие программы, как Virtualdub или FlyCapture, потому что частоту кадров при захвате можно установить.
Инфракрасные светодиодные фонари
Пробирный резервуар	Акванерия	Номер для заказа: ZT180	Размер: M3 1,8 литра
Подставка и зажим, или стандартный штатив для камеры
Стакан 250 мл
Программное обеспечение для отслеживания			Мы используем Ethovision XT 13 от Noldus Information Technology