Анализ передвижения личинок: высокопроизводительный метод изучения нейроповеденческой токсичности соединения у личинок рыбок данио

Аннотация

Источник: Zhang B., et al. Изучение нейроповеденческих эффектов загрязнителей окружающей среды на личинок данио-рерио. J. Vis. Exp. (2020)

В этой статье описывается поведенческая реакция рыбок данио на токсичные соединения путем мониторинга передвижения личинок. Далее в протоколе рассматривается пример реакции личинок данио рерио на загрязнитель окружающей среды.

Протокол

1. Подготовка к поведенческому тесту

1. Перенесите 800 μл раствора для экспонирования в каждую лунку 48-луночного микропланшета.
   заметка: Используйте по 16 лунок для каждой группы (т.е. контрольный раствор, 5 мкг/л и 50 мкг/л).
2. С помощью наконечника для пипетки объемом 1 мл переведите 200 мкл раствора экспозиции с одной личинкой из стеклянной чашки Петри в одну лунку из 48-луночного микропланшета.
3. Перенесите 4 мл раствора экспозиционного раствора в каждую лунку микропланшета на 6 лунок.
   заметка: Используйте одну микропланшет на 6 лунок для каждой группы.
4. С помощью наконечника для дозатора объемом 1 мл переведите 200 мкл раствора для воздействия с двумя личинками в каждую лунку микропланшета на 6 лунок.
   заметка: В каждой группе есть шесть повторяющихся групп.
5. За 2 часа до испытания убедитесь, что температура в испытательном помещении составляет 28 °C.
   заметка: Поведенческие тесты обычно проводятся во второй половине дня.

2. Тест на передвижение и угол траектории

1. Сохраните протокол и выключите свет в тестовой комнате.
2. Акклиматизируйте личинок в системе в течение 10 мин и по очереди нажимайте кнопку «Эксперимент», «Выполнить», затем выберите папку, где сохраняются файлы эксперимента и введите название результата.
3. Нажимайте по очереди кнопку «Фон», «Старт», чтобы начать тест.
4. Нажимайте по очереди кнопку "Эксперимент", "Стоп", чтобы остановить эксперимент по окончании теста.
   заметка: Система показывает проверенные данные при остановке системы. Данные включают в себя отслеживаемое расстояние в трех классах скорости и номера углов траектории в восьми классах углов каждую минуту. Для теста на локомоцию в представленном примере вычисляется общее расстояние за каждый световой период (10 минут) и сравнивается разница между контрольной группой и группами лечения.
5. Перенесите микропланшет на 48 лунок обратно в световой инкубатор для проведения других экспериментов.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
48-луночный микропланшет	Корнинг	No 3548	Корпус Embyros
6-луночный микропланшет	Корнинг	No 3471	Корпус Embyros
Зебрабокс	точка зрения	ЗебраБокс	Инструмент поведения
Лаборатория ZebraLab	точка зрения	Лаборатория ZebraLab	Поведенческое программное обеспечение
пипетка	Эппендорф	3120000267	Решение для переноса