Методическая статья

Анализ передвижения личинок: высокопроизводительный метод изучения нейроповеденческой токсичности соединения у личинок рыбок данио

30 апреля 2023 г.

В этой статье

Аннотация

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Источник: Zhang B., et al. Изучение нейроповеденческих эффектов загрязнителей окружающей среды на личинок данио-рерио. J. Vis. Exp. (2020)

В этой статье описывается поведенческая реакция рыбок данио на токсичные соединения путем мониторинга передвижения личинок. Далее в протоколе рассматривается пример реакции личинок данио рерио на загрязнитель окружающей среды.

Протокол

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Подготовка к поведенческому тесту

  1. Перенесите 800 μл раствора для экспонирования в каждую лунку 48-луночного микропланшета.
    заметка: Используйте по 16 лунок для каждой группы (т.е. контрольный раствор, 5 мкг/л и 50 мкг/л).
  2. С помощью наконечника для пипетки объемом 1 мл переведите 200 мкл раствора экспозиции с одной личинкой из стеклянной чашки Петри в одну лунку из 48-луночного микропланшета.
  3. Перенесите 4 мл раствора экспозиционного раствора в каждую лунку микропланшета на 6 лунок.
    заметка: Используйте одну микропланшет на 6 лунок для каждой группы.
  4. С помощью наконечника для дозатора объемом 1 мл переведите 200 мкл раствора для воздействия с двумя личинками в каждую лунку микропланшета на 6 лунок.
    заметка: В каждой группе есть шесть повторяющихся групп.
  5. За 2 часа до испытания убедитесь, что температура в испытательном помещении составляет 28 °C.
    заметка: Поведенческие тесты обычно проводятся во второй половине дня.

2. Тест на передвижение и угол траектории

  1. Сохраните протокол и выключите свет в тестовой комнате.
  2. Акклиматизируйте личинок в системе в течение 10 мин и по очереди нажимайте кнопку «Эксперимент», «Выполнить», затем выберите папку, где сохраняются файлы эксперимента и введите название результата.
  3. Нажимайте по очереди кнопку «Фон», «Старт», чтобы начать тест.
  4. Нажимайте по очереди кнопку "Эксперимент", "Стоп", чтобы остановить эксперимент по окончании теста.
    заметка: Система показывает проверенные данные при остановке системы. Данные включают в себя отслеживаемое расстояние в трех классах скорости и номера углов траектории в восьми классах углов каждую минуту. Для теста на локомоцию в представленном примере вычисляется общее расстояние за каждый световой период (10 минут) и сравнивается разница между контрольной группой и группами лечения.
  5. Перенесите микропланшет на 48 лунок обратно в световой инкубатор для проведения других экспериментов.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
48-луночный микропланшет Корнинг No 3548Корпус Embyros
6-луночный микропланшет Корнинг No 3471Корпус Embyros
Зебрабокс точка зрения ЗебраБокс Инструмент поведения
Лаборатория ZebraLab точка зрения Лаборатория ZebraLab Поведенческое программное обеспечение
пипетка Эппендорф 3120000267Решение для переноса

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Zebrafish LarvaeLocomotion AssayNeurobehavioral ToxicityEnvironmental PollutantHigh Throughput MethodBehavioral TestingLight Dark CycleDistance TraveledCompound Exposure48 Well Plate

Похожие статьи