Вскрытие кишечника у взрослых рыбок данио-рерио: методика анализа абсорбции соединений

Аннотация

Источник: Jie J. et al., Оральная интубация взрослых рыбок данио-рерио: модель для оценки поглощения биологически активных соединений в кишечнике. J. Vis. Exp. (2018).

В этом видео описывается техника выделения кишечника для оценки усвоения кишечником биоактивных соединений. В этом образце мы изолируем кишечник взрослой рыбки данио, чтобы проанализировать усвоение иммуностимуляторов.

Протокол

1. Вскрытие кишечника рыбок данио

1. Через определенный период времени после интубации (например, через 5 ч и/или 24 ч) поместите рыбу с помощью сачка в раствор этил3-аминобензоатметасульфоната (MS-222) с концентрацией 300 мг/л для эвтаназии. Убедитесь, что оперкулум перестает двигаться и отсутствует рефлекс защемления хвоста. Обычно достаточно пяти минут.
2. Возьмите усыпленное животное с помощью сачка и положите его на фильтровальную бумагу.
   заметка: Фильтровальная бумага очень полезна для удаления адгезивной ткани вдоль кишечника.
3. С помощью острых ножниц для рассечения сделайте полукруглый разрез от анального отверстия до оперкулума и открытый разрез с помощью тонкого пинцета. Разрежьте оба конца кишечника, выньте все внутренние органы и положите их на фильтровальную бумагу><. осторожность: Работайте быстро, чтобы снизить клеточный метаболизм и смерть.
   заметка: В качестве альтернативы можно удалить клейкую салфетку в PBS и на льду.
4. Отделите кишечник от внутренних органов, соблюдая его ориентацию (от переднего к заднему сегменту кишечника) и растяните его. Как правило, передний сегмент кишечника шире заднего. Позаботьтесь о том, чтобы получить весь кишечник при вскрытии.
   заметка: Задний конец довольно тонкий и хрупкий у мелких рыб и может отламываться, особенно у животных <0,7 г.
5. Раскатайте кишечник по фильтровальной бумаге с помощью пинцета, чтобы отделить адгезивную ткань от кишечника.
6. Приступайте к подготовке кишечника к различным последующим анализам

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
МС-222	Сигма Олдрич	Е10521	порошок
10x PBS	Сигма Олдрич	П5493
фильтровальная бумага	Фильтр-Лаборатория	RM14034252