Внутрипротоковая инъекция: введение инъекционной смеси в протоки молочной железы мыши

Аннотация

Источник: Xiang, D., et al. Моделирование рака молочной железы путем внутрипротоковой инъекции аденовируса, экспрессирующего Cre, в молочную железу мыши. J. Vis. Exp (2019).

В этом видео описывается техника внутрипротоковой инъекции, при которой мы доставляем инъекционную смесь в протоки молочных желез мыши.

Протокол

1. Внутрипротоковая инъекция

1. Используйте асептические методы на протяжении всей хирургической процедуры.
2. Сделайте место разреза на коже на длине ~1 см между двумя четвертыми паховыми МГ (Рисунок 1). Осторожно отделите кожный лоскут (с помощью MG) от теменной брюшины так, чтобы визуализировать молочное протоковое дерево.
3. Осторожно удерживайте сосок с помощью щипцов часовщика и удалите внешний сосок, не разрезая близлежащую кожу, с помощью ножниц для микродиссекции.
4. Загрузите ~3–5 μL инъекционной смеси Ad-Cre в шприц Hamilton объемом 25 μL с прикрепленной металлической иглой 33 G. Оцените объем инъекционной смеси в шприце в зависимости от синего красителя, входящего в состав смеси.
   заметка: Используйте меньший объем (например, 3 мкл) при введении в МГ 3–4-недельным самкам и больший объем (например, 10 мкл) при введении в МГ кормящим самкам.
5. Аккуратно удерживайте край кожного лоскута тонким изогнутым пинцетом и медленно вводите инъекционную смесь Ad-Cre в сосок, одновременно наблюдая за распространением синего красителя в молочном протоковом дереве. Поддерживайте скорость впрыска как можно ниже, чтобы избежать повреждения просвета протока.
   заметка: Введенная жидкость (как иллюстрируется входящим в состав бромфеноловым синим красителем), распространяющаяся по всему протоковому дереву, не просачиваясь в стромальный компартмент, свидетельствует об успешной внутрипротоковой инъекции.
6. Осторожно извлеките иглу из соска, чтобы избежать утечки введенной жидкости.
7. Осмотрите дистальную сторону (т.е. вдали от соска) MG или окружающую область инъекционного соска. Обратите внимание, что набухающий синий краситель (т.е. краситель, диффундирующий в близлежащую строму) указывает на инъекцию жирового пакета молочной железы, а не на успешную внутрипротоковую инъекцию.
8. Закройте операционные раны (от 1,2) на коже раневыми зажимами.

2. Послеоперационный уход

1. Извлеките мышь из наркоза и положите ее на грелку внутри чистой клетки для восстановления.
2. Повторно введите мелоксикам подкожно в дозе 5 мг/кг через 24 ч после операции.
3. Следите за общим состоянием животного и ищите признаки инфекции в месте разреза в течение 5 дней.
4. Раневые зажимы удаляются через ~7-10 дней после операции.

Результаты

Рисунок 1: Принципиальная схема внутрипротокового введения вируса Ad-Cre в МГ.(А) Место разреза по средней линии между двумя четвертыми МГ. (В) Внутрипротоковая инъекция Ad-Cre с синим красителем (для лучшей визуализации) в одну из четвертых МГ. (В) Закрытие разреза на коже раневыми зажимами

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Игла 33 калибра	Гамильтон	7803-05	Стиль точки 3 тупой
Зеркальный зажим 7 мм	Брейнтри Сайентиал	РФ7 КС
Аденовирус, Ad-K5-Cre	Ядро вирусного вектора Университета Айовы	Ad5-bk5-Cre (VVC-Berns-1547)
Аденовирус, Ad-K8-Cre	Ядро вирусного вектора Университета Айовы	Ad5mK8-nlsCre
Бромфенол синий	Сигма-Олдрич	В0126-25Г
Шприц Гамильтона	Гамильтон	7636-01	0,025 мл
Ножницы для микрорассечения	Пентаир	9 МИН.	Щипцы часовщика
Микрорассекающий пинцет	Дюмон	М5