Интрабронхиальная доставка: метод селективного введения экспериментального агента в легкое мыши.

Аннотация

Источник: Liao, S. et al. Прямое интрабронхиальное введение для улучшения селективного отложения агента в легких мыши. J. vis. Exp. (2019).

Это видео описывает интрабронхиальный подход к избирательному введению экспериментального агента в дистальный отдел правого и левого легкого. В представленном протоколе мы будем вводить блеомицин внутрибронхиально мыши, чтобы получить лучшую модель легочного фиброза.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были рассмотрены местным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.

1. Неоперативная интубация и доставка IB

1. Подход IB к селективной долевой канюляции дистального отдела правого легкого
   1. После выполнения интратрахеальной (IT) канюляции (используйте доминирующую руку для интубации расширенного катетера в трахею через ротовую полость) поверните пластиковую доску на +30° (рис. 1A).
   2. Возьмитесь за ступицу катетера и направляйте ее естественным образом параллельно средней линии мыши, расширяя ее на глубину, зависящую от веса, как описано в таблице 1.
      заметка: Следует отметить сопротивление на этих глубинах. На этом этапе мышь станет слегка тахипноэистической, как объясняется в репрезентативных результатах. Для опытного оператора примерно 90% попыток будут успешными канюлированными правым легким (с отмечаемым тахипноэ).
   3. Подайте 20 μL 0,3% синего красителя Эванса (EBD, см. Таблицу материалов) с помощью гелеобразного наконечника.
   4. Выдавите 1–2 аликвоты (0,1 мл каждая) воздуха с помощью стеклянной пипетки.
      заметка: Это обеспечивает выведение остаточного раствора EBD (или экспериментальных агентов) изнутри катетера.
   5. Извлеките катетер, затем удерживайте положение мыши в течение 30 с.
   6. Положите животное на согревающее одеяло до тех пор, пока оно не придет в сознание. Восстановление обычно завершается в течение 2 минут.
2. Подход IB к селективной сегментарной канюляции дистального отдела левого легкого
   1. После выполнения IT-канюляции (используйте доминирующую руку для интубации расширенного катетера в трахею через ротовую полость) поверните пластиковую доску на -74° (рис. 1B).
   2. Возьмитесь за ступицу катетера и слегка надавите, чтобы продвинуть катетер в левый главный бронх, оказывая при этом умеренное давление как вниз (90°), так и по направлению к концу книги. На глубинах, указанных в таблице 1, оператор должен обратить внимание на сопротивление при задействовании нижних сегментов левого легкого. При возникновении тахипноэ отведите катетер в положение 20–25 мм и повторите попытку.
   3. После канюлирования левых нижних сегментов легкого требуется изменение положения, чтобы обеспечить гравитационную помощь для введения агента. Поверните пластиковую доску на -30° (рисунок 1B).
   4. Подайте 40 μL 0,3% EBD с помощью наконечника для загрузки геля.
      заметка: Возможно доставить большее количество препарата, потому что левое легкое имеет только одну долю.
   5. Выдавите 1–2 аликвоты (0,1–0,3 мл каждая) воздуха с помощью стеклянных пипеток.
      заметка: Это обеспечивает выведение любых остаточных EBD (или экспериментальных агентов) изнутри катетера.
   6. Извлеките катетер, затем удерживайте положение мыши в течение 30 с.
   7. Положите животное на согревающее одеяло до тех пор, пока оно не придет в сознание. Восстановление обычно завершается в течение 2 минут.

Результаты

Рисунок 1: Подход к селективной канюляции и введению доли правого/левого легкого.(A) Чтобы нацелиться на правое легкое, пластиковая доска поворачивается на +30°, что облегчает селективное зацепление с правым бронхом главного ствола. Катетер усовершенствован (в соответствии с расстояниями, предложенными в таблице 1) для селекти...

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Экранированный катетер для внутривенного введения 22 г	БД	381423
Синий краситель Эванса	Сигма-Олдрич	Е2129
LED-30W Волоконно-оптический светильник с двойным гусиным шеем Осветитель для микроскопа	АмСкоп	Светодиод-30 Вт
Игла Precisionglide, 18G x 1"	БД	305195	Скошенный наконечник, длина 12 мм